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新型冠状病毒Omicron变异株感染患者血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶水平与年龄的相关性

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中华医院感染学杂志 2024年第3期34卷 371-375页

作者：买三月路丽苹刘萱董钦才刘海楠曹诚中国人民解放军联勤保障部队第九八八医院检验科河南郑州450042 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院生物工程研究所北京100850

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)Omicron变异株感染患者血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶与年龄的相关性.方法选取2022年10月16日-12月31日联勤保障部队第九八八医院确诊的226例COVID-19 O-micron变异株感染患者为感染组,以同期住院同科室... 详细信息

目的探讨新型冠状病毒肺炎(COVID-19)Omicron变异株感染患者血清肌酸激酶和乳酸脱氢酶与年龄的相关性.方法选取2022年10月16日-12月31日联勤保障部队第九八八医院确诊的226例COVID-19 O-micron变异株感染患者为感染组,以同期住院同科室有感染征象但未感染Omicron变异株的新冠核酸阴性患者247例为对照组,分别收集两组患者的临床资料和实验室检测指标.对两组患者从性别、年龄分布等临床特点及实验室指标肌酸激酶(CK)和乳酸脱氢酶(LDH)进行分析.结果两组患者性别构成和年龄分布比较差异均无统计学意义;与对照组比较,感染组总人群的肌酸激酶CK水平及异常增高比例均升高(P<0.05),其中CK水平升高以老年人(≥60岁)、刚成年(16岁~)以及幼儿(1岁~)最为显著(P<0.05),LDH水平增高及异常增高比例以幼儿(1岁~)最为显著(P<0.05).结论COVID-19 Omicron感染患者的肌酸激酶CK升高以成年患者为主,而在婴儿中LDH升高更为常见,上述结果可为针对性制定治疗方案提供参考.

关键词： COVID-19 Omicron变异株肌酸激酶乳酸脱氢酶老年幼儿

有机磷水解酶异源表达纯化及抗乙基对氧磷中毒能力初步评价

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中国药理学与毒理学杂志 2024年

作者：马铭翟亚楠王顺业张中华李前高静军事科学院军事医学研究院中国人民解放军联勤保障部队第988医院药剂科

目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH)，初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株，采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化，对纯化产物进行蛋白质谱鉴定；以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数... 详细信息

目的异源表达纯化有机磷水解酶(OPH)，初步评价其动物体内抗乙基对氧磷中毒能力。方法构建OPH的大肠杆菌表达菌株，采用镍柱亲和色谱及凝胶过滤色谱进行纯化，对纯化产物进行蛋白质谱鉴定；以乙基对氧磷为底物测定酶活力及其动力学常数Km,Vmax),kcat和kcat/Km;12只SD大鼠随机分为OPH组和溶剂对照组，OPH组按1 mg·kg-1剂量iv给予OPH溶液，对照组给予等体积生理盐水，给药后两组立刻sc给予2倍半数致死量(LD50乙基对氧磷(0.86 mg·kg-1)染毒，观察大鼠状态，对中毒症状进行评分。对存活大鼠每隔24 h重复sc给予2倍LD50乙基对氧磷，根据大鼠存活情况与中毒症状分别绘制生存曲线与症状评分图，评价OPH的抗有机磷中毒能力。结果成功制备了OPH的大肠杆菌表达菌株，经过两步纯化后由十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳表征得单一条带，OPH纯度较高，经蛋白质谱测定制备蛋白与目标蛋白序列一致；以乙基对氧磷为底物时，OPH的Km=7.5×10-5mol·L-1,Vmax=2.2×10-7mol·L-1·s-1,kcat=158.4 s-1,kcat/Km=2.1×106L·mol-1·s-1；对照组大鼠sc给予2倍LD50乙基对氧磷后，出现严重中毒症状，15 min内全部死亡，实验组大鼠在首次染毒后均未出现中毒症状，连续染毒后中毒症状逐渐加重直至第4天全部死亡。结论成功制备高纯度OPH，且OPH在大鼠体内能有效对抗乙基对氧磷中毒。

关键词：有机磷化合物生物清除剂有机磷水解酶乙基对氧磷酶动力学参数

清除Kupffer细胞减轻APAP诱导的药物性肝损伤

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中国生物工程杂志 2024年第6期44卷 68-77页

作者：刘慧茹王婷李亚婷向慎思詹轶群任广明杨晓明安徽医科大学基础医学院合肥230032 北京工业大学环境与生命学部北京1100124 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京100850

