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2018年青海省手足口病病原谱的构成及基因特征分析

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中国病原生物学杂志 2020年第11期15卷 1320-1323页

作者：范丽霞汪春翔赵生仓李崇亥王晓彤任丽萍严冬梅冀天娇刘桂香青海省疾病预防控制中心青海西宁810007 辽宁省疾病预防控制中心中国疾病预防控制中心病毒病所

目的了解2018年青海省手足口病(HFMD)病原谱的构成及基因特征,掌握HFMD主要致病原的流行规律。方法采集青海省HFMD患者的咽拭子标本共713份,进行实时荧光定量检测和病毒分离;对阳性标本进行特异性引物核酸扩增和测序分析,参考NCBI部分... 详细信息

目的了解2018年青海省手足口病(HFMD)病原谱的构成及基因特征,掌握HFMD主要致病原的流行规律。方法采集青海省HFMD患者的咽拭子标本共713份,进行实时荧光定量检测和病毒分离;对阳性标本进行特异性引物核酸扩增和测序分析,参考NCBI部分毒株序列构建基因进化树。结果2018年共采集临床确诊HFMD患者标本713份,检测到EV-A71型病毒9份,CVA16型病毒109份,CVA6型病毒510份,CVA10型病毒12份,CVA4型病毒5份,CVA2型病毒2份,柯萨奇B组病毒4份,阴性3份。其中CVA6病毒占总数的71.53%,CVA16病毒占15.29%。经测序后选取典型的15株柯萨奇病毒A、B组基因序列进行核酸序列分析,同源性在23.5%-100%之间,表明引起青海HFMD流行的非EV-A71、CVA16型柯萨奇病毒A、B组核酸序列不同基因型之间的变异性强。结论2018年青海省HFMD病毒谱包括EV-A71、CVA16、CVA6等,主要为CVA6,其次是CVA16。

关键词：手足口病柯萨奇病毒 CVA6 基因分析

北京市HIV-1 B’／C重组型分子流行特征分析

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中华医学杂志 2013年第29期93卷 2301-2304页

作者：叶景荣董晓根卢红艳郝明强苏雪丽辛若雷余双庆冯霞闫红贺雄曾毅北京市疾病预防控制中心 100013 北京市丰台区疾病预防控制中心 100013 北京工业大学生命科学与生物工程学院 100013 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

目的分析北京市HIV-1B’／C重组型毒株的分子流行特征。方法采集北京市2006-2010年新发现B’／C重组型HIV-1感染者的抗凝全血标本，分离血浆和提取病毒RNA，用反转录／巢式聚合酶链式反应扩增病毒gag基因，并进行系统进化分析。结果成... 详细信息

目的分析北京市HIV-1B’／C重组型毒株的分子流行特征。方法采集北京市2006-2010年新发现B’／C重组型HIV-1感染者的抗凝全血标本，分离血浆和提取病毒RNA，用反转录／巢式聚合酶链式反应扩增病毒gag基因，并进行系统进化分析。结果成功扩增了159例标本，CRF07-BC147例，CRF08-BC12例，CRF07-BC系统进化树中存在3个主要的亚簇，IDU-Max亚簇包含89例样本，静脉吸毒传播占71．9％，同参考株97CN001组间离散率为2．8％；IDU-Min亚簇包含22例样本，静脉吸毒传播占77．3％，组间离散率为2．8％；MSM亚簇包含34例样本，男男同性传播占67．6％，组间离散率为3．1％；3个亚簇内均无其他国家的序列，只有IDU—Max亚簇包含1条来自中国台湾的序列；核苷酸多态性分析结果显示，以***亚簇为参照，***和MSM亚簇分别有32和41个位点的核苷酸组成存在著性差异。结论首次观察到北京市流行的CRF07-BC病毒株中存在3个独立的亚簇，异性传播和静脉吸毒传播序列混杂分布，而男同传播病例则聚集成1个亚簇，应当继续对B’／C重组型分子流行特征进行监测。

关键词： HIV 分子流行病学巢式聚合酶链式反应

丙型肝炎病毒传播分子流行病学诊断技术研究进展

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中华微生物学和免疫学杂志 2016年第10期36卷 779-782页

