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PTHLH基因对水牛卵泡颗粒细胞活性的影响及其分子调控机制的初步研究

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中国草食动物科学 2024年

作者：陆杏蓉邓廷贤郑海英杨春艳韦科龙钟华配段安琴马小娅徐媛媛尚江华广西水牛研究所/农业农村部水牛遗传繁育技术重点实验室广西水牛遗传繁育重点实验室

试验旨在探讨PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞活性的影响，以及PTHLH基因对增殖、表观修饰和多能性相关基因表达模式的调控作用，为理解卵泡颗粒细胞和卵泡发育的分子调控机制提供新的视角。采用脂质体转染法将PTHLH基因过表达载体... 详细信息

试验旨在探讨PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞活性的影响，以及PTHLH基因对增殖、表观修饰和多能性相关基因表达模式的调控作用，为理解卵泡颗粒细胞和卵泡发育的分子调控机制提供新的视角。采用脂质体转染法将PTHLH基因过表达载体转染到水牛卵泡颗粒细胞中；利用MTT细胞活性检测试剂测定细胞活力；用STRING在线分析PTHLH及相关蛋白的互作网络；用qRT-PCR检测转染后水牛卵泡颗粒细胞中增殖、表观修饰和多能性相关基因的表达情况，分析PTHLH基因过表达对水牛卵泡颗粒细胞相关基因表达的影响。结果显示，PTHLH基因过表达极显著降低了水牛卵泡颗粒细胞的活性(P水牛卵泡颗粒细胞的细胞活性，对增殖相关基因（CCNB1、CCND1、CDKN1B、CDKN1A和CDK2）、甲基化相关基因DNMT1与羟甲基化相关基因TET3、乙酰化相关基因（HDAC1、HDAC2、HAT1、P300和CBP）和多能性相关基因NANOG的表达具有负调控作用，而对羟甲基化相关基因TET1和TET2，以及多能性相关基因OCT4和SOX2的表达具有正调控作用，为今后研究卵泡发生机理奠定基础。

关键词：水牛 PTHLH基因卵泡颗粒细胞基因表达

利用尼龙袋法比较象草和麦秸在奶水牛瘤胃中的降解特性

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动物营养学报 2024年第6期36卷 3693-3701页

作者：彭丽娟罗鲜青曾繁泉王克耀杨承剑广西壮族自治区水牛研究所农业农村部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本试验旨在研究台湾甜象草、桂牧1号杂交象草和小麦秸秆各营养成分及其在奶水牛瘤胃中的降解特性。试验采用尼龙袋法测定3种粗饲料的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解参数,并对其常规营养成... 详细信息

本试验旨在研究台湾甜象草、桂牧1号杂交象草和小麦秸秆各营养成分及其在奶水牛瘤胃中的降解特性。试验采用尼龙袋法测定3种粗饲料的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解参数,并对其常规营养成分进行分析。结果表明:3种粗饲料中桂牧1号杂交象草的CP含量最高,显著高于其他2种粗饲料(P台湾甜象草>小麦秸秆。3种粗饲料的NDF含量差异不显著(P>0.05),台湾甜象草的ADF含量显著低于桂牧1号杂交象草和小麦秸秆(P桂牧1号杂交象草>小麦秸秆。综上所述,台湾甜象草和桂牧1号杂交象草饲用价值较高,可作为奶水牛的优质粗饲料来源;小麦秸秆可做进一步加工或搭配其他优质粗饲料加以利用。

关键词：尼龙袋法台湾甜象草桂牧1号杂交象草小麦秸秆奶水牛瘤胃降解

利用尼龙袋法评价象草、苜蓿和白酒糟在奶水牛瘤胃中的降解特性

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动物营养学报 2024年第7期36卷 4716-4724页

作者：彭丽娟曾繁泉罗鲜青王克耀李孟伟杨承剑广西壮族自治区水牛研究所农业农村部(广西)水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本试验旨在研究象草、苜蓿和白酒糟各营养成分及其在水牛瘤胃中的降解特性。试验采用尼龙袋法测定3种粗饲料的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解参数,并对其常规营养成分进行分析。结果表明:3... 详细信息