目的:利用Cre/iDTR系统特异性剔除Kupffer细胞,探究Kupffer细胞在对乙酰氨基酚(APAP)诱导的药物性肝损伤中的作用。方法:腹腔注射1μg白喉毒素(DT),流式细胞术检测注射后肝脏Kupffer细胞的清除效率。接着将Clec4fCre/iDTR小鼠分为4组,... 详细信息

目的:利用Cre/iDTR系统特异性剔除Kupffer细胞,探究Kupffer细胞在对乙酰氨基酚(APAP)诱导的药物性肝损伤中的作用。方法:腹腔注射1μg白喉毒素(DT),流式细胞术检测注射后肝脏Kupffer细胞的清除效率。接着将Clec4fCre/iDTR小鼠分为4组,分别是对照组、注射DT组、注射APAP组及注射DT和APAP组,饥饿18 h后腹腔注射300 mg/kg APAP,建立急性药物性肝损伤模型。酶联免疫吸附试验(ELISA)和细胞因子微球检测(CBA)技术检测血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的释放和炎症因子的分泌;苏木精-伊红(HE)染色和原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色检测肝组织的坏死和肝细胞的凋亡;免疫组织化学检测肝脏炎性细胞的浸润;免疫印迹法检测肝组织中信号通路的活化;定量聚合酶链反应(qPCR)检测肝脏中炎症因子的mRNA表达水平。结果:清除Kupffer细胞,降低APAP模型血清中ALT、AST转氨酶的释放,减轻肝组织坏死和肝细胞凋亡。与对照组相比,清除Kupffer细胞抑制血清中TNF-α、IL-6等炎症因子的分泌,减少肝脏F4/80^(+)、Ly6G^(+)细胞的浸润,降低TNF-α、IL-6等炎性因子的mRNA水平以及JNK炎症通路的活化。结论:清除Kupffer细胞可显著缓解APAP诱导的药物性肝损伤,明确了Kupffer细胞在APAP致肝损伤中的重要作用。

关键词：对乙酰氨基酚药物性肝损伤 Kupffer细胞 Cre/iDTR系统炎症

基于CRISPR/Cas13a的马尔堡病毒核酸检测方法的建立

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微生物学报 2024年第8期64卷 3073-3085页

作者：闫阔诚李浩白萱洋韩尧石大伟贾雷立孙岩松中国人民解放军军事科学院军事医学研究院北京100071 中国人民解放军疾病预防控制中心北京100071 中国食品药品检定研究院传染病诊断试剂二室北京100050

【目的】建立一种基于成簇的规律间隔短回文重复序列及其相关蛋白13a(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/associated protein 13a,CRISPR/Cas13a),针对马尔堡病毒核酸的快速检测方法。【方法】根据马尔堡病毒核蛋白(nucleoprotein,NP)基因保守区序列设计合成特异性的逆转录酶重组酶介导链替换核酸扩增(reverse transcription recombinase aided amplification,RT-RAA)引物及CRISPR RNA(crRNA),利用RT-RAA等温扩增技术对靶序列进行扩增,通过CRISPR/Cas13a系统检测扩增产物,并结合消线法(easy-readout and sensitive enhanced,ERASE)侧流层析试纸进行结果判读。最后利用国家标准品对建立的新方法的灵敏度和特异性进行评估。【结果】筛选出一组针对马尔堡病毒NP基因的高效扩增引物和crRNA,建立了用于马尔堡病毒检测的CRISPR-ERASE方法,可在1 h内检测出浓度为1 copy/μL目标核酸,并与其他多种病原体无交叉反应。【结论】本研究基于CRISPR/Cas13a建立了一种快速、简便、高灵敏度和高特异性的马尔堡病毒核酸检测方法。

关键词：马尔堡病毒 CRISPR/Cas13a 核酸检测逆转录酶重组酶介导链替换核酸扩增(RT-RAA)

M1型乙酰胆碱受体在微波辐射致小鼠认知行为改变中的作用

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中国兽医杂志 2024年第4期60卷 43-49页

作者：何钢华潘婷冯志华崔智琳杨镁楹李杨左红艳邓桦佛山科学技术学院生命科学与工程学院广东佛山528231 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院辐射医学研究所北京海淀100850

为了研究微波辐射对海马乙酰胆碱受体(AChRs)表达的影响,探讨微波辐射敏感的AChRs亚型及其在微波辐射致认知行为改变中的作用。本试验以C57BL/6N小鼠为试验对象,建立微波辐射动物模型,通过脑组织石蜡切片和苏木精-伊红(H.E.)染色,观察... 详细信息

