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牛结节性皮肤病病毒ORF123基因缺失重组病毒的构建及增殖能力分析

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畜牧兽医学报 2024年第10期 4530-4541页

作者：王芳萍任善会郜晓虹杨雪李积雲王相伟殷相平孙跃峰陈豪泰万学瑞甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所青海省科学技术信息研究所

旨在通过缺失牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF123基因，分析其增殖能力，为LSDV ORF123功能研究奠定基础。本研究利用同源重组，以ORF123基因作为靶标，增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记，采用融合PCR方法，扩增同源左右臂序列以及EGFP... 详细信息

旨在通过缺失牛结节性皮肤病病毒(LSDV)ORF123基因，分析其增殖能力，为LSDV ORF123功能研究奠定基础。本研究利用同源重组，以ORF123基因作为靶标，增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为筛选标记，采用融合PCR方法，扩增同源左右臂序列以及EGFP基因表达框，克隆至pUC-19T载体，构建基因缺失转移载体pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒。然后将pH5-LSDVΔORF123-EGFP质粒转染至Vero细胞，并感染LSDV/CHA/FJ/2021毒株，利用蚀斑、梯度稀释和挑取绿色荧光单克隆细胞筛选纯化重组毒株，并鉴定其遗传稳定性和增殖能力。结果显示，利用EGFP筛选标记，通过多次挑斑筛选纯化获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP。该重组病毒至少在8代细胞传代中能稳定表达绿色荧光蛋白，接种MDBK细胞后绘制一步增殖曲线表明该重组病毒滴度略低于亲本毒株。本研究成功获得ORF123基因缺失的重组病毒株LSDVΔORF123-EGFP,为LSDV ORF123蛋白生物学功能研究以及减毒活疫苗的研制奠定基础。

关键词：牛结节性皮肤病病毒 ORF123基因增殖能力同源重组重组病毒

基于非靶向代谢组学探究水牛唾液和血清中的发情标志物

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中国草食动物科学 2024年第5期44卷 11-23页

作者：余洲杨柏高李崇阳曹建华牛一凡覃广胜王旭光万鹏程梁淦赵学明阿布力孜·吾斯曼新疆农业大学动物科学学院乌鲁木齐830052 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 中国农业科学院广西壮族自治区水牛研究所南宁530001 新疆农垦科学院畜牧兽医研究所石河子832099

在现代化规模养殖中,水牛发情不明显的问题日益突出。研究旨在利用高通量非靶向代谢组学分析不同发情阶段水牛唾液和血清中代谢物的差异。在相同的饲养管理条件下,选择15头尼里-拉菲水牛,每头注射氯前列醇4 mL,注射当天计为第0天。分别... 详细信息

在现代化规模养殖中,水牛发情不明显的问题日益突出。研究旨在利用高通量非靶向代谢组学分析不同发情阶段水牛唾液和血清中代谢物的差异。在相同的饲养管理条件下,选择15头尼里-拉菲水牛,每头注射氯前列醇4 mL,注射当天计为第0天。分别在水牛发情前期(第1天)、发情期(第3天)、发情后期(第6天)早上饲喂之前(08:00-11:00)采集唾液和血清,样品处理后采用非靶向代谢组学检测。结果显示,不同发情阶段水牛的唾液和血清中均存在差异代谢物,发情期/发情前期水牛唾液中共鉴定出30种显著差异代谢物,血清中共鉴定出85种显著差异代谢物;发情期/发情后期水牛唾液中共鉴定出8种显著差异代谢物,血清中共鉴定出66种显著差异代谢物。这些差异代谢物主要富集在胰高血糖素信号通路、磷酸戊糖途径、甘油酯代谢等通路上。唾液代谢物与血清代谢物之间存在相关性。唾液中的差异代谢物D-2-磷酸甘油酸、L-丙酰肉碱、白三烯d4和8-异前列腺素a1可能作为水牛发情生物标志物的关键代谢物。

关键词：水牛发情鉴定血清唾液代谢组学

两种白颖苔草对梯度NaCl胁迫的生理生化响应及综合评价

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草地学报 2024年第3期32卷 736-745页

作者：吴一鸣崔会婷张昆李跃李明娜孙彦中国农业大学草业科学与技术学院北京100193 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193 青岛农业大学草业学院山东青岛266100