本试验旨在研究象草、苜蓿和白酒糟各营养成分及其在水牛瘤胃中的降解特性。试验采用尼龙袋法测定3种粗饲料的干物质(DM)、粗蛋白质(CP)、中性洗涤纤维(NDF)和酸性洗涤纤维(ADF)的瘤胃降解参数,并对其常规营养成分进行分析。结果表明:3种粗饲料中白酒糟的CP含量显著高于其他2种粗饲料(P苜蓿>象草。苜蓿和白酒糟的NDF含量显著低于象草(P白酒糟>象草。象草、苜蓿和白酒糟的NDF有效降解率分别为41.37%、33.24%和18.35%,由高到低依次为象草>苜蓿>白酒糟。象草、苜蓿和白酒糟的ADF有效降解率分别为33.55%、37.70%和24.11%,由高到低依次为苜蓿>象草>白酒糟。综上所述,苜蓿的饲用价值较高,可作为水牛的优质粗饲料来源,白酒糟的CP含量高,CP瘤胃有效降解率也较高,可作为水牛的CP补充,象草可通过搭配营养价值较高的其他饲料来满足水牛对纤维饲料的需求。

关键词：尼龙袋法象草苜蓿白酒糟水牛瘤胃降解

水牛SFRP 1基因序列分析、真核表达载体构建及组织表达分析

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中国畜牧兽医 2024年第5期51卷 1807-1818页

作者：黄丽清段安琴郑海英杨春艳尚江华广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室南宁530001 农业农村部水牛遗传繁育技术重点实验室南宁530001

【目的】获取水牛分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因CDS区序列,并预测其编码蛋白的结构功能,构建SFRP 1基因真核表达载体,检测SFRP 1基因在水牛不同组织中的表达情况,为探索SFRP 1基因在水牛生长发育中的作用奠定基础。【方法】以水牛卵... 详细信息

【目的】获取水牛分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)基因CDS区序列,并预测其编码蛋白的结构功能,构建SFRP 1基因真核表达载体,检测SFRP 1基因在水牛不同组织中的表达情况,为探索SFRP 1基因在水牛生长发育中的作用奠定基础。【方法】以水牛卵巢组织cDNA为模板,通过RT-PCR对SFRP 1基因CDS区序列进行扩增并测序,利用生物信息学在线分析软件对水牛SFRP 1基因与不同物种进行比对和系统进化树构建,并预测SFRP1蛋白理化性质、信号肽、跨膜结构等。将获得的目的基因连接至pCMV-HAhyPBase-mcheery载体并转染至水牛颗粒细胞,检测转染后荧光和基因表达情况。通过实时荧光定量PCR检测水牛不同组织中SFRP 1基因表达情况。【结果】水牛SFRP 1基因CDS区长927 bp,共编码308个氨基酸。多重序列比对结果显示,水牛SFRP 1基因氨基酸序列与黄牛、牦牛、山羊、虎鲸、黑猩猩、北极狐、猫、人、小鼠的相似性分别为100%、100%、99.65%、98.58%、98.23%、98.23%、98.58%、98.23%、96.45%,存在CRD_FZ、NTR_like和DUF3367结构域。水牛SFRP 1基因核苷酸序列与黄牛、绵羊、山羊、牦牛、野牛、马鹿、野骆驼、猪、人的相似性分别为97.3%、95.9%、95.8%、94.5%、94.2%、93.7%、80.4%、78.5%和77.3%。系统进化树结果显示,水牛与黄牛、牦牛、野牛聚为一支。生物信息学分析结果显示,SFRP1蛋白呈碱性,为不稳定蛋白;第1—15位氨基酸处存在信号肽,为分泌型蛋白,存在跨膜结构,主要定位于细胞外;存在21个磷酸化位点和8个O-糖基化修饰位点。二级结构主要由α-螺旋、延伸链和无规则卷曲构成;水牛、黄牛、人的SFRP1蛋白三级结构高度相似。成功构建pCMV-mcheery-SFRP1真核表达载体并转染水牛颗粒细胞,转染72 h后pCMV-mcheery-SFRP1重组质粒组细胞内SFRP 1基因表达量极显著高于对照组(P水牛不同组织中均有表达,且在脾脏中表达量最高,极显著高于其他组织(P遗传进化过程中具有高保守性,在水牛不同组织中广泛表达。研究结果为今后探究SFRP 1基因在水牛生长发育中的功能及分子机制奠定基础。

关键词：水牛 SFRP 1基因序列分析真核表达载体组织表达

纤维素酶和木聚糖酶处理甘蔗梢青贮对水牛养分表观消化率、泌乳性能和血清生化指标的影响

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动物营养学报 2024年

作者：彭丽娟李孟伟谢华德郭艳霞杨承剑广西壮族自治区水牛研究所农业农村部(广西)水牛遗传繁育重点实验室

本试验旨在研究纤维素酶和木聚糖酶处理对甘蔗梢青贮品质以及其对水牛养分表观消化率、泌乳性能和血清生化指标的影响。选取泌乳期和胎次相近、体况健康、体重[（726.40±6.45） kg]相近的摩拉母水牛24头,随机分为4组,每组6个重复,每个... 详细信息