作者：沈立萍毕胜利中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒性肝炎室北京102206

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染是导致肝硬化和肝癌发生的主要病原体之一。HCV的准种构成及病毒进化十分复杂，深入分析HCV准种构成是研究HCV传播机制的重要手段。HCV高变区（hypervariable region，HVR）是编码E1、E2／NS... 详细信息

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus，HCV）感染是导致肝硬化和肝癌发生的主要病原体之一。HCV的准种构成及病毒进化十分复杂，深入分析HCV准种构成是研究HCV传播机制的重要手段。HCV高变区（hypervariable region，HVR）是编码E1、E2／NS2的区域，该区域变异率很高，利用先进的测序技术和生物信息分析方法来分析HCV HVR准种构成，可深入了解HCV的传染来源、传播路径和进化程度。目前应用于HCV HVR准种分析的技术包括一代、二代和三代测序法及不同的生物学软件，国际上已广泛应用于HCV暴发调查溯源分析，尤其是医源性传播。当丙肝疫情发生时，通过新一代测序技术和生物学信息分析方法来进行病例溯源研究和传播路线分析，可为丙肝防控和治疗提供科学依据。

关键词：丙型肝炎病毒传播准种高变区分子流行病学

共表达H5N1流感病毒M1和HA基因的DNA疫苗与腺病毒载体疫苗的小鼠免疫评价(英文)

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生物工程学报 2011年第6期27卷 876-883页

作者：郭建强姚立红陈爱珺刘晓宇付金奇徐鹏卫张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

为评价在小鼠体内表达流感病毒M1和HA基因诱导的免疫反应,制备共表达H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)全长基质蛋白1(M1)基因和血凝素(HA)基因的重组DNA疫苗pStar-M1/HA和重组腺病毒载体疫苗Ad-M1/HA,将其按初免-加强程序免疫BALB/c... 详细信息

为评价在小鼠体内表达流感病毒M1和HA基因诱导的免疫反应,制备共表达H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)全长基质蛋白1(M1)基因和血凝素(HA)基因的重组DNA疫苗pStar-M1/HA和重组腺病毒载体疫苗Ad-M1/HA,将其按初免-加强程序免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔14 d。第1、3次用DNA疫苗,第2、4次用重组腺病毒载体疫苗,每次免疫前及末次免疫后14 d采集小鼠血清用于检测体液免疫应答,末次免疫后14 d采集小鼠脾淋巴细胞用于检测细胞免疫应答。血凝抑制(HI)实验和ELISA实验检测到免疫后小鼠血清中抗H5N1亚型流感病毒特异性IgG抗体。ELISPOT实验检测到免疫后小鼠针对M1和HA的特异性细胞免疫应答。共表达H5N1流感病毒M1和HA基因的DNA疫苗与腺病毒载体疫苗在小鼠体内的免疫学评价,为研究开发新型重组流感疫苗奠定了基础。

关键词： H5N1亚型流感病毒基质蛋白1 血凝素(HA) 共表达联合免疫

与细胞因子特异结合的寡聚核苷酸适配子及其在诊断和治疗中的应用

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生物工程学报 2004年第4期20卷 627-632页

作者：严馨蕊高绪文张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

寡聚核苷酸适配子 (Aptamer)是用指数富集式配基系统进化方法 (SELEX )筛选出的寡聚核苷酸 ,它能与靶分子特异性结合 ,具有识别和抑制靶物质生物学活性的作用。将体外筛选到的寡聚核苷酸适配子作为在动物或人体内应用的药剂 ,还需要进... 详细信息

寡聚核苷酸适配子 (Aptamer)是用指数富集式配基系统进化方法 (SELEX )筛选出的寡聚核苷酸 ,它能与靶分子特异性结合 ,具有识别和抑制靶物质生物学活性的作用。将体外筛选到的寡聚核苷酸适配子作为在动物或人体内应用的药剂 ,还需要进行化学修饰来提高它的生物利用度和在血浆中的稳定性。 2 氟、2′ 烷氧基或 2′ 氨基修饰可以提高适配子的稳定性 ,使适配子的体外半衰期延长 ;5′端交联一个高分子量的PEG分子或脂质体分子 ,可以使它的血浆清除率由 1小时提高到几小时至 1天。修饰后仍保持生物学活性的适配子可用于治疗相应靶细胞因子引起的疾病。目前 ,国内外已经筛选到了十几种细胞因子的适配子 ,其中血管内皮生长因子已经用于临床疾病的治疗。除了用于临床治疗外 ,适配子还可以用于细胞因子的诊断 ,凡是涉及抗体的诊断领域 ,几乎都可以用寡聚核苷酸适配子代替。应用大规模机械化筛选技术 ,可以在短期内筛选到大量的高特异性、高亲和力适配子。

