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水牛PTHLH基因克隆分析及其真核表达载体构建

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中国畜牧兽医 2018年第11期45卷 2979-2988页

作者：陆杏蓉梁莎莎邓廷贤段安琴马小娅庞春英梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

为揭示甲状旁腺激素样激素(parathyroid hormone-like hormone,PTHLH)基因对水牛繁殖性能的影响,本研究对水牛PTHLH基因进行克隆,并对其核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析。以牛PTHLH基因为种子序列(GenBank登录号:NM_001290949),应... 详细信息

为揭示甲状旁腺激素样激素(parathyroid hormone-like hormone,PTHLH)基因对水牛繁殖性能的影响,本研究对水牛PTHLH基因进行克隆,并对其核苷酸和氨基酸序列进行生物信息学分析。以牛PTHLH基因为种子序列(GenBank登录号:NM_001290949),应用CE Design软件设计引物序列,运用PCR扩增和测序技术获得水牛完整编码区序列,使用DNAMAN、ProtParam、SOPMA、PSORTⅡPrediction等在线软件分析PTHLH蛋白的一级结构、二级结构、三级结构与理化性质,并进行同源性比对分析及系统进化树构建。结果显示,试验克隆了水牛PTHLH基因完整编码区序列,该序列长为534bp,可编码177个氨基酸。水牛PTHLH基因编码区核苷酸序列与黄牛、猪、马、山羊、绵羊和骆驼的同源性分别为98.3%、90.4%、90.1%、98.1%、97.5%和89.2%,物种之间同源性较高,系统进化树分析结果与其亲缘关系远近一致,表明水牛PTHLH基因编码区在进化过程中比较保守。蛋白理化性质分析显示,水牛PTHLH蛋白分子式为C895H1451N271O266S2,分子质量为2 885u,半衰期为30h,理论等电点(pI)为10.00,水溶液在280nm处的消光系数为23 950,肽链N端为蛋氨酸(Met),不稳定系数为60.04,属于碱性不稳定蛋白;脂肪系数为72.15,总平均亲水性为-0.928,该蛋白属于不可溶性蛋白,亚细胞定位于细胞核、细胞质和线粒体。结构域预测结果显示,水牛PTHLH蛋白包含有1个PTH区域,同时还包含有1个低复杂度区域。二级结构分析显示,水牛PTHLH蛋白包含83个α-螺旋(46.89%)、17个延伸链(9.60%)、10个β-转角(5.66%)和67个无规则卷曲(37.85%),与三级结构预测结果相一致。试验构建了PTHLH基因真核表达载体pcDNA3.1-PTHLH,并通过电泳和测序验证了载体的准确性。PTHLH基因的成功克隆及其真核表达载体的成功构建为今后研究水牛PTHLH基因的功能和遗传特性提供了材料。

关键词：水牛 PTHLH基因克隆生物信息学载体构建

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水牛FADS2基因的电子克隆及序列分析

中国畜牧兽医 2017年第10期44卷 2829-2836页

作者：马小娅庞春英梁莎莎陆杏蓉朱鹏段安琴梁贤威邓廷贤中国农业科学院广西水牛研究所、农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

试验旨在利用电子克隆法对水牛Δ6脂肪酸脱氢酶(Δ6-fatty acid desaturases,FADS2)基因进行克隆和生物信息学分析,为探究FADS2基因对水牛泌乳性能的作用机制奠定基础。以奶牛FADS2基因序列(Gen Bank登录号:NM_001083444.1)为探针设计引... 详细信息

试验旨在利用电子克隆法对水牛Δ6脂肪酸脱氢酶(Δ6-fatty acid desaturases,FADS2)基因进行克隆和生物信息学分析,为探究FADS2基因对水牛泌乳性能的作用机制奠定基础。以奶牛FADS2基因序列(Gen Bank登录号:NM_001083444.1)为探针设计引物,利用电子克隆法克隆水牛FADS2基因,并通过RT-PCR验证,对FADS2基因的序列特征进行生物信息学分析。测序结果表明,水牛FADS2基因序列全长为36 600 bp,由12个外显子和11个内含子组成,包含一个长1 335 bp的开放阅读框,可编码444个氨基酸。序列同源性分析显示,水牛FADS2基因编码序列与牦牛、黄牛、人、猪、家兔、虎鲸和褐家鼠序列的同源性分别为98.88%、98.88%、89.66%、90.79%、90.85%、92.35%和87.11%。蛋白质预测分析表明,水牛FADS2蛋白分子质量为52.51 ku,理论等电点(p I)为8.75,呈弱碱性,属于亲水性蛋白,无信号肽。系统进化树分析结果表明,FADS2基因在不同物种及进化的过程中具有高度保守性,其中水牛与牦牛、黄牛亲缘关系较近,与褐家鼠亲缘关系较远。水牛FADS2基因的成功克隆为今后阐明水牛泌乳性能的作用机制奠定了基础。

