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狂犬病病毒浙江街毒株糖蛋白基因序列分析

中华流行病学杂志 2010年第1期31卷 73-78页

作者：王晓光雷永良陈秀英孟胜利唐青浙江省丽水市疾病预防控制中心 323000 武汉生物制品研究所中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

目的测定犴犬病病毒浙江株（鼬獾源和犬源）糖蛋白（GP）基因组全序列，从分子水平比较狂犬病病毒浙江株与其他地区代表性街毒株和疫苗株GP之间的差异。方法乳鼠接种分离狂犬病病毒，RT-PCR反应测定狂犬病病毒浙江株GP基因核苷酸序列，... 详细信息

目的测定犴犬病病毒浙江株（鼬獾源和犬源）糖蛋白（GP）基因组全序列，从分子水平比较狂犬病病毒浙江株与其他地区代表性街毒株和疫苗株GP之间的差异。方法乳鼠接种分离狂犬病病毒，RT-PCR反应测定狂犬病病毒浙江株GP基因核苷酸序列，并进行序列和编码蛋白的比较分析。结果测序获得浙江5株鼬獾源狂犬病病毒和9株犬源狂犬病病毒GP基因序列，全长1575个核苷酸，编码524个氨基酸。浙江病毒株与其他地区街毒株、疫苗株核苷酸和氨基酸序列相似性在82．3％～99．9％和85．1％-99．8％之间，种系分析显示浙江株均为基因1型，GP编码蛋白无重组，主要抗原位点未出现较大的变异。结论对GP基因一级结构综合分析表明，在某些区域存在优势抗原表位的可能性较大，可能出现潜在的蛋白质抗原决定簇，浙江株GP基因变异较小，与国内其他地区流行的代表性街毒株相似，但高于其他疫苗株，在基因结构及种系进化关系上存在一定的距离。

关键词：狂犬病病毒糖蛋白基因序列

我国急性呼吸道感染患儿中检测到KI和WU多瘤病毒

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中华实验和临床病毒学杂志 2008年第1期22卷 21-23页

作者：原新慧徐子乾谢志萍高寒春张蓉芳宋靖荣郑丽舒李丹地靳淼程卫霞金玉段招军侯云德兰州大学第一医院甘肃兰州730000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒基因工程国家重点实验室病毒生物技术国家工程研究中心

目的了解多瘤病毒WU和KI在我国儿童急性呼吸道疾病中的感染情况。方法采用PCR扩增的方法对2006年11月至2007年10月收集的急性呼吸道感染患儿的318份鼻咽抽吸物（NPA）标本进行了多瘤病毒WU和KI基因检测。结果318份标本共检测出14份病毒... 详细信息

目的了解多瘤病毒WU和KI在我国儿童急性呼吸道疾病中的感染情况。方法采用PCR扩增的方法对2006年11月至2007年10月收集的急性呼吸道感染患儿的318份鼻咽抽吸物（NPA）标本进行了多瘤病毒WU和KI基因检测。结果318份标本共检测出14份病毒核酸阳性标本，其中WUV7份（2.2％），KIPyv7份（2.2％）。该14例基因检测阳性患儿临床均有上呼吸道感染或下呼吸道感染症状。结论WUV和KIPyv可能也是儿童急性呼吸道感染中较为重要的一个病原，且与儿童上呼吸道感染和下呼吸道感染存在相关性。

关键词：呼吸道感染 WU病毒 KI病毒

虫媒病毒性脑炎M-RT-PCR诊断方法的建立及应用

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中华微生物学和免疫学杂志 2004年第4期24卷 317-323页

作者：宋宏王环宇王鹏富刘卫滨付士红宋宗明赵洪丽梁国栋中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所长春生物制品研究所

目的　建立常见嗜神经性虫媒病毒 (arboviruses)分子生物学诊断方法及分子流行病学调查模型。方法　通过生物信息学方法筛选 3对常见嗜神经性虫媒病毒特异基因扩增引物 ,建立多重逆转录聚合酶链式反应 (multiplexreversetranscription P... 详细信息

