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急性缺血性脑卒中瘀毒互结证大鼠模型“脑-脾炎症耦联”机制探讨

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中国比较医学杂志 2024年第2期34卷 45-54页

作者：董一蕾刘悦李珺媛付建华张允岭姚明江中国中医科学院西苑医院基础医学研究所中药药理北京市重点实验室北京100091 中国中医科学院西苑医院北京100091

目的探讨急性缺血性脑卒中瘀毒互结证大鼠模型脑损伤与脾损害的相关性,分析对MCP-1/CCR2趋化因子信号轴的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、角叉菜胶联合干酵母菌瘀毒互结证(Carrageenan/Yeast,CA/Y)组(单纯证候组)、... 详细信息

目的探讨急性缺血性脑卒中瘀毒互结证大鼠模型脑损伤与脾损害的相关性,分析对MCP-1/CCR2趋化因子信号轴的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham)、角叉菜胶联合干酵母菌瘀毒互结证(Carrageenan/Yeast,CA/Y)组(单纯证候组)、大脑中动脉阻塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)组(单纯疾病组)、大脑中动脉阻塞瘀毒互结证(MCAO+CA/Y)组(病证结合组),每组10只。CA/Y组与MCAO+CA/Y组于造模首日经腹腔注射角叉菜胶10 mg/kg、第2日背部皮下注射干酵母悬液2 mg/kg,MCAO组及MCAO+CA/Y组于第2日采用线栓法建立大脑中动脉阻塞模型。脑梗死模型术后24 h,对各组大鼠进行神经功能缺损评分,采用TTC染色法观察脑梗死面积百分比,取脾测定脾重量,采用Spearman相关系数分析脑梗死面积百分比与脾重量的相关性,苏木素-伊红(HE)染色法观察脑组织及脾组织病理形态,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测大鼠血浆中单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ)含量,Western blot法检测缺血侧脑组织趋化因子C-C-基元受体2(chemokine C-C-motif receptor 2,CCR2)蛋白表达。结果与sham组比较,MCAO组和MCAO+CA/Y组的神经功能缺损评分、脑梗死面积、血浆中MCP-1与IFN-γ含量均显著升高(P性、坏死,小胶质细胞增生明显,小血管明显增多,间质脂质变性;脾组织部分动脉周围淋巴鞘细胞密度减低,边缘区增宽。结论急性缺血性脑卒中瘀毒互结证大鼠模型脑损伤与脾损害存在相关性,可能与MCP-1/CCR2趋化因子信号轴参与“脑-脾炎症耦联”机制有关。

关键词：急性缺血性脑卒中瘀毒互结证脑-脾炎症耦联趋化因子

基于“转录组-成分靶标-表型基因”多维网络全局式探索化湿败毒方抗心肌损伤潜在作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年第22期 69-78页

作者：李玮婕钟余特宫恬夏聪王萍宋丽娟中国中医科学院中药研究所道地药材与品质保障全国重点实验室国家药品监督管理局中医药研究与评价重点实验室

目的：基于“转录组-成分靶标-表型基因”多维网络全局式探索化湿败毒方抗心肌损伤的作用机理。方法：基于中医药百科全书（The Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine， ETCM 2.0， http://***/ETCM2/front/）及中医药整合药... 详细信息

目的：基于“转录组-成分靶标-表型基因”多维网络全局式探索化湿败毒方抗心肌损伤的作用机理。方法：基于中医药百科全书（The Encyclopedia of Traditional Chinese Medicine， ETCM 2.0， http://***/ETCM2/front/）及中医药整合药理学研究平台（Integrative Pharmacology-based Research Platform of Traditional Chinese Medicine， TCMIP v2.0， http://***/TCMIP/***/Home/Login/***）收集化湿败毒方成分预测靶标集；基于CNKI及PubMed数据库挖掘化湿败毒方抗COVID-19的临床优势症状表型，基于CTD数据库收集多柔比星临床副作用症状，并利用HPO数据库及SoFDA数据平台（http://***/Syndrome/front/#/）收集表型相关基因。构建“转录组-成分靶标-表型基因”多维分子网络，并计算网络节点拓扑特征值，筛选网络核心节点，并开展功能挖掘阐释方药作用机理。在此基础之上，基于多柔比星诱导心肌损伤动物模型，开展药效学评价和机制验证。65只SPF级C57BL/6J雄性小鼠，随机分为5组：正常对照组（Control）、多柔比星诱导模型组（DOX）、化湿败毒方低、中、高给药组（HBF-L/M/H），各组13只。用于转录组测序采用H&E及Masson染色进行组织病理学检测、RT-PCR检测心脏组织中纤维化指标、western lotting检测蛋白表达检测。结果：基于ETCM 2.0及TCMIP v2.0共得到1044个化湿败毒方候选靶标；基于CTD数据库、HPO数据集及SoFDA数据平台，共得到1223个方药潜在效应靶标集；心脏转录组测序（RNA-seq），以P-value性疾病。动物实验表明，化湿败毒方可通过抑制多柔比星诱导后心肌组织NLRP3、Caspase-1、ASC、GSDMD异常高表达（P<0.05），改善TGF-β1、SMAD3及α-SMA纤维化指标mRNA水平的异常升高（P<0.05），发挥抗心肌纤维化作用。结论：化湿败毒方可通过多成分、多靶点、多效应改善心肌损伤，其中抑制NLRP3炎症小体激活途径为其优势药效环节，为后续靶向治疗药物的开发提供新思路。