关键词：水牛 FADS2基因电子克隆生物信息学分析

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水牛甲状旁腺素基因克隆与生物信息学分析

中国畜牧兽医 2017年第9期44卷 2541-2548页

作者：梁莎莎马小娅邓廷贤陆杏蓉段安琴朱鹏梁贤威庞春英中国农业科学院广西水牛研究所农业部广西水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本研究参考黄牛甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)基因序列设计引物,运用PCR扩增技术对水牛PTH基因进行克隆,并用生物信息学方法对序列进行分析。结果显示,成功克隆了水牛PTH基因完整编码区序列(CDS)348bp,可编码115个氨基酸。该基... 详细信息

本研究参考黄牛甲状旁腺素(parathyroid hormone,PTH)基因序列设计引物,运用PCR扩增技术对水牛PTH基因进行克隆,并用生物信息学方法对序列进行分析。结果显示,成功克隆了水牛PTH基因完整编码区序列(CDS)348bp,可编码115个氨基酸。该基因编码区序列与黄牛、猪、马、山羊、绵羊和骆驼的同源性分别为99%、93%、91%、97%、96%和92%,表明PTH基因在不同物种间高度保守。系统进化树分析表明,水牛与黄牛PTH基因亲缘关系最近。此外,在水牛PTH基因CDS上共发现了3个碱基突变,其中两个属于同义突变,一个属于错义突变。氨基酸序列分析表明,该蛋白属于碱性、亲水、稳定型蛋白质,其分子式为C_(570)H_(941)N_(167)O_(164)S_8,分子质量为13.01ku。二级结构分析显示,水牛PTH蛋白以α-螺旋和无规则卷曲为主,与三级结构预测结果相一致。亚细胞定位分析显示,水牛PTH蛋白分布在细胞质(26.1%)、线粒体(21.7%)、细胞外(包括细胞壁)(17.4%)、内质网(13.0%)、细胞核(8.7%)、高尔基体(4.3%)和其他部位(8.7%),推测PTH蛋白可能在运输、结合及细胞被膜等方面发挥信号转导和转录调控作用。

关键词：水牛甲状旁腺素基因克隆生物信息学

意大利地中海水牛同期发情-人工授精试验效果的研究

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黑龙江畜牧兽医 2018年第12期 195-197页

作者：陈明棠谭正准黄健李辉赵朝步钟华配覃广胜梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所/农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室

为了繁育纯种地中海水牛,试验采用＂促黄体素释放激素A3＋氯前列醇＋促黄体素释放激素A3＂同期化处理国外引进的地中海育成水牛,并用引进的地中海水牛冻精进行人工授精。结果表明：经同期化处理的地中海水牛发情率为87.07%,淡、旺季发... 详细信息

为了繁育纯种地中海水牛,试验采用＂促黄体素释放激素A3＋氯前列醇＋促黄体素释放激素A3＂同期化处理国外引进的地中海育成水牛,并用引进的地中海水牛冻精进行人工授精。结果表明：经同期化处理的地中海水牛发情率为87.07%,淡、旺季发情率差异不显著（P〉0.05）;情期受胎率为37.39%,旺季配种受胎率显著高于淡季;淡季母牛48 h内排卵率为59.72%,旺季为81.13%,差异显著（P〈0.05）。间隔一定时间重复处理不影响发情率和受胎率。地中海水牛同期发情-人工授精效果与摩拉水牛、尼里-拉菲水牛、本地水牛的处理效果基本一致。

关键词：地中海水牛同期发情人工授精发情率受胎率

饲粮粗蛋白质水平对泌乳水牛产奶量及氮代谢的影响

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动物营养学报 2012年第5期24卷 946-952页

作者：邹彩霞韦升菊梁贤威覃广胜杨炳壮杨承剑中国农业科学院广西水牛研究所农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本试验旨在研究饲粮粗蛋白质水平对泌乳水牛产奶量及氮代谢的影响。试验采用4×4拉丁方试验设计,选用16头体况良好、上期泌乳量相近、产犊胎次2～3胎、健康的泌乳前期水牛,随机分为4组,进行动物饲养试验和消化代谢试验。将4组泌乳水牛... 详细信息