本试验以两个白颖苔草(Carex rigescens)品种‘绿坪1号’和‘绿坪2号’为材料,使用0,100,200和300 mmol·L^(-1)NaCl处理21 d,对处理后白颖苔草叶片进行了叶绿素含量、相对电导率、相对含水量、过氧化氢含量、丙二醛含量、钾钠比、净光... 详细信息

本试验以两个白颖苔草(Carex rigescens)品种‘绿坪1号’和‘绿坪2号’为材料,使用0,100,200和300 mmol·L^(-1)NaCl处理21 d,对处理后白颖苔草叶片进行了叶绿素含量、相对电导率、相对含水量、过氧化氢含量、丙二醛含量、钾钠比、净光合速率、气孔导度、胞间二氧化碳浓度、蒸腾速率、超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性指标的测定,并对各测定值进行隶属函数分析比较,探究两种白颖苔草在长期盐胁迫下的耐盐特性。结果表明:‘绿坪1号’中丙二醛含量和过氧化氢含量在盐浓度300 mmol·L^(-1)处理后比对照相比有更大幅度的上升;两材料中超氧化物歧化酶和过氧化物酶活性变化不一致。随后经过相关性分析、主成分分析和隶属函数分析,提取3个主成分作为白颖苔草耐盐性评价的综合指标,经过计算得出耐盐性较强的是‘绿坪2号’。研究结果对白颖苔草在盐碱地利用及后续耐盐机理研究具有参考意义。

关键词：白颖苔草盐胁迫抗氧化酶活性隶属函数综合评价

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α属冠状病毒入侵宿主所需宿主因子研究进展

病毒学报 2024年第1期40卷 215-224页

作者：孙亚娟张达汤傲星袁莉刚刘光清朱杰中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 甘肃农业大学动物医学院兰州310029

属冠状病毒包含众多对畜牧业存在重大威胁的成员,如猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猫传染性腹膜炎病毒等。病毒识别细胞表面的受体是感染宿主的第一步。因此,探索冠状病毒感染机制对了解病毒的组织嗜性和宿主谱具有重要意义。... 详细信息

属冠状病毒包含众多对畜牧业存在重大威胁的成员,如猪传染性胃肠炎病毒、猪流行性腹泻病毒、猫传染性腹膜炎病毒等。病毒识别细胞表面的受体是感染宿主的第一步。因此,探索冠状病毒感染机制对了解病毒的组织嗜性和宿主谱具有重要意义。本文系统总结了近年来α属冠状病毒入侵宿主所需的受体和其它辅助性宿主因子的作用机理。

关键词：属冠状病毒功能性受体辅助因子入侵机制

褪黑素通过改善线粒体动力学缓解棕榈酸诱导的牛子宫内膜上皮细胞损伤

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畜牧兽医学报 2024年第9期55卷 3978-3987页

作者：王忆巩建飞衡诺胡樱凡王蕊王欢朱妮何维胡智辉郝海生朱化彬赵善江中国农业科学院北京畜牧兽医研究所农业农村部畜禽生物育种重点实验室北京100193

旨在探究褪黑素对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)线粒体动力学的影响及机制。本试验以BEECs为研究对象,分为3组:对照组、PA组和褪黑素组,其中,对照组添加0.2 mmol·L^(-... 详细信息

