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高硼暴露通过诱导细胞焦亡加剧鸡肝细胞损伤

畜牧兽医学报 2024年

作者：何婷刘思颖全锦雯苏伟谦黄江利李玙萌刘忠华余文兰华南农业大学兽医学院华南农业大学实验动物中心

旨在探索硼暴露诱导鸡肝细胞损伤的作用机制。试验选取30只AA肉品鸡随机分为对照组（CG）、低硼组（LBG）和高硼组（HBG），在基础日粮中分别添加不同剂量硼进行饲喂：基础日粮(硼 0 mg · kg-1)，低硼日粮(硼 120 mg · kg-1)、高硼日... 详细信息

旨在探索硼暴露诱导鸡肝细胞损伤的作用机制。试验选取30只AA肉品鸡随机分为对照组（CG）、低硼组（LBG）和高硼组（HBG），在基础日粮中分别添加不同剂量硼进行饲喂：基础日粮(硼 0 mg · kg-1)，低硼日粮(硼 120 mg · kg-1)、高硼日粮(硼 240 mg · kg-1)，处理7 d及14 d后采集肝组织。使用ICP-MS测定肝组织中的硼含量，全自动血生化分析仪检测ASL及ALT水平，HE染色观察肝组织病理变化，透射电镜观察肝细胞超微结构变化，免疫组化和免疫荧光检测肝细胞焦亡相关蛋白NLRP3及IL-1β定位表达情况，RT-qPCR和Western blot 检测NLRP3、Casapse-1、IL-1β、IL-18和GSDMD的mRNA和蛋白表达水平。结果显示，蓄积于肝组织中的硼含量随着硼暴露时间和剂量的增加而增加。此外，14 d-低硼组（14 d-LBG）和高硼组（14 d-HBG）的肝组织结构明显破坏，并且细胞焦亡水平随硼剂量的增加而加剧；与同时间的CG相比，14 d-LBG中NLRP3、Caspase-1、IL-18的mRNA表达水平显著上升（P<0.05），14 d-HBG的NLRP3、Caspase-1、IL-1β、IL-18及GSDMD的mRNA和蛋白表达水平显著上升（P<0.05）。高硼暴露可通过诱导细胞焦亡进而造成鸡肝细胞损伤。

关键词：硼细胞焦亡鸡肝细胞

基于改进ConvNeXt模型的黄羽鸡表皮层黑色素智能分级方法

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农业工程学报 2024年第3期40卷 165-174页

作者：肖德琴陈芳玲刘又夫谢青梅张新珩华南农业大学农业农村部华南热带智慧农业技术重点实验室广州510642 华南农业大学数学与信息学院广州510642 华南农业大学动物科学学院广州510642

为解决活体黄羽鸡表皮层黑色素分级方法成本高、效率低下、分级环境易受环境光干扰等问题,该研究探索一种基于ConvNeXt模型的黄羽鸡表皮层黑色素智能分级方法ConvNeXt-WPCA,用于实现活体黄羽鸡表皮层黑色素智能分级。ConvNeXt-WPCA模型... 详细信息

为解决活体黄羽鸡表皮层黑色素分级方法成本高、效率低下、分级环境易受环境光干扰等问题,该研究探索一种基于ConvNeXt模型的黄羽鸡表皮层黑色素智能分级方法ConvNeXt-WPCA,用于实现活体黄羽鸡表皮层黑色素智能分级。ConvNeXt-WPCA模型通过以下3点改进提高模型对黄羽鸡黑色素的识别效果:1)针对黄羽鸡黑色素图像RGB三通道内黑色素信息分布不均衡问题,改变输入图片通道权重来增强模型对黑色素特征的提取能力;2)使用部分卷积代替深度可分离卷积,减少模型计算量和内存访问次数提高对计算资源的利用率;3)引入坐标注意力机制,引导模型关注黄羽鸡胸腹部及肛门附近皮肤提升模型精度。同时,该研究还设计一种双光源图像获取装置,分别在自然光和偏振光条件下拍摄黄羽鸡样本,以减小分级结果受环境光干扰的影响,并探索偏振光在黑色素分级任务中的应用潜力。结果表明ConvNeXt-WPCA模型相较标准ConvNeXt模型,针对自然光下黄羽鸡黑色素图像数据集分级准确率提升9.68个百分点,最终达到89.03%的识别准确率,针对偏振光下黄羽鸡黑色素图像数据集分级准确率提升15.26个百分点,最终达到98.87%的识别准确率。该研究证实基于偏振光条件获取的黄羽鸡表皮层黑色素图像分级效果优于自然光条件,提出的ConvNeXt-WPCA黄羽鸡表皮层黑色素分级方法识别准确率高,同时模型参数量及浮点计算量均有降低,为黄羽鸡表皮层黑色素智能分级实际应用提供了理论基础及技术支持。