关键词： SELEX Aptamer 细胞因子血管内皮生长因子寡聚核苷酸

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基于狂犬病病毒载体的基因工程疫苗研究进展

中华实验和临床病毒学杂志 2010年第2期24卷 150-152页

作者：杜加亮唐青中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 100052

对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败，让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略。其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫，可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁。一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负... 详细信息

对HIV-1和HCV等重大传染性疾病传统疫苗研制的失败，让科学家们把目光转向开发新型疫苗研制策略。其中之一就是用减毒的重组病毒载体表达外源抗原来免疫，可以保护个体免受相应病原体的暴露威胁。一种新的手段就是从cDNA克隆拯救单股负链RNA病毒，这一技术为弹状病毒科成员用于疫苗载体和生物医学工具打开了一扇窗。

关键词：基因工程疫苗病毒载体狂犬病重大传染性疾病负链RNA病毒 cDNA克隆 HIV-1 传统疫苗

SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价

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病毒学报 2007年第6期23卷 440-446页

作者：闫克夏谭文杰张相民王慧娟李岩阮力中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052 加拿大国家微生物实验室

为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质... 详细信息

为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质粒(p CMV△8.2)及转移质粒(pHR′CMV EGFP)3个质粒载体系统共同转染人胚肾细胞293T,包装了SARS假病毒;通过SARS假病毒感染的RD-A细胞中标记基因EGFP表达的分析,确定SARS假病毒能有效进入细胞,建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析,并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果显示:SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致,表明本研究构建的SARS假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。

关键词： SARS-CoV S蛋白假病毒中和试验

可调控表达甲型流感病毒M2蛋白的哺乳动物细胞系的建立与鉴定

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生物工程学报 2011年第5期27卷 747-754页

作者：刘晓宇郭建强姚立红陈爱珺付金奇张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室北京100052

甲型流感病毒M2蛋白是一种具有离子通道功能的跨膜蛋白,其氨基酸序列非常保守,可用于流感通用疫苗的研究。为了构建可调控的稳定表达甲型流感病毒M2蛋白的哺乳动物细胞系,首先应用PCR方法从含有流感病毒PR8株第七节段全长基因的质粒中... 详细信息

甲型流感病毒M2蛋白是一种具有离子通道功能的跨膜蛋白,其氨基酸序列非常保守,可用于流感通用疫苗的研究。为了构建可调控的稳定表达甲型流感病毒M2蛋白的哺乳动物细胞系,首先应用PCR方法从含有流感病毒PR8株第七节段全长基因的质粒中扩增得到M2基因。将该片段亚克隆到真核表达载体pcDNA5/FRT/TO上,用BamHⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确后将重组质粒与表达Flp重组酶的pOG44质粒共转染Flp-In T-REx-293细胞,使目的基因整合到宿主细胞染色体。筛选具有Hygromycin B抗性的细胞株。在该细胞的培养基中加入四环素以诱导目的基因表达,48 h后通过间接免疫荧光方法检测到M2蛋白的表达。共得到16株高表达M2蛋白的重组细胞株,这些细胞株在传10代后仍能稳定表达目的蛋白。未加四环素诱导的细胞没有检测到M2蛋白,说明四环素调控系统严格控制着目的基因的表达。今后,该细胞系可用于流感病毒M2蛋白的功能研究、流感候选疫苗的免疫学评价以及流感病毒减毒活疫苗的研制。

关键词：甲型流感病毒基质蛋白2 四环素哺乳动物细胞系

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粘膜免疫佐剂研究进展

中国生物工程杂志 2006年第3期26卷 83-88页

作者：周红莉郭丽王健伟洪涛中国疾病预防控制中心病毒病预防控制研究所北京100052

粘膜免疫佐剂在新型疫苗的设计中具有重要作用,常用的粘膜免疫佐剂主要包括细菌性物质、细胞因子以及抗原递送系统,综述了这些佐剂的研究进展,以期为新型疫苗研究提供参考。

关键词：粘膜免疫佐剂细菌性物质细胞因子抗原递送系统