旨在探究褪黑素对棕榈酸(palmitic acid,PA)诱导的牛子宫内膜上皮细胞(bovine endometrial epithelial cells,BEECs)线粒体动力学的影响及机制。本试验以BEECs为研究对象,分为3组:对照组、PA组和褪黑素组,其中,对照组添加0.2 mmol·L^(-1)BSA溶剂,PA组添加0.2 mmol·L^(-1)PA,褪黑素组同时添加0.2 mmol·L^(-1)PA和100 nmol·L^(-1)褪黑素。本研究通过CCK8法(n=4)和Annexin V-FITC/PI双染法(n=3)检测细胞活力和凋亡情况;利用细胞流式术检测细胞线粒体内的ROS水平(n=3);进一步使用Seahorse XFe96细胞代谢呼吸动态分析仪检测耗氧率、基础呼吸值、ATP合成能力等线粒体呼吸功能的相关指标(n=4);qRT-PCR法检测线粒体动力学相关基因MFN1、DRP 1和PGC1-α的mRNA表达变化量(n=3);最后通过Western-Blot法检测线粒体动力学相关蛋白MFN1、p-DRP1、DRP1和PGC1-α的表达变化量(n=3)。结果显示:与PA组相比,1)添加褪黑素能显著降低BEECs线粒体ROS水平(P研究表明褪黑素可能通过改善BEECs线粒体动力学功能,从而缓解PA诱导下的线粒体氧化应激和提高线粒体呼吸功能,最终增强BEECs活力和降低BEECs凋亡;本研究初步探究了褪黑素对PA诱导BEECs损伤的作用机制,为提高严重NEB奶牛低繁殖力提供了理论依据。

关键词：褪黑素棕榈酸牛子宫内膜上皮细胞线粒体动力学凋亡

猫源TMED10蛋白过表达稳转细胞株的构建及其应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：孙亚娟袁莉刚张达汤傲星刘光清朱杰甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院上海兽医研究所

旨在建立猫源TMED10蛋白过表达稳转细胞株（CRFK-TMED10），为猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus -FIPV）体外增殖，研究其感染机制提供重要工具。首先，通过特异性PCR，从猫肠道组织cDNA文库中，获得猫源TMED1... 详细信息

旨在建立猫源TMED10蛋白过表达稳转细胞株（CRFK-TMED10），为猫传染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus -FIPV）体外增殖，研究其感染机制提供重要工具。首先，通过特异性PCR，从猫肠道组织cDNA文库中，获得猫源TMED10基因编码序列，并进行生物信息分析，发现猫源TMED10为双跨膜的亲水性蛋白，具有分泌信号肽，与牛源TMED10亲缘关系最近。其次，利用三质粒慢病毒包装系统构建含猫源TMED10基因的重组慢病毒，感染猫肾上皮细胞（CRFK），并通过杀稻瘟菌素进行加压筛选，随后利用Western bloting、IFA对阳性细胞进行鉴定，最终获得稳定过表达猫源TMED10蛋白的CRFK-TMED10细胞系。此外，研究发现FIPV SH2021毒株在该细胞系中的增殖能力显著提高。本研究为后续探索TMED10促进FIPV增殖的分子机制提供了重要工具。

关键词：猫源TMED10 慢病毒包装过表达细胞系猫传染性腹膜炎病毒

N1亚型猪流感病毒荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用

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中国兽医科学 2024年第2期54卷 157-161页

作者：张傲王佳慧王文佳谭斌张淑琴中国农业科学院特产研究所吉林长春130112

为建立一种灵敏准确检测N1亚型猪流感病毒(SIV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,本研究靶向N1亚型SIV NA基因的保守区设计特异性引物并构建质粒标准品,通过优化反应条件建立real-time PCR检测方法,对其特异性、敏感性、重复性进行评估... 详细信息

为建立一种灵敏准确检测N1亚型猪流感病毒(SIV)的SYBR Green实时荧光定量PCR方法,本研究靶向N1亚型SIV NA基因的保守区设计特异性引物并构建质粒标准品,通过优化反应条件建立real-time PCR检测方法,对其特异性、敏感性、重复性进行评估,与常规PCR方法进行对比并应用于临床检测。结果显示,优化后所建方法的标准曲线为y=-3.329 7x+36.881,R^(2)=0.999 5,E=99.6%,质粒标准品的拷贝数与C_(t)值具有良好的线性关系。该方法特异性良好,与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)无交叉反应。最低检测量为1.03×10^(1)copies/μL,灵敏度为常规PCR的100倍。重复性试验结果显示,组内与组间的变异系数均小于3.0%。所建方法对临床样品的检出率与鸡胚分离检测结果具有较高的符合率。上述结果表明,所建方法灵敏度高且特异性强,可应用于N1亚型SIV的临床样品检测与鉴定。