目的　建立常见嗜神经性虫媒病毒 (arboviruses)分子生物学诊断方法及分子流行病学调查模型。方法　通过生物信息学方法筛选 3对常见嗜神经性虫媒病毒特异基因扩增引物 ,建立多重逆转录聚合酶链式反应 (multiplexreversetranscription PCR ,M RT PCR)体系。考察了体系的特异性、敏感性和广谱性并使用建立的M RT PCR体系对我国新分离的 3株病毒进行鉴定。结果　M RT PCR体系针对黄病毒及甲病毒敏感性达到 10 0PFU ,针对加利福尼亚脑炎病毒组达到 10 0 0PFU。利用M RT PCR体系证实 3株新分离嗜神经性虫媒病毒株中 2株为蜱传脑炎病毒远东型 ,另 1株为日本脑炎病毒Ⅰ型。结论　建立了针对嗜神经性虫媒病毒的分子生物学鉴定方法 ,该方法能够准确分析黄病毒属嗜神经性虫媒病毒 (日本脑炎病毒、蜱传脑炎病毒和西尼罗病毒 )的基因型、地理来源、进化及亲缘关系等 ,能够鉴定并区分甲病毒属不同病毒 (东方马脑炎病毒、西方马脑炎病毒和委内瑞拉马脑炎病毒 ) 。

关键词：虫媒病毒性脑炎分子生物学诊断分子流行病学生物信息学基因扩增多重逆转录聚合酶链式反应

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浙江省山区狂犬病新宿主动物调查

中华流行病学杂志 2009年第4期30卷 344-347页

作者：雷永良王晓光李浩陈秀英叶碧峰柳付明兰进权叶夏良梅建华唐青浙江省丽水市疾病预防控制中心 323000 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

目的了解浙江省狂犬病疫区野生宿主动物种类及感染状况。方法采集浙江省丽水市和杭州市淳安县猫、鼬獾、黑线姬鼠、跳麂、野猪脑组织标本共160份，分别取大脑、中脑、小脑和海马回部位组织，用直接免疫荧光试验（DFA）检测狂犬病病毒特... 详细信息

目的了解浙江省狂犬病疫区野生宿主动物种类及感染状况。方法采集浙江省丽水市和杭州市淳安县猫、鼬獾、黑线姬鼠、跳麂、野猪脑组织标本共160份，分别取大脑、中脑、小脑和海马回部位组织，用直接免疫荧光试验（DFA）检测狂犬病病毒特异性抗原和RT-PCR方法检测狂犬病病毒特异性核酸，确定阳性标本。结果脑组织抗原印片经特异性抗狂犬病病毒核蛋白（NP）单克隆抗体免疫荧光染色后在荧光显微镜下可见大量的苹果绿荧光颗粒；狂犬病病毒NP特异性目的基因Nested-PCR得到与预期结果大小一致的扩增产物，两种方法同时检出狂犬病病毒阳性的野生宿主动物脑组织标本5份，其中鼬獾脑组织阳性标本4份，阳性率为8．33％（4／48）；黑线姬鼠脑组织阳性标本1份，阳性率为1．75％（1／57）；猫、跳麂、野猪脑组织未检出阳性标本。结论在浙江省生物多样性的山区检测出狂犬病病毒感染阳性的野生动物鼬獾和野鼠，从病原学角度说明鼬獾和野鼠可能是人间狂犬病的传染来源和狂犬病病毒的宿主动物。

关键词：狂犬病宿主动物山区

抑制肿瘤坏死因子-α的DNA适配子的筛选与鉴定

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生物工程学报 2003年第6期19卷 730-733页

作者：郭克泰严馨蕊黄国锦徐春晓柴映爽张智清中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所基因室

应用SELEX技术筛选能与TNF结合的DNA适配子。化学合成随机寡聚DNA库 ,以TNF为靶蛋白 ,经过12轮SELEX筛选 ,将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚DNA适配子 ,用生物素_亲和素_辣根过氧化物酶显色系统检测适配子与TNF的结合活... 详细信息