关键词：模型深度学习注意力机制黄羽鸡 ConvNeXt 品质分级偏振光

我国中东部主要养猪地区死亡育肥猪呼吸道病原菌的流行病学调查及猪多杀性巴氏杆菌的特性鉴定

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中国农业科学 2024年第11期57卷 2254-2264页

作者：罗素贤周红蔺辉星范红结南京农业大学动物医学院

【目的】从我国中东部主要养猪地区因呼吸道疾病死亡的育肥猪病料中分离主要病原菌，并进行鉴定和分型，为近年流行的猪呼吸道病原菌的防控治疗提供流行病学依据。此外，对分离的猪多杀性巴氏杆菌（Pm）特性进行鉴定，为Pm疫苗研制提供... 详细信息

【目的】从我国中东部主要养猪地区因呼吸道疾病死亡的育肥猪病料中分离主要病原菌，并进行鉴定和分型，为近年流行的猪呼吸道病原菌的防控治疗提供流行病学依据。此外，对分离的猪多杀性巴氏杆菌（Pm）特性进行鉴定，为Pm疫苗研制提供参考。【方法】收集2021-2023年我国中东部主要养猪地区规模化猪场因呼吸道疾病死亡的育肥猪的病猪肺脏；用血琼脂和TSA培养基分离病原菌，通过微生物学和分子生物学方法鉴定分离菌株；合成adk、est、gdh、mdh、pgi、pmi和zwf基因引物，以分离的Pm为模板进行PCR，通过测序7对管家基因对Pm进行MLST分型；通过PCR对Pm进行荚膜分型和脂多糖分型；通过PCR对Pm的毒力因子进行检测；在ICR小鼠对单一分离的A型和部分D、F型Pm进行毒力鉴定；检测JS-65、JS-51和JS-34在ICR小鼠的LD50。【结果】共分离Pm 73株，分离率为15.53%；分离猪链球菌（SS）71株、猪胸膜肺炎放线杆菌（APP）29株和副猪格拉菌（GPS）10株，分离率分别为15.11%、6.17%和2.13%。分型结果表明，Pm主要为A:L3型，占55%;SS主要为9型，占38.03%;APP主要为15型，占51.72%;GPS主要为5/12型，占60%。混合感染包括Pm+SS,Pm+APP,SS+APP和Pm+APP+GPS，混合感染占总猪群的16.67%。共分离到3种Pm荚膜型：A（67%）、D（30%）和F（3%）型；2种脂多糖型：L3型（56%）和L6型（44%）;9种ST分型：ST79、ST50、ST7、ST74、ST13、ST27、ST9、ST287和ST370，所占比例分别为33%、26%、16%、10%、4%、4%、3%、3%和1%。毒力基因检测结果表明：ptfA、fimA、hsf-2、exbB、exbD、tonB、fur、nanH、sodA和sodC的阳性率大于95%;hsf-1、pfhA、tadD、hgbA、hgbB、pmHAS、ompA、ompH、oma87和plpB阳性率在40%-90%之间；tbpA和nanB阳性率在10%-30%；未检出toxA。毒力鉴定结果表明A型菌株在剂量小于102 CFU时导致小鼠全部死亡，D型菌株在103 CFU剂量时小鼠死亡率为60%-100%,F型菌株在5×10～3 CFU剂量时小鼠死亡率为60%。在ICR小鼠检测JS-65、JS-51和JS-34的LD50，结果表明JS-65 LD50<10 CFU,JS-51 LD50=6.3×102 CFU,JS-34 LD50=3.98×10～3 CFU。【结论】2021-2023年我国中东部主要养猪地区病原菌分离结果表明，Pm、SS、APP和GPS是死亡育肥猪的主要呼吸道病原菌，Pm在肺脏中的分离率最高。采用RIRDC分型鉴定到一株ST370 Pm，拓展了猪Pm的MLST分型数据。Pm优势基因型为A:L3:ST79，其在ICR小鼠中毒力最强，最小致死量小于10 CFU，为后续Pm灭活疫苗研制奠定基础。