本试验旨在研究纤维素酶和木聚糖酶处理对甘蔗梢青贮品质以及其对水牛养分表观消化率、泌乳性能和血清生化指标的影响。选取泌乳期和胎次相近、体况健康、体重[（726.40±6.45） kg]相近的摩拉母水牛24头,随机分为4组,每组6个重复,每个重复1头牛。对照组饲喂不添加酶制剂处理的甘蔗梢青贮,试验组分别饲喂添加200 mg/kg纤维素酶（试验Ⅰ组）、200 mg/kg木聚糖酶（试验Ⅱ组）以及200 mg/kg纤维素酶+200 mg/kg木聚糖酶（试验Ⅲ组）处理的甘蔗梢青贮。酶制剂的添加量以青贮原料鲜重为基础。各组饲粮精粗比均为7∶3。预试期2周,正试期4周。结果表明:1)与对照组相比,各试验组甘蔗梢青贮常规营养成分含量均无显著差异（P>0.05）;各试验组乳酸含量均显著提高（P水牛干物质采食量（DMI）显著降低（P0.05）。综上所述,在甘蔗梢中单独或联合添加纤维素酶与木聚糖酶均能提高其青贮品质,且能提高水牛NDF和ADF表观消化率,对泌乳性能和血清生化指标无显著影响。

关键词：纤维素酶木聚糖酶甘蔗梢青贮水牛泌乳性能

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水牛早孕诊断方法比较研究

中国奶牛 2024年第2期 16-20页

作者：黄荣春谭正准梁淦李辉黄健鄢胜飞曾令湖潘伟军卢瑛覃广胜中国农业科学院广西水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室南宁530001

本试验的目的是通过比较几种不同的妊娠诊断方法,建立一套简便而准确的水牛早孕诊断方法。选择体况相似的8头中国沼泽型奶水牛为研究对象,通过视诊法连续观测8头母水牛配种后15个时间点眼睛形态学特征的变化;采用ELISA法检测8头母水牛... 详细信息

本试验的目的是通过比较几种不同的妊娠诊断方法,建立一套简便而准确的水牛早孕诊断方法。选择体况相似的8头中国沼泽型奶水牛为研究对象,通过视诊法连续观测8头母水牛配种后15个时间点眼睛形态学特征的变化;采用ELISA法检测8头母水牛人工授精后8个时间点晨血的血清中孕酮、雌二醇水平;采用牛早孕试纸检测卡检测尾根血清中的早期妊娠相关糖蛋白,以上早孕检测结果均与B超孕检结果进行对比分析。结果发现:配种后前28d观测水牛的眼部未见异常形态;怀孕母牛的孕酮水平均为5.76ng/mL,自16d开始保持在4.9~8.43ng/mL,至24d有小幅度升高,而未怀孕母牛的孕酮水平则表现下降趋势;配种后28d时采用牛早孕试纸检测卡检测发现有4头水牛怀孕,与B超孕检结果相一致。可以得出,配种后前28d形态学观察法不适用于水牛早期的妊娠诊断;孕牛与未孕母牛的孕酮激素水平变化规律存在差异,可为今后建立水牛早孕诊断方法提供技术支撑;牛早孕试纸检测卡在28d后获得较高的准确率,可应用于水牛早期妊娠诊断。该试验的开展可为今后水牛早期妊娠诊断研究提供参考,同时对促进水牛产业的健康发展具有重要的意义。

关键词：水牛早孕诊断孕酮雌二醇 ELISA法

桑叶黄酮对水牛泌乳性能、氨基酸代谢和血清生化指标的影响

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饲料研究 2024年第8期47卷 8-13页

作者：李孟伟彭丽娟郭艳霞韦科龙钟华配罗华杨承剑广西壮族自治区水牛研究所农业农村部(广西)水牛遗传繁育重点实验室广西南宁530001

试验旨在研究桑叶黄酮对泌乳水牛血清氨基酸代谢、血清生化指标和泌乳性能的影响。试验选取泌乳量接近的泌乳中期水牛20头,随机分为2组,每组10个重复,每个重复1头水牛。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂基础饲粮+45 g/(头·d)桑叶黄酮。... 详细信息