为了研究微波辐射对海马乙酰胆碱受体(AChRs)表达的影响,探讨微波辐射敏感的AChRs亚型及其在微波辐射致认知行为改变中的作用。本试验以C57BL/6N小鼠为试验对象,建立微波辐射动物模型,通过脑组织石蜡切片和苏木精-伊红(H.E.)染色,观察海马阿蒙氏角1(CA1)、阿蒙氏角2(CA2)、阿蒙氏角3(CA3)和齿状回(DG)各亚区组织病理学变化;利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测海马组织AChRs的表达;微波辐射后,采用M1型AChR激动剂VU0357017 hydrochloride以10 mg/(kg·bw)腹腔注射小鼠,利用新物体识别和Y迷宫试验评价小鼠认知行为改变。结果显示,微波辐射后7 d,小鼠海马CA3区病理改变较为明显,主要表现为神经元核固缩深染、血管周围间隙增宽;RT-qPCR结果显示,与空白对照组相比较,微波辐射后海马组织M1和M3型AChR mRNA相对表达量均显著下调(M1-AChR,P0.05);Y迷宫试验结果显示,辐射前后小鼠的自由交替率均未见统计学差异(P>0.05)。结果表明,微波辐射可引起海马AChRs亚基构成比发生变化,海马CA3区组织病理学改变,M1型AChR对于微波辐射所致认知行为功能下降具有重要的调控作用。

关键词：乙酰胆碱受体海马微波辐射

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基于别构转录因子的水中砷离子无细胞传感器

环境科学与技术 2024年第4期47卷 9-15页

作者：陈淑婷张永康康晓丹赵辰夏志强王景峰谌志强上海海洋大学食品学院上海201306 军事科学院军事医学研究院环境医学与作业医学研究所天津300050 中国人民解放军联勤保障部队908医院江西南昌330001

为了探索水环境中砷离子现场快速检测的新方法,文章构建以特异性识别砷的别构转录因子ArsR为识别元件,荧光RNA为输出信号的无细胞生物传感器,实现对砷离子的现场快速检测。结果表明,在最佳实验条件下,建立的无细胞生物传感器可以在1 h... 详细信息

为了探索水环境中砷离子现场快速检测的新方法,文章构建以特异性识别砷的别构转录因子ArsR为识别元件,荧光RNA为输出信号的无细胞生物传感器,实现对砷离子的现场快速检测。结果表明,在最佳实验条件下,建立的无细胞生物传感器可以在1 h内实现对1 nmol/L砷离子的检出,借助酶标仪可以实现在1~1 000 nmol/L浓度范围内的定量检测,线性方程为Y=1 232 lg[As^(3+)]-629.5(R^(2)=0.989 3)。实际水样中砷离子的检测结果与原子吸收光谱法的测量结果基本一致,加标回收率为98.866%~102.001%,且在其他重金属的干扰下也能正确检测目标物。该方法拥有高灵敏度和特异性强的特点,为砷离子的现场快速检测提供了一种新思路。

关键词：砷离子别构转录因子无细胞传感器现场检测

Omicron变异株XBB.1.16刺突蛋白对人非小细胞肺癌细胞的生物学功能的影响

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中国癌症防治杂志 2024年第3期16卷 271-276页

作者：房廖鑫亢小峰薛春源潘露陈佳欣汤传昊孙丽颖徐小洁杜祎萌中国人民解放军军事科学院军事医学研究院北京100071

目的探讨新型冠状病毒Omicron变异株XBB.1.16刺突蛋白(XBB.1.16-S)感染人非小细胞肺癌细胞H1299-ACE2的病毒学特征及其对H1299-ACE2细胞线粒体受损的影响。方法以亲本pCMV3-SARS-CoV-2-S质粒为模板构建XBB.1.16-S基因真核表达载体(pCMV3... 详细信息