关键词：流行病学猪多杀性巴氏杆菌鉴定分子分型

不同规格缝线对猫腹壁组织炎症反应与缝合强度的影响

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南京农业大学学报 2024年第05期47卷 948-956页

作者：李帅郭以哲赵兴凯郎东周振雷南京农业大学动物医学院

[目的]缝线可为手术切口提供充足的作用力并维持创缘对合，促进愈合，但缝线引起的异物反应可加剧组织炎症，影响组织愈合。本试验旨在探究不同规格缝线缝合猫腹壁后缝合强度及组织炎症反应差异。[方法]取猫皮肤与肌肉组织样本，使用USP... 详细信息

[目的]缝线可为手术切口提供充足的作用力并维持创缘对合，促进愈合，但缝线引起的异物反应可加剧组织炎症，影响组织愈合。本试验旨在探究不同规格缝线缝合猫腹壁后缝合强度及组织炎症反应差异。[方法]取猫皮肤与肌肉组织样本，使用USP 2-0、3-0、4-0、5-0 PGA缝线缝合，测定组织缝合强度。在猫腹壁肌肉植入不同规格缝线，分别于植入后1、14和90 d采样，检测炎性因子水平，评估炎症反应强度。[结果]在体外试验中，USP 5-0 PGA缝线组发生更多的缝线断裂，在50%应变以下，各组间应力无显著差异(P>0.05);最大抗张力时，各组间应变、应力及抗张力均无显著差异(P>0.05)。猫肌肉植入缝线后1和14 d,植入处炎性因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的mRNA和蛋白表达水平随缝线直径减小而减少，大直径缝线周围组织炎症反应更加剧烈(P<0.05)。[结论]USP 5-0 PGA可满足猫腹壁手术切口缝合张力需求，且小直径缝线可减少缝线引起的组织炎症。

关键词：缝线规格缝合强度组织炎症猫

猪源CXCL17的原核表达及其对猪巨噬细胞的趋化作用

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南京农业大学学报 2024年第05期47卷 932-940页

作者：齐佳欣钟秋刘芮伶郑健李昱辰杨倩南京农业大学动物医学院

[目的]本研究旨在探究CXC趋化因子配体17（CXC motif chemokine ligand 17,CXCL17）对巨噬细胞的趋化作用并解析其分子机制。[方法]构建表达猪CXCL17蛋白的重组菌，该菌经IPTG诱导后高效表达CXCL17蛋白，并主要以包涵体形式存在；包涵... 详细信息