关键词：化湿败毒方心肌损伤多柔比星药效环节免疫-炎症失衡网络

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茯苓运化颗粒治疗2型糖尿病大鼠的非靶向代谢组学分析

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：田孟尧罗珂珂王梦晓胡天宝李洪梅何宗源杨立新郝莉雨司南刘玉洋边宝林王宏洁周严严中国中医科学院中药研究所北京精医和生医药科技有限公司

目的：基于非靶向代谢组学技术分析茯苓运化颗粒对2型糖尿病（T2DM）大鼠血清内源性差异代谢物的调控作用，明确茯苓运化颗粒发挥改善T2DM作用的代谢调控途径。方法：70只SPF级大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、茯苓运化颗粒高... 详细信息

目的：基于非靶向代谢组学技术分析茯苓运化颗粒对2型糖尿病（T2DM）大鼠血清内源性差异代谢物的调控作用，明确茯苓运化颗粒发挥改善T2DM作用的代谢调控途径。方法：70只SPF级大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、茯苓运化颗粒高、中、低剂量组(以生药计，20.70、10.35、5.18 g·kg-1)及阳性药组(盐酸吡格列酮片8.1 mg·kg-1)。除空白组外，其余均以高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）方法构建T2DM大鼠模型。造模成功后，给药组灌胃给予相应药物治疗，空白组及模型组灌胃给予等体积生理盐水，1次/d，给药28 d。给药期间检测各组大鼠空腹血糖、糖化血红蛋白（GHbA1c）水平，给药结束后采用苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠肝组织的病理形态变化。采用超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱高分辨质谱法（UPLC-LTQ-Orbitrap MS）检测大鼠血清内源性代谢物水平，通过主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘法-判别分析（OPLS-DA）处理数据，筛选变量重要性投影（VIP）值>1，P1的差异代谢物，并进行通路富集分析。通过绘制受试者工作特征（ROC）曲线对筛选得到的差异代谢物进行诊断评价。结果：与空白组比较，模型组大鼠空腹血糖水平显著升高（P性药组大鼠给药2周后，空腹血糖明显降低（P性差异标志物对于茯苓运化颗粒治疗T2DM具有较高的诊断价值。结论：茯苓运化颗粒可改善T2DM大鼠症状，其机制可能与调节差异代谢物，调控氨基酸类代谢通路和视黄醇代谢通路相关。

关键词：茯苓运化颗粒 2型糖尿病超高效液相色谱-线性离子阱-静电场轨道阱质谱法(UPLC-LTQ-Orbitrap MS) 非靶向代谢组学受试者工作特征曲线

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基于传统品质评价的野生与栽培潞党参比较

中国实验方剂学杂志 2024年第14期30卷 156-164页

作者：兰晓燕田春芳詹志来周利李翔邱子栋南铁贵袁其里林晓亮田从魁陈美兰康利平中国中医科学院中药资源中心道地药材品质保障与资源持续利用全国重点实验室北京100700 天津中医药大学天津301617 中国中医科学院中医药健康产业研究所南昌330000 无限极(中国)有限公司广州510663 湖北民族大学硒资源研究与生物应用湖北省重点实验室湖北恩施445000

目的:从性状、显微、初生与次生代谢产物含量3个方面对野生和栽培潞党参进行系统的比较研究。方法:收集野生及栽培潞党参样品,使用游标卡尺、卷尺及天平测量其性状数据,番红固绿染色法制作石蜡切片并利用光学显微镜观察其显微结构;按照2... 详细信息