本试验旨在研究饲粮粗蛋白质水平对泌乳水牛产奶量及氮代谢的影响。试验采用4×4拉丁方试验设计,选用16头体况良好、上期泌乳量相近、产犊胎次2～3胎、健康的泌乳前期水牛,随机分为4组,进行动物饲养试验和消化代谢试验。将4组泌乳水牛随机分配到4个梯度的饲粮粗蛋白质水平组,即16.0%、15.2%、14.4%、13.6%4个组,每组4头,进行4期饲养试验,每期21 d,共84 d。按照4×4拉丁方设计给各期各组泌乳水牛饲喂不同粗蛋白质水平的饲粮,每期试验预试期7 d。在第2期和第4期饲养试验的最后4 d开展2期氮消化代谢试验。结果表明,总采食氮、可消化氮、乳氮/进食氮以及氮表观消化率在部分组间差异显著(P0.05)。饲喂不同粗蛋白质水平饲粮对水牛产奶量、乳蛋白率、乳脂率、乳非脂固形物率和乳糖率均无显著影响(P>0.05)。血清总蛋白和尿素氮含量各组间差异不显著(P>0.05)。以试验期间进食氮水平(g/d)为横坐标(x),标准乳产量(kg/d)为纵坐标(y),获得进食氮水平与标准乳产量的二次曲线关系,即y=-0.001 6x2+0.955 6x-129.91。由此可见,饲粮粗蛋白质水平对泌乳水牛生产性能及血液生化指标影响不显著,根据进食氮水平与标准乳产量的二次曲线关系可得,当进食氮水平为298.625 g/d时,得到水牛标准乳产量最大值为12.773 kg/d。

关键词：水牛泌乳前期氮利用率代谢产奶量

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摩拉水牛及德宏水牛瘤胃产甲烷菌多样性比较

中国畜牧兽医 2018年第2期45卷 365-374页

作者：杨承剑梁辛李丽莉李孟伟梁贤威彭开屏郭艳霞唐庆凤中国农业科学院广西水牛研究所农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本试验旨在比较分析摩拉水牛及德宏水牛瘤胃液中产甲烷菌的多样性。选取健康雌性摩拉水牛及德宏水牛各3头,采用口腔导管法收集瘤胃液,酚—氯仿—异戊醇抽提法提取瘤胃液总DNA,用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增产甲烷菌16SrDNA,... 详细信息

本试验旨在比较分析摩拉水牛及德宏水牛瘤胃液中产甲烷菌的多样性。选取健康雌性摩拉水牛及德宏水牛各3头,采用口腔导管法收集瘤胃液,酚—氯仿—异戊醇抽提法提取瘤胃液总DNA,用产甲烷菌特异性引物Met86F/Met1340R扩增产甲烷菌16SrDNA,构建16SrDNA基因克隆文库。摩拉水牛及德宏水牛各获得96个16SrDNA基因序列,均归类于Methanobacteriales目,其中德宏水牛有82个序列(18个OTUs)与已知菌的16SrDNA序列相似性≥97%,占总序列的85.4%,有14个序列(9个OTUs)与已知菌16SrDNA序列相似性为89%~97%;摩拉水牛有94个序列(13个OTUs)与已知菌16SrDNA序列相似性≥97%,占总序列的97.9%,仅有2个序列(1个OTUs)与已知菌16SrDNA序列相似性为94%。系统进化树分析表明,所有序列分别聚集于两大分支上,其中德宏水牛有13个OTUs代表序列和摩拉水牛7个OTUs代表序列聚集在进化树顶端的同一分支上,且在系统发育距离上与Methanobacteriales目中任何已知相似序列都相隔较远。德宏水牛瘤胃中的SGMT簇序列和RO簇序列所占总序列比列分别为83.3%、9.4%,摩拉水牛瘤胃中的SGMT簇序列和RO簇序列所占总序列的比列分别为51.0%、9.4%。由此可见,摩拉水牛及德宏水牛瘤胃产甲烷菌序列以Methanobacteriales目为主,其中德宏水牛拥有更多未知的产甲烷菌序列;德宏水牛瘤胃中的SGMT簇产甲烷菌序列比例要高于摩拉水牛。

关键词：摩拉水牛德宏水牛瘤胃产甲烷菌多样性

植物乳杆菌、布氏乳杆菌对甘蔗尾青贮品质及有氧稳定性的影响

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中国畜牧兽医 2018年第7期45卷 1824-1832页

作者：唐振华杨承剑李孟伟梁辛郭艳霞梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

为了研究植物乳杆菌、布氏乳杆菌对甘蔗尾青贮品质及有氧稳定性的影响。试验共分为10组,A组为对照组,添加生理盐水;B、C、D组为植物乳杆菌添加组,分别在新鲜甘蔗尾中添加10、20和30mL/kg植物乳杆菌液;E、F、G组为布氏乳杆菌添加组,在新... 详细信息