目的探讨新型冠状病毒Omicron变异株XBB.1.16刺突蛋白(XBB.1.16-S)感染人非小细胞肺癌细胞H1299-ACE2的病毒学特征及其对H1299-ACE2细胞线粒体受损的影响。方法以亲本pCMV3-SARS-CoV-2-S质粒为模板构建XBB.1.16-S基因真核表达载体(pCMV3-XBB.1.16-S质粒)后转染H1299-ACE2细胞,比较两者诱导细胞形成合胞体的能力。利用双质粒系统包装SARS-CoV-2-S和XBB.1.16-S假病毒后分别感染H1299-ACE2细胞,测定感染后宿主细胞荧光素酶强度并采用Western blot实验检测细胞中S蛋白的切割效率,采用MitoTracker Green探针观察染色细胞的线粒体形态,采用流式细胞仪检测细胞的线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平和活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平。结果与亲本pCMV3-SARS-CoV-2-S质粒相比,pCMV3-XBB.1.16-S质粒的T19I、V83A、G142D等关键氨基酸突变位点突变成功,且转染H1299-ACE2细胞后所形成的合胞体面积明显减小(P研究奠定了重要基础。

关键词：非小细胞肺癌 Omicron XBB.1.16 H1299-ACE2细胞线粒体

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虫媒正黄病毒mRNA疫苗研究进展

科学通报 2024年

作者：王族馨迟航邓永强韩晓东内蒙古农业大学生命科学学院中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室

虫媒正黄病毒种类多、传播快、致病强,长期严重威胁公共卫生安全,目前仍然缺乏针对正黄病毒的特异性治疗手段.疫苗接种是防控正黄病毒传播和感染的重要手段,多种制备技术生产的传统疫苗在黄热病毒、日本脑炎病毒、森林脑炎病毒和登革病... 详细信息

虫媒正黄病毒种类多、传播快、致病强,长期严重威胁公共卫生安全,目前仍然缺乏针对正黄病毒的特异性治疗手段.疫苗接种是防控正黄病毒传播和感染的重要手段,多种制备技术生产的传统疫苗在黄热病毒、日本脑炎病毒、森林脑炎病毒和登革病毒的防控中发挥了关键性作用.然而,这些疫苗在安全性和免疫效力上仍有待进一步提高和完善.值得注意的是,在新型冠状病毒大流行的背景下,可快速制备的mRNA疫苗成为了应对新突发传染病的关键疫苗技术,必将极大地助力快速研发安全、高效的正黄病毒疫苗,为未来正黄病毒的科学防控奠定基础.为此,本文首先对mRNA疫苗的分子基础和作用机制进行了总结.然后,着重介绍了几种正黄病毒的生物学特征和流行情况,以及针对这些病毒的mRNA疫苗研究现状.最后,对合成生物学、核苷酸修饰技术和新型递送系统在未来mRNA疫苗研发中的作用进行了归纳,以期为未来快速研发高效、安全的正黄病毒mRNA疫苗提供研究思路和技术指导.

关键词：虫媒正黄病毒 mRNA疫苗体液免疫细胞免疫

SHERLOCK-HBA检测方法的建立及其在血液鉴别中的应用

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生物化学与生物物理进展 2024年第8期51卷 1971-1982页

作者：姚乾威何红霞胡胜赵一霞罗雨季安全孙启凡山西医科大学法医学院太原030001 公安部鉴定中心法医遗传学公安部重点实验室北京100038 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院微生物流行病研究所北京100071

目的基于规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/CRISPR关联蛋白质系统(Cas)技术建立检测血液特异性血红蛋白α(HBA)mRNA的方法,以准确、快速地鉴定血液样本。方法本研究通过设计和筛选血液特异性HBA mRNA上的CRISPR RNA(crRNA)短片段,基于C... 详细信息

目的基于规律成簇的间隔短回文重复(CRISPR)/CRISPR关联蛋白质系统(Cas)技术建立检测血液特异性血红蛋白α(HBA)mRNA的方法,以准确、快速地鉴定血液样本。方法本研究通过设计和筛选血液特异性HBA mRNA上的CRISPR RNA(crRNA)短片段,基于CRISPR/Cas技术原理建立了SHERLOCK-HBA检测方法,对5种体液(包括外周血、月经血、唾液、阴道分泌液、精液)共79份样本进行检测以评价所建方法鉴别血液的能力,并通过种属特异性实验、灵敏度实验、模拟混合斑检测、模拟降解样本检测、实际案件样本检测等进一步验证实验体系的法医学应用能力。结果该方法检测人源血液的相对荧光单位(RFU)值显著高于非血液(P研究成功建立了一种基于CRISPR/Cas技术的SHERLOCK-HBA检测体系,能准确、灵敏地鉴定血液,操作简单、快速,为快速识别血液类样本提供了新的思路和参考。

关键词：法医遗传学血液鉴定血红蛋白α CRISPR/Cas SHERLOCK