目的:从性状、显微、初生与次生代谢产物含量3个方面对野生和栽培潞党参进行系统的比较研究。方法:收集野生及栽培潞党参样品,使用游标卡尺、卷尺及天平测量其性状数据,番红固绿染色法制作石蜡切片并利用光学显微镜观察其显微结构;按照2020年版《中华人民共和国药典》(一部)党参项下浸出物测定方法检测醇溶性浸出物的含量,蒽酮比色法测定淀粉含量,多糖试剂盒测定总多糖含量,纤维分析仪测定纤维类成分含量,超高效液相色谱法(UPLC)测定单糖、二糖及部分次生代谢产物的含量。结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘法-判别分析(OPLS-DA),以变量重要性投影(VIP)值>1、P性成分。结果:性状方面,野生潞党参的“狮子盘头”、纵皱纹、根头下环状横纹均比栽培潞党参明显,对比断面特征,野生潞党参的皮部外侧裂隙明显较多,木心较大;显微特征方面,野生潞党参的石细胞较多,木质部占比较大,且木质部存在成环的木栓细胞,栽培潞党参的韧皮部占比较大,导管直径较小且排列疏松。初生代谢产物方面,栽培潞党参的45%乙醇浸出物和总多糖含量均明显高于野生潞党参(P性状、显微及化学成分等方面均存在明显差异。葡萄糖、果糖、蔗糖、党参苷Ⅰ、色氨酸及纤维素类成分为野生与栽培潞党参的关键差异性成分。野生党参中炔类化合物含量和果糖积累较多,栽培党参中党参苷Ⅰ和蔗糖含量较高,但纤维素含量明显较低,这可能与其生长环境、生长年限及栽培方式等相关。基于本研究结果,建议增加炔类化合物、果糖与蔗糖的含量比为指标来表征不同生产方式的党参,以引导党参高品质生产。

关键词：党参野生栽培传统品质评价性状显微结构化学成分

从HMGB1-BDNF互作轴所介导的肝-脑对话探讨复方鳖甲软肝片干预酒精性肝病的作用机制

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：刘毓东闫向英李涛张楚蔡冰冰马兆臣林娜张彦琼中国中医科学院中药研究所道地药材与品质保障全国重点实验室福建中医药大学药学院

目的：本研究旨在利用急、慢性酒精性肝病（ALD）小鼠模型，系统且客观地表征复方鳖甲软肝片（FBRP）干预ALD的药效作用特点，并揭示其分子机制。方法：将50只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、FBRP低、中、高剂量组(9.60、1... 详细信息

目的：本研究旨在利用急、慢性酒精性肝病（ALD）小鼠模型，系统且客观地表征复方鳖甲软肝片（FBRP）干预ALD的药效作用特点，并揭示其分子机制。方法：将50只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常组、模型组、FBRP低、中、高剂量组(9.60、19.20、 38.40mg·kg-1)；除正常组外，其余各组给予56°白酒灌胃，构建急性ALD模型，4周后取材。将30只SPF级C57BL/6N性小鼠随机分为正常组、模型组、FBRP中剂量组(19.20 mg·kg-1)，采用Lieber-DeCarli法，构建慢性ALD小鼠模型，持续10周。通过H&E、天狼星红、油红O病理染色及ELISA检测，考察各组肝脏组织的炎症指标；通过醒酒时间、抓网和爬杆时间，客观评价各组小鼠的醉酒行为。进一步，开展基于临床转录组学数据的生物信息学分析，从肝-脑对话环节筛选FBRP缓解ALD的关键作用靶标及其相关分子机制，并采用ELISA、Western blot和免疫组织化学染色对其加以实验验证。结果：与正常组相比，急性和慢性ALD模型组小鼠肝脏组织AST、ALT的水平均显著升高（均P性ALD模型组小鼠在4周内的抓网和爬杆时间均显著下降（均P性ALD模型组小鼠肝脏组织和大脑前额叶组织中高迁移率族蛋白B1（HMGB1）蛋白的表达量显著升高（P性神经营养因子（BDNF）蛋白的表达量及γ氨基丁酸释放量均显著下降（P研究揭示了FBRP可通过调节HMGB1-BDNF互作轴所介导的肝-脑对话而改善ALD的关键病理改变，为该中成药品种临床用治ALD提供了实验证据，也为开发ALD治疗新药提供新的研究思路。