为了研究植物乳杆菌、布氏乳杆菌对甘蔗尾青贮品质及有氧稳定性的影响。试验共分为10组,A组为对照组,添加生理盐水;B、C、D组为植物乳杆菌添加组,分别在新鲜甘蔗尾中添加10、20和30mL/kg植物乳杆菌液;E、F、G组为布氏乳杆菌添加组,在新鲜甘蔗尾中分别添加10、20和30mL/kg布氏乳杆菌液;H、I、J组为植物乳杆菌、布氏乳杆菌联合添加组,在新鲜甘蔗尾中分别添加10、20和30mL/kg布氏乳杆菌和植物乳杆菌等体积混合的菌液。每组3个重复。室温青贮40d,结束后采样测定青贮发酵品质和有氧稳定性。结果显示:与对照组相比,添加植物乳杆菌组降低了甘蔗尾青贮pH,显著增加乳酸含量(P所降低,且能够提高青贮可溶性碳水化合物(WSC)利用效率。综上所述,植物乳杆菌与布氏乳杆菌联合处理(添加量达到2×10~6 CFU/g鲜重,I组)青贮甘蔗尾能够有效提高青贮品质和有氧稳定性。

关键词：青贮甘蔗尾植物乳杆菌布氏乳杆菌青贮品质有氧稳定性

腺病毒载体转染水牛不同原代体细胞的效果比较

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中国畜牧兽医 2016年第10期43卷 2661-2665页

作者：段安琴庞春英朱鹏陆杏蓉邓廷贤梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

试验旨在比较腺病毒载体转染水牛乳腺上皮细胞、卵丘细胞、成纤维细胞的效率。将腺病毒质粒pBHGloxdelE13cre、pDC316-eGFP脂质体转染293细胞,收集病毒并测定病毒滴度。用腺病毒载体按不同的感染复数(MOI)感染水牛乳腺上皮细胞、卵丘细... 详细信息

试验旨在比较腺病毒载体转染水牛乳腺上皮细胞、卵丘细胞、成纤维细胞的效率。将腺病毒质粒pBHGloxdelE13cre、pDC316-eGFP脂质体转染293细胞,收集病毒并测定病毒滴度。用腺病毒载体按不同的感染复数(MOI)感染水牛乳腺上皮细胞、卵丘细胞、成纤维细胞,72h后倒置荧光显微镜下观察,统计感染效率。MOI为25、50、100、200、400时,成纤维细胞感染效率分别为0.7%、7.0%、9.0%、12.5%、34.0%,卵丘细胞感染效率分别为42.5%、55.3%、57.4%、76.0%、80.0%,乳腺上皮细胞感染效率分别为88.7%、100%、100%、100%、100%。结果表明,腺病毒转染乳腺上皮效率最佳,卵丘细胞次之,成纤维细胞效果较差。

关键词：水牛腺病毒载体乳腺上皮细胞卵丘细胞成纤维细胞

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地中海水牛冻精引进及其推广应用效果

黑龙江畜牧兽医 2018年第21期 80-82,86,259页

作者：陈明棠覃广胜黄锋庞春英唐艳黄健谭正准李辉李舒露梁贤威中国农业科学院广西水牛研究所/农业部(广西)水牛遗传繁育重点实验室

为进一步丰富我国乳用良种水牛遗传资源、扩大种源、促进中国水牛杂交改良和水牛奶业的发展,文章对近几年引进意大利地中海水牛冻精对我国几个地方品种水牛（摩拉水牛、尼里/拉菲水牛、摩拉×尼里水牛以及本地水牛等）人工授精的情况进... 详细信息

为进一步丰富我国乳用良种水牛遗传资源、扩大种源、促进中国水牛杂交改良和水牛奶业的发展,文章对近几年引进意大利地中海水牛冻精对我国几个地方品种水牛（摩拉水牛、尼里/拉菲水牛、摩拉×尼里水牛以及本地水牛等）人工授精的情况进行资料汇总。结果表明：地中海杂交水牛平均情期受胎率为58. 82%,各杂交组合间差异不显著（P〉0. 05）,杂交后代生长发育正常。地中海×摩拉、地中海×尼里/拉菲杂交公牛染色体数为2n=48＋XY,母牛染色体数均为2n=48＋XX;地中海×本地水牛杂交后代染色体有三种类型,分别为2n=48、2n=49、2n=50。各种杂交组合的怀孕期在309. 40-322. 89 d之间,平均为（314. 11±12. 07） d,杂交后代初产年龄最早为887 d,最晚为1 185 d,平均为（1 029. 71±130. 32） d。第一泌乳期平均泌乳天数为（316. 24±55. 62） d,总产奶量为（2 036. 18±590. 89） kg,305 d产奶量为（2 086. 16±383. 08） kg。地中海杂交水牛乳成分主要指标均略高于《广西食品安全地方标准》。说明地中海水牛能适应我国气候环境,并且杂交改良效果显著。

关键词：地中海水牛冷冻精液人工授精杂交后代生产性能繁殖性能泌乳性能