关键词：猪流感病毒 N1亚型实时荧光定量PCR 鉴别诊断

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犬细小病毒层析纯化方法的建立

畜牧与兽医 2024年第4期56卷 49-53页

作者：代昕宇胡博邓效禹张成琪李昀真李甜甜孙亚杰许丽文白雪中国农业科学院特产研究所吉林长春130112

病毒纯度是抗体制备和疫苗免疫效果提升的关键,本文利用Purose shell V15离子交换层析和Sepharose 4FF分子筛层析分别建立了犬细小病毒(CPV)的纯化方法。将CPV经过离心澄清和膜包浓缩后,用AKTA蛋白纯化仪结合Purose shell V15和Sepharos... 详细信息

病毒纯度是抗体制备和疫苗免疫效果提升的关键,本文利用Purose shell V15离子交换层析和Sepharose 4FF分子筛层析分别建立了犬细小病毒(CPV)的纯化方法。将CPV经过离心澄清和膜包浓缩后,用AKTA蛋白纯化仪结合Purose shell V15和Sepharose 4FF分别进行纯化,最后使用超滤管浓缩,通过病毒含量测定、总蛋白回收率测定、SDS-PAGE、Western blot和电镜观察分析病毒的纯化效果。结果:2种方法纯化后病毒形态典型,病毒颗粒大小约20 nm,总蛋白去除率97%以上,回收率71%以上;Purose shell V15纯化后的病毒经SDS-PAGE和Western blot分析显示无细胞成分的杂带,而Sepharose 4FF纯化后的病毒有少量的牛血清白蛋白条带。本试验结果表明这2种方法均可用于CPV的纯化,Purose shell V15纯化后的病毒纯度更高。

关键词：犬细小病毒纯化离子交换分子筛

北京鸭DHAV-3抗性与易感品系的脂质轮廓鉴定与分析

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中国畜牧兽医 2024年第6期51卷 2253-2260页

作者：常卓梁素芸王帅钦杨宇泽薛振华赵春颖林逍然路永强侯水生北京市畜牧总站北京100101 中国农业科学院北京畜牧兽医研究所北京100193

【目的】试验旨在研究抗鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)的北京鸭专门化品系(即抗性品系Z7-R)与DHAV-3易感品系(Z7-S)的脂质代谢轮廓,并筛选品系间差异脂质标志物。【方法】选取2日龄Z7系DHAV-3抗性北京... 详细信息

【目的】试验旨在研究抗鸭甲肝病毒基因3型(Duck hepatitis A virus genotype 3,DHAV-3)的北京鸭专门化品系(即抗性品系Z7-R)与DHAV-3易感品系(Z7-S)的脂质代谢轮廓,并筛选品系间差异脂质标志物。【方法】选取2日龄Z7系DHAV-3抗性北京鸭和易感北京鸭各6只,采集血液与肝脏组织,进行血液生化指标测定与基于液相色谱-质谱联用技术(LC-MS)的非靶向肝脏脂质组检测。采用t检验、偏最小二乘分析(PLS-DA)和差异倍数(FC)综合筛选品系间显著差异脂质。【结果】Z7-R系北京鸭血浆总胆固醇、低密度脂蛋白和磷脂含量均显著高于Z7-S系(P<0.05)。脂质组分析共鉴定到1 532个脂质代谢物,涵盖了脂肪酰(FA)、甘油酯(GL)、甘油磷脂(GP)、鞘脂(SP)、固醇脂(ST)5个大类。共筛选到84个显著差异脂质,其中甘油酯类主要为甘油三酯(TG),且Z7-R系含量均高于Z7-S系(P<0.05);甘油磷脂类主要为溶血磷脂酰胆碱(LPC)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)和游离脂肪酸(FFAs),且Z7-R系含量均低于Z7-S系(P<0.05)。共筛选到10个显著差异的脂质显著富集到鞘脂代谢、甘油磷脂代谢、甘油酯代谢、亚油酸代谢和α-亚麻酸代谢通路中。【结论】脂质组学技术可用于区分北京鸭Z7-R系与Z7-S系,筛选到的10个显著差异脂质物质可作为潜在的DHAV-3抗性与易感性状相关生物标志物。

关键词：北京鸭鸭甲肝病毒基因3型脂质组代谢

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