关键词：酒精性肝病肝-脑轴复方鳖甲软肝片 γ氨基丁酸

基于组织分布探究中华大蟾蜍功效成分蟾蜍甾烯类体内代谢途径

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中国中药杂志 2024年第4期49卷 932-941页

作者：刘玉洋孙博赵海誉丁耀华张艳高文雅田孟尧王宏洁周严严魏晓露司南边宝林中国中医科学院中药研究所北京100700 西昌富华金蟾生物科技有限公司四川西昌615000

为助力解决蟾蜍资源日益减少的窘境,探究蟾蜍中功效成分蟾蜍甾烯类化合物(BDs)生物合成部位及代谢途径,为蟾蜍资源可持续利用提供理论基础。利用UHPLC-Orbitrap-MS对蟾蜍多组织进行检测,筛选BDs在蟾蜍体内的合成部位,并利用质谱成像、... 详细信息

为助力解决蟾蜍资源日益减少的窘境,探究蟾蜍中功效成分蟾蜍甾烯类化合物(BDs)生物合成部位及代谢途径,为蟾蜍资源可持续利用提供理论基础。利用UHPLC-Orbitrap-MS对蟾蜍多组织进行检测,筛选BDs在蟾蜍体内的合成部位,并利用质谱成像、匀浆孵化实验加以验证,确定BDs生物合成的关键器官。蟾蜍组织分布结果表明除耳后腺、皮肤组织外,BDs在肝脏中含量最多,胆汁中浓度最高,因此推测肝脏能够生物合成BDs,并通过胆汁代谢分布向蟾蜍全身。DESI-MSI质谱成像检测结果也指出,BDs主要富集在蟾蜍肝脏而并非是未发育成熟的耳后腺。蟾蜍肝脏匀浆孵化证明了蟾蜍肝脏能够独立生物合成BDs。该研究表明中华大蟾蜍在变态、发育、生长过程中,肝脏是蟾蜍体内合成BDs的重要器官,为生物合成BDs以及资源可持续利用提供了有力的理论支撑。

关键词：蟾蜍蟾蜍甾烯类成分组织分布资源生物合成

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黄芩不同炮制品黄酮类成分的整合药动学研究

世界中医药 2024年

作者：宋亚南王云陈影黄琪张村中国中医科学院中药研究所安徽中医药大学药学院

目的:比较黄芩炮制品中8种黄酮类成分在大鼠体内含量的差异,探明黄芩不同炮制品的药动学行为的差异,为其炮制原理的阐明提供科学依据。方法:选取20只SD大鼠随机分为空白组、生黄芩、酒黄芩和黄芩炭4组,每组5只,灌胃给药。以山柰素为内标... 详细信息

目的:比较黄芩炮制品中8种黄酮类成分在大鼠体内含量的差异,探明黄芩不同炮制品的药动学行为的差异,为其炮制原理的阐明提供科学依据。方法:选取20只SD大鼠随机分为空白组、生黄芩、酒黄芩和黄芩炭4组,每组5只,灌胃给药。以山柰素为内标,采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法（UPLC-QQQ-MS/MS）测定不同时间点大鼠血清中黄芩苷、5,7,2',5'-四羟基-8,6'-二甲氧基黄酮（HQ-6）、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、5,6-二羟基-7,8,2',6'-四甲氧基黄酮（HQ-2）、千层纸素-A等的浓度,利用各成分药时曲线下面积(AUC0→∞)百分比作为自定义权重系数,计算在大鼠体内的综合血药浓度并建立整合药物代谢动力学（药动学）模型,比较黄芩炮制品中黄酮类成分的整合药动学参数的差异。结果:单成分的AUC0→∞差异较大;多成分整合药动力学结果显示,黄芩酒炙后,8种黄酮类成分的滞留时间(MRT0→∞)由17.22 h缩短为13.13 h。首次达峰时间(Tmax)由0.50 h缩短为0.25 h,二次达峰时间由4 h延长为8 h。黄芩炒炭后,黄芩炭的多成分整体的滞留时间为10.07 h,与酒黄芩比较,差异无统计学意义（P>0.05）。黄芩炭存在0.25、1、2 h,3次达峰。结论:该方法专属性强、灵敏度高,可作为大鼠血清中8种黄酮类成分的同步检测及其药动学研究的方法,进一步诠释了黄芩“酒炙增效,炒炭存性”的科学内涵。

