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应用重组日本血吸虫组织蛋白酶L诊断日本血吸虫病的研究

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中国预防兽医学报 2003年第5期25卷 387-389页

作者：肖西志于三科林矫矫顾越星刘金明张亮沈阳西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 上海动物生物技术研究中心上海200232 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232

在大肠杆菌BL2 1中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因 ,经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L ;以间接ELISA法 ,检测血吸虫病因牛血清 10 4份 ,阳性检出率为 6 7 31% ;以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验 ,得到的O... 详细信息

在大肠杆菌BL2 1中表达日本血吸虫组织蛋白酶L基因 ,经镍离子亲和层析柱纯化得到重组日本血吸虫组织蛋白酶L ;以间接ELISA法 ,检测血吸虫病因牛血清 10 4份 ,阳性检出率为 6 7 31% ;以血吸虫感染小