[目的]本研究旨在探究CXC趋化因子配体17（CXC motif chemokine ligand 17,CXCL17）对巨噬细胞的趋化作用并解析其分子机制。[方法]构建表达猪CXCL17蛋白的重组菌，该菌经IPTG诱导后高效表达CXCL17蛋白，并主要以包涵体形式存在；包涵体经过变性、纯化和复性获得重组蛋白，利用SDS-PAGE和Western blot对纯化的CXCL17蛋白进行验证。通过CCK-8法筛选CXCL17蛋白对猪巨噬细胞的最佳作用浓度范围，并以此设置浓度梯度处理猪巨噬细胞，用Transwell试验检测CXCL17对巨噬细胞的趋化活性。通过免疫荧光和Western blot检测细胞微丝骨架的变化及相关通路的激活情况，以揭示CXCL17趋化巨噬细胞迁移的作用机制。[结果]重组菌在IPTG终浓度为1.0 mmol·L-1及37℃诱导条件下表达7 h,获得高表达量的重组猪CXCL17蛋白。该蛋白纯化后的纯度可高达95%。重组猪CXCL17蛋白可以剂量依赖诱导猪巨噬细胞迁移，其机制为通过激活微丝骨架下游的LIMK/Cofilin信号通路引起细胞微丝骨架重排，促进细胞微丝骨架解聚、聚合，从而有利于巨噬细胞迁移。[结论]本研究重组表达了猪CXCL17蛋白，并发现CXCL17蛋白调控细胞微丝骨架诱导猪巨噬细胞迁移的分子机制，为CXCL17作为黏膜免疫增强剂提供了试验依据。

关键词： CXC趋化因子配体17 原核表达巨噬细胞迁移黏膜免疫

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IL-23、VEGFA和TGF-β对小鼠肿瘤免疫微环境的影响

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中国兽医科学 2024年

作者：苏伟谦刘泳琪刘思颖何婷全锦雯黄江利李玙萌刘忠华华南农业大学兽医学院华南农业大学实验动物中心

为探究白介素-23（IL-23）、血管内皮生长因子（VEGFA）、转录生长因子β（TGF-β）过表达对于肿瘤生长以及肿瘤免疫微环境的影响，采用慢病毒转染构建稳定过表达IL-23、VEGFA、TGF-β的B16小鼠黑色素瘤和MC38小鼠结肠癌细胞株，建立小... 详细信息

为探究白介素-23（IL-23）、血管内皮生长因子（VEGFA）、转录生长因子β（TGF-β）过表达对于肿瘤生长以及肿瘤免疫微环境的影响，采用慢病毒转染构建稳定过表达IL-23、VEGFA、TGF-β的B16小鼠黑色素瘤和MC38小鼠结肠癌细胞株，建立小鼠皮下移植瘤模型，定期记录肿瘤生长情况，流式细胞仪检测肿瘤中免疫细胞浸润水平；HE染色检测肿瘤组织结构及病理；RT-qPCR法检测肿瘤中相关炎症因子的表达。结果显示，与对照组相比，IL-23过表达后，B16和MC38肿瘤生长速度下降并且CD8+T细胞与DC细胞浸润比例均显著上升；VEGFA过表达后，B16肿瘤生长速度显著下降，部分抗肿瘤作用的免疫细胞比例显著上升，微血管数量显著多于对照组；TGF-β过表达后，MC38肿瘤生长速度显著下降，CD8+T细胞及DC细胞的浸润比例显著上升，TNF-α表达水平与对照组相比显著下降。以上结果表明，IL-23、VEGFA和TGF-β过表达对B16肿瘤和MC38肿瘤的抑制程度有差异，VEGFA可能通过改变微血管数量的方式改变B16肿瘤免疫微环境从而显著抑制肿瘤生长，TGF-β可能通过直接作用于肿瘤免疫细胞改变免疫微环境与抑制TNF-α表达显著抑制MC38肿瘤生长，IL-23可能通过增加免疫微环境中部分免疫细胞浸润从而一定程度抑制B16和MC38肿瘤的生长。本研究为细胞因子免疫治疗提供了新的实验依据，同时也为不同恶性程度的肿瘤提供免疫治疗参考。

关键词：肿瘤肿瘤免疫微环境细胞因子肿瘤模型基因过表达

驽巴贝虫metacaspase基因的克隆、表达、反应原性鉴定和生物信息分析

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中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2024年第3期42卷 325-331页