应用SELEX技术筛选能与TNF结合的DNA适配子。化学合成随机寡聚DNA库 ,以TNF为靶蛋白 ,经过12轮SELEX筛选 ,将所得产物克隆、测序。根据所测序列化学合成寡聚DNA适配子 ,用生物素_亲和素_辣根过氧化物酶显色系统检测适配子与TNF的结合活性 ;用鼠L92 9细胞检测适配子拮抗TNF活性。结果显示 ,所筛选到的寡聚DNA能与TNF_α高亲和力结合 ,并能在细胞培养中拮抗TNF_α的细胞毒活性。

关键词：肿瘤坏死因子-α DNA适配子筛选鉴定

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狂犬病病毒反向遗传学及其应用

病毒学报 2008年第6期24卷 478-482页

作者：杜加亮唐青中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,如定点突变、基因插入缺失置换等... 详细信息

反向遗传学是相对于经典遗传学而言的。经典遗传学是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律。反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,如定点突变、基因插入缺失置换等,再按组成顺序构建含有生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体,研究生物体基因组的结构和功能,以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容。现在的分子生物学技术大都是在DNA水平进行的。因为RNA病毒较DNA病毒更难操作,尤其是负链的RNA病毒,因为负链RNA病毒基因组并不能像正链RNA病毒基因组那样可以自身做为mRNA--当然这只是其中一个原因,而且由于负链RNA病毒基因组自身的原因,使其很难进行人工操作:1、在基因组RNA的复制和包装中,5'和3'的精确序列是必须的;2、必须通过反转录将病毒基因组RNA变成cDNA,才能接着进行后续操作;3、基因组和反基因组RNA都必须以病毒核糖核蛋白复合体的形式存在,才能表达和包装出活病毒。

关键词：反向遗传学狂犬病病毒经典遗传学应用生物体基因组遗传物质定点突变

255例急性下呼吸道感染并血小板异常患儿病毒病原学分析

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中国当代儿科杂志 2014年第4期16卷 406-409页

作者：刘华贺湘玲张兵肖霓光游亚兰段招军湖南省人民医院儿科医学中心湖南长沙410005 中国疾病预防控制中心与病毒生物技术国家工程研究中心北京100052

目的了解住院患儿急性下呼吸道感染(ALRTI)并血小板异常的病毒病原学情况。方法收集2010年3月至2011年2月255例血小板异常及同期442例血小板正常的ALRTI住院患儿鼻咽抽吸物样本,采用RT-PCR或PCR方法进行14种病毒检测。结果 255例血小板... 详细信息

目的了解住院患儿急性下呼吸道感染(ALRTI)并血小板异常的病毒病原学情况。方法收集2010年3月至2011年2月255例血小板异常及同期442例血小板正常的ALRTI住院患儿鼻咽抽吸物样本,采用RT-PCR或PCR方法进行14种病毒检测。结果 255例血小板异常并ALRTI患儿中,血小板增多253例(99.2%),血小板减少2例(0.8%)。血小板异常组中检出至少有1种病毒感染173例(67.8%),其中,人鼻病毒(HRV)检出率最高,其次是副流感病毒3(PIV3)和呼吸道合胞病毒(RSV)。与血小板正常组相比较,血小板异常组PIV3检出率显著增高(P病毒B(IFVB)检出率则显著降低(P<0.05)。血小板异常组和血小板正常组的年龄分布差异有统计学意义(P<0.01),其中1岁以下年龄段血小板异常最显著(P<0.01)。结论 ALRTI时易引起血小板增多,尤其是PIV3感染者,而IFVB感染则不易引起血小板的变化。小于1岁的ALRTI住院患儿更易出现血小板异常。