关键词：黄芩酒黄芩黄芩炭黄酮整合药动学炮制超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法

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黄芩不同炮制品黄酮类成分的整合药动学研究

世界中医药 2024年第17期 2552-2561+2571页

作者：宋亚南王云陈影黄琪张村中国中医科学院中药研究所安徽中医药大学药学院

目的：比较黄芩炮制品中8种黄酮类成分在大鼠体内含量的差异，探明黄芩不同炮制品的药动学行为的差异，为其炮制原理的阐明提供科学依据。方法：选取20只SD大鼠随机分为空白组、生黄芩、酒黄芩和黄芩炭4组，每组5只，灌胃给药。以山柰... 详细信息

目的：比较黄芩炮制品中8种黄酮类成分在大鼠体内含量的差异，探明黄芩不同炮制品的药动学行为的差异，为其炮制原理的阐明提供科学依据。方法：选取20只SD大鼠随机分为空白组、生黄芩、酒黄芩和黄芩炭4组，每组5只，灌胃给药。以山柰素为内标，采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法（UPLC-QQQ-MS/MS）测定不同时间点大鼠血清中黄芩苷、5,7,2′,5′-四羟基-8,6′-二甲氧基黄酮（HQ-6）、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、白杨素、5,6-二羟基-7,8,2′,6′-四甲氧基黄酮（HQ-2）、千层纸素-A等的浓度，利用各成分药-时曲线下面积(AUC0→∞)百分比作为自定义权重系数，计算在大鼠体内的综合血药浓度并建立整合药物代谢动力学（药动学）模型，比较黄芩炮制品中黄酮类成分的整合药动学参数的差异。结果：单成分的AUC0→∞差异较大；多成分整合药动力学结果显示，黄芩酒炙后，8种黄酮类成分的滞留时间(MRT0→∞)由17.22 h缩短为13.13 h。首次达峰时间(Tmax)由0.50 h缩短为0.25 h, 2次(Tmax由4 h延长为8 h。黄芩炒炭后，黄芩炭的多成分整体的MRT0→∞为10.07 h,与酒黄芩比较，差异无统计学意义（P>0.05）。黄芩炭存在0.25、1、2 h, 3次达峰。结论：该方法专属性强、灵敏度高，可作为大鼠血清中8种黄酮类成分的同步检测及其药动学研究的方法，进一步诠释了黄芩“酒炙增效，炒炭存性”的科学内涵。

关键词：黄芩酒黄芩黄芩炭黄酮整合药动学炮制超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱法

百里香药茶对人冠状病毒OC43体内外增殖的影响

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中国实验方剂学杂志 2024年

作者：田纪祥张彤彤常雨宁谢佩芳董书维赵晓昂王云赵春晖吴宏伟张阿梅李海舟夏雪山张华敏中国中医科学院中医基础理论研究所中国中医科学院中药研究所道地药材与品质保障全国重点实验室昆明理工大学生命科学与技术学院昆明医科大学云南省公共卫生与生物安全重点实验室

目的：探究百里香药茶（简称BLX）对人冠状病毒OC43（HCoV-OC43）的体内外抗病毒活性及作用机制。方法：通过UPLC-MS分析BLX化学成分，利用HCoV-OC43细胞模型检测BLX的体外毒性及其对该病毒的抑制作用，采用时间差异给药法检测药物作用... 详细信息

目的：探究百里香药茶（简称BLX）对人冠状病毒OC43（HCoV-OC43）的体内外抗病毒活性及作用机制。方法：通过UPLC-MS分析BLX化学成分，利用HCoV-OC43细胞模型检测BLX的体外毒性及其对该病毒的抑制作用，采用时间差异给药法检测药物作用阶段，qRT-PCR法检测病毒基因拷贝数，利用HCoV-OC43小鼠模型检测BLX的体内毒性及其对小鼠体重和生存周期变化的影响，通过免疫组化技术检测脑和肺组织中病毒蛋白表达。结果：从BLX中鉴定出11种化合物；在HCoV-OC43感染的HRT-18细胞中，BLX的半数毒性浓度(CC50)为13859.56±319 μg·mL-1，半数抑制浓度(IC50)为1439.09±200 μg·mL-1，其选择指数范围为8.26 ～ 11.44。与病毒组相比，BLX在1500、1000和500 μg·mL-1剂量下均可显著抑制病毒复制（P性的化学成分，可在体内外抑制HCoV-OC43复制，该药物可能通过干扰病毒吸附等方式发挥其抗病毒活性。本研究为冠状病毒感染治疗提供了候选药物，为BLX的进一步开发应用提供了理论参考。

关键词：百里香药茶 HCoV-OC43 抗病毒活性细胞模型小鼠模型