作者：任冀超甘露郑会珍冯秀娟崔泽云李佳欣金依璇张伟郭庆勇巴音查汗·盖力克李永畅新疆农业大学动物医学学院乌鲁木齐830052

目的克隆、表达驽巴贝虫精氨酸/赖氨酸特异性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(BcMC),鉴定其反应原性并分析其生物学信息。方法根据驽巴贝虫部分基因序列设计并合成Bcmc基因扩增引物,采用PCR扩增Bcmc基因并克隆至原核表达载体pET-28a,提取质粒p... 详细信息

目的克隆、表达驽巴贝虫精氨酸/赖氨酸特异性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(BcMC),鉴定其反应原性并分析其生物学信息。方法根据驽巴贝虫部分基因序列设计并合成Bcmc基因扩增引物,采用PCR扩增Bcmc基因并克隆至原核表达载体pET-28a,提取质粒pET-28a-Bcmc进行双酶切、PCR和测序鉴定,将重组质粒转入感受态细胞大肠埃希菌BL21 (DE3),优化诱导条件后,选择最适异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)浓度、诱导温度和时间诱导,采用12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析重组蛋白的表达情况。用His标签蛋白纯化试剂盒纯化重组蛋白后,以驽巴贝虫感染阳性马血清为一抗,Western blotting分析重组蛋白的反应原性。采用ProtParam等生物信息学在线软件预测Bcmc基因的理化性质、磷酸化位点、亚细胞定位、抗原表位、二级和三级结构、蛋白互作网络,对比BcMC与疟原虫属MC-1 (PsMC-1)和泰氏锥虫MC (TtMC)的三级结构。Bcmc序列在NCBI上进行BLAST比对,使用Mega 7.0软件,采用邻接法构建基于mc基因序列的系统进化树。结果Bcmc基因PCR扩增产物约为996 bp,与预期片段一致。重组质粒pET-28a-Bcmc经双酶切、PCR和测序鉴定表明插入的目的基因正确。诱导条件优化结果显示,BcMC重组蛋白在IPTG终浓度为0.8 mmol/L、37℃培养5 h时的表达量最高。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白以包涵体的形式表达,相对分子质量(Mr)约为36 000。Western blotting结果表明,纯化后的BcMC可与驽巴贝虫感染阳性马血清发生特异性反应。生物信息学分析结果显示,BcMC的Mr为36 956.72;具有25个磷酸化点位;亚细胞定位预测位于线粒体的比例为10%;B细胞抗原表位分析发现该蛋白含有12个潜在抗原表位;BcMC蛋白的二级结构中,无规则卷曲占50.30%、α-螺旋占23.19%;BcMC的三级结构与PsMC-1和TtMC相似;蛋白互作网络预测结果显示,与BcMC相互作用的蛋白及BcMC参与的生物过程均与细胞凋亡有关。BLAST比对结果和系统进化树分析结果显示,Bcmc与马泰勒虫(CP099439)、马泰勒虫WA株(XM_004830992)的mc基因序列一致性均为99.90%,进化树上聚为一支,亲源关系较近。结论 BcMC原核表达蛋白具有良好的反应原性,生物信息学分析表明BcMC参与驽巴贝虫凋亡的生物过程。

关键词：驽巴贝虫精氨酸/赖氨酸特异性半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶马反应原性生物信息分析

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调控丝素蛋白膜的力学性能研究进展

丝绸 2024年第4期61卷 50-61页

作者：刘海宇梁文安王叶元胡豆豆孙京臣华南农业大学动物科学学院广州510642

作为一种潜在的生物材料,以丝素蛋白制备的膜材料越来越多地应用到生物医学领域。丝素蛋白膜的力学性能是一个重要的表征参数,对其后续的体外体内应用有较大的影响。本文先简述丝素蛋白的多级结构与力学性能的关系;然后总结制备工艺对... 详细信息