关键词：血小板增多血小板减少急性下呼吸道感染病毒儿童

表达HPV-16结构蛋白的重组痘苗病毒疫苗免疫效果研究

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中华微生物学和免疫学杂志 2007年第7期27卷 593-597页

作者：赵莉任皎高见张卉韩立群范江涛田厚文阮力中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所北京100052

目的研究表达HPV—16结构蛋白L1和12的重组痘苗病毒（rVVL1L2）的免疫效果。方法以重组痘苗病毒rVVL1L2免疫C57BIJ6小鼠，用酶联免疫（ELISA）和酶联免疫斑点（ELISPOT）方法检测重组痘苗病毒诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平... 详细信息

目的研究表达HPV—16结构蛋白L1和12的重组痘苗病毒（rVVL1L2）的免疫效果。方法以重组痘苗病毒rVVL1L2免疫C57BIJ6小鼠，用酶联免疫（ELISA）和酶联免疫斑点（ELISPOT）方法检测重组痘苗病毒诱发小鼠产生的体液免疫和细胞免疫应答水平；利用C3肿瘤细胞在C57BIJ6小鼠中的成瘤模型，观察重组痘苗病毒在抗肿瘤移植实验和肿瘤生长抑制实验中对小鼠的免疫保护效果。结果重组痘苗病毒rVVL1L2免疫的小鼠，可以检测到针对L1和12特异的抗体、L1165-175肽特异性的、分泌IFN-的T细胞；同时可以观察到免疫后的C57BI/6小鼠，可以有效预防HPV．16相关肿瘤细胞（1．5×10^5C3细胞）的攻击；对已产生的肿瘤，可以延缓肿瘤细胞的生长速度。结论重组痘苗病毒rVVL1L2可以有效诱发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答，为研究预防和治疗HPV-16感染的疫苗提供了实验资料。

关键词：人乳头状瘤病毒子宫颈癌疫苗痘苗病毒

含乙型肝炎病毒S-PreS1基因的DNA疫苗与蛋白颗粒疫苗联合免疫可增强免疫应答

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生物工程学报 2011年第1期27卷 95-100页

作者：陈红邓瑶谭文杰王文管洁文波殷霄阮力中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒病应急技术中心北京100052

为研制新型有效的HBV治疗性疫苗,构建了含PreS1与S融合基因的HBV DNA疫苗,即pVRC-HBSS1(PreS121–47 aa融合在S抗原1–223 aa的羧基端),并制备了CHO表达相同结构的蛋白颗粒亚单位疫苗HBSS1。在Balb/C小鼠中采用不同的DNA免疫方式(即肌... 详细信息

为研制新型有效的HBV治疗性疫苗,构建了含PreS1与S融合基因的HBV DNA疫苗,即pVRC-HBSS1(PreS121–47 aa融合在S抗原1–223 aa的羧基端),并制备了CHO表达相同结构的蛋白颗粒亚单位疫苗HBSS1。在Balb/C小鼠中采用不同的DNA免疫方式(即肌肉注射、皮内注射加电转)初免3次,蛋白颗粒亚单位疫苗(不同佐剂)肌肉注射加强免疫1次,然后我们分析比较了各组疫苗所引起的免疫应答特点。抗体检测结果表明:皮内注射结合电转初免组产生的PreS1与S特异性抗体水平皆高于肌肉直接注射组。进一步还发现DNA疫苗与蛋白颗粒亚单位疫苗两种疫苗联合应用后S抗原特异的细胞免疫应答(IFN-γELISpot分析)明显高于DNA疫苗或蛋白颗粒亚单位单独应用,其中皮内注射+电转结合蛋白颗粒亚单位疫苗联合免疫组可产生最强的细胞免疫应答。这些研究为新型HBV治疗性疫苗的优化设计与合理应用提供了依据。

关键词：乙型肝炎病毒(HBV) DNA疫苗颗粒亚单位疫苗电转联合免疫