试验旨在研究桑叶黄酮对泌乳水牛血清氨基酸代谢、血清生化指标和泌乳性能的影响。试验选取泌乳量接近的泌乳中期水牛20头,随机分为2组,每组10个重复,每个重复1头水牛。对照组饲喂基础饲粮,试验组饲喂基础饲粮+45 g/(头·d)桑叶黄酮。试验期5 w。结果显示,饲喂桑叶黄酮能够显著降低血清低密度脂蛋白含量(P水牛泌乳量以及乳蛋白、乳脂肪含量(P研究表明,桑叶黄酮通过调控血清氨基酸和脂质代谢提高了水牛的泌乳性能。

关键词：桑叶黄酮氨基酸泌乳性能水牛

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氯化两面针碱通过Wnt/mTOR信号通路缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低

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南方农业学报 2024年第7期55卷 1897-1906页

作者：张博肖鹏李孟琪周金陈尚江华郑海英田新如黄依林杨小淦杨春艳广西大学动物科学技术学院广西南宁530004 广西水牛研究所/广西水牛遗传繁育重点实验室广西南宁530001

【目的】探究氯化两面针碱(Nitidine chloride,NitC)对热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的影响,为实际生产中缓解热应激对水牛乳品质的负面影响提供理论依据。【方法】记录非热应激季节和热应激季节牛舍温湿度指数(Temperature-... 详细信息

【目的】探究氯化两面针碱(Nitidine chloride,NitC)对热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的影响,为实际生产中缓解热应激对水牛乳品质的负面影响提供理论依据。【方法】记录非热应激季节和热应激季节牛舍温湿度指数(Temperature-humidity index,THI),检测水牛呼吸频率和直肠温度以判断水牛是否处于热应激状态;采集奶样进行乳成分分析以探究热应激对水牛奶β-酪蛋白含量的影响;以水牛乳腺上皮细胞为研究对象,经40.5℃处理24 h建立细胞热应激模型,使用LiCl和LGK974分别激活和抑制Wnt通路,检测水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的表达水平,探究氯化两面针碱缓解热应激水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低的作用机制。【结果】与非热应激季节相比,热应激季节牛舍THI升高并超过水牛热应激阈值,水牛呼吸频率和直肠温度显著升高(P水牛奶β-酪蛋白含量显著降低;细胞试验结果表明,40.5℃处理24 h能显著降低水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量;而氯化两面针碱处理能有效缓解热应激对水牛乳腺上皮细胞的影响,显著提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量。【结论】热应激降低了水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量及β-酪蛋白合成相关基因和蛋白的相对表达量,氯化两面针碱则通过Wnt/mTOR信号通路提高水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量、细胞活力及Wnt2、mTOR、β-casein基因和蛋白的相对表达量,以缓解热应激造成的水牛乳腺上皮细胞β-酪蛋白含量降低。

关键词：氯化两面针碱热应激水牛乳腺上皮细胞 Wnt/mTOR通路 β-酪蛋白

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水牛卵泡不同发育阶段差异表达基因分析

基因组学与应用生物学 2024年第5期43卷 853-863页

作者：徐晓晛蒋晗偲李志鹏崔奎青罗西尔杨春艳刘庆友广西大学动物科学技术学院南宁530004 中国农业科学院广西壮族自治区水牛研究所广西水牛遗传繁育重点实验室南宁530004 佛山科学技术学院生命科学学院佛山528225

本研究旨在利用转录组测序技术探究摩拉水牛(Bubalus bubalis)发情期不同大小卵泡的基因表达谱,并进一步了解其对卵泡发育过程中相关激素的影响。通过对摩拉水牛进行Ovsynch法同期发情处理,B超检测卵泡大小并按照大、中、小3种类型(>8 m... 详细信息

本研究旨在利用转录组测序技术探究摩拉水牛(Bubalus bubalis)发情期不同大小卵泡的基因表达谱,并进一步了解其对卵泡发育过程中相关激素的影响。通过对摩拉水牛进行Ovsynch法同期发情处理,B超检测卵泡大小并按照大、中、小3种类型(>8 mm、4~7 mm、0~3 mm)区分,活体采集卵泡液后提取RNA送单细胞转录组测序。将获得的数据进行组间两两比较,以|log2fold change|≥1且P水牛卵泡发育过程中激素调节的关键基因,如BAMBI、FST、INHA、INHBA、INHBB、GATA6和GFAP。综上,该研究结果为进一步探究水牛卵泡发育过程中的关键基因及可能的分子调控机制提供了参考。

关键词：水牛(Bubalus bubalis) 卵泡大小卵母细胞激素调节转录组测序