作为一种潜在的生物材料,以丝素蛋白制备的膜材料越来越多地应用到生物医学领域。丝素蛋白膜的力学性能是一个重要的表征参数,对其后续的体外体内应用有较大的影响。本文先简述丝素蛋白的多级结构与力学性能的关系;然后总结制备工艺对丝素蛋白膜力学性能的影响,阐述不同的处理方式对丝素蛋白膜微观结构的影响及由此所致的力学性能的变化。丝素蛋白膜的制备工艺包括丝素蛋白溶液的制备(先脱胶再溶解丝素)、成膜工艺(按结构形式分为致密膜、多孔膜和多层膜),以及成膜后处理(有机溶剂浸泡、水蒸气退火和外力作用)等。此外,讨论复合丝素蛋白膜中不同改性方法导致的结构变化与力学性能的关系。最后,展望丝素蛋白膜材料的发展趋势,为不同需求下的丝素蛋白膜的发展提供借鉴和参考。

关键词：丝素蛋白薄膜力学性能调控方法复合材料 “结构性能”关系

乳酸菌和纤维素酶对马蹄渣和玉米蛋白粉混合青贮饲料品质及体外瘤胃发酵特性的影响

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动物营养学报 2024年第5期36卷 3340-3351页

作者：赵超陈琼李越郭勇庆刘德武孙宝丽华南农业大学动物科学学院广州510642

本试验旨在评价不同添加剂对马蹄渣和玉米蛋白粉混合青贮饲料发酵品质、化学成分、微生物数量和体外瘤胃发酵特性的影响。将马蹄渣和玉米蛋白粉按照76∶24的比例混合均匀作为青贮原料,在青贮时分别进行如下处理:1)不添加乳酸菌和纤维素... 详细信息

本试验旨在评价不同添加剂对马蹄渣和玉米蛋白粉混合青贮饲料发酵品质、化学成分、微生物数量和体外瘤胃发酵特性的影响。将马蹄渣和玉米蛋白粉按照76∶24的比例混合均匀作为青贮原料,在青贮时分别进行如下处理:1)不添加乳酸菌和纤维素酶(CON组);2)添加1×108CFU/g乳酸菌(LAB组);3)添加50 U/g纤维素酶(CE_(50)组);4)添加100 U/g纤维素酶(CE100组);5)添加1×108CFU/g乳酸菌+50 U/g纤维素酶(LAB+CE50组);6)添加1×108CFU/g乳酸菌+100 U/g纤维素酶(LAB+CE_(100)组)。每组设3个重复,每个重复设2个平行。混合青贮60 d后打开青贮袋取样进行分析。结果显示:在化学成分方面,与CON组相比,青贮时组合添加乳酸菌和纤维素酶可以显著降低混合青贮饲料的中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、酸性洗涤木质素(ADL)、纤维素、半纤维素含量(P<0.05),同时显著提高粗蛋白质(CP)含量(P<0.05),其中以LAB+CE100组最高。发酵品质方面,LAB、LAB+CE50以及LAB+CE100组混合青贮饲料的pH及氨态氮(NH3-N)含量与CON组相比显著降低(P<0.05),同时乳酸和乙酸含量与CON组相比显著升高(P<0.05),且以LAB+CE100组最高;单独添加乳酸菌或组合添加乳酸菌与纤维素酶均可显著提高混合青贮饲料中乳酸菌的数量(P<0.05),并降低不良细菌数量或抑制不良细菌的增殖。在体外产气方面,随着发酵时间的延长,各组的产气量不断升高,其中LAB+CE100组的产气速率、48 h产气量最高。在体外瘤胃发酵参数方面,各组发酵液pH均在6.56~6.84,且与发酵时间呈负相关趋势;各添加剂组发酵液中总挥发性脂肪酸、乙酸、丙酸、丁酸含量与CON组相比均显著增加(P<0.05);添加乳酸菌的各添加剂组发酵液中乙酸/丙酸比值与CON组相比显著降低(P<0.05)。由此可见,组合添加乳酸菌和纤维素酶可改善马蹄渣和玉米蛋白粉混合青贮饲料的品质和体外瘤胃发酵特性,其中以添加1×108CFU/g乳酸菌+100 U/g纤维素酶的效果最好。

关键词：乳酸菌纤维素酶马蹄渣玉米蛋白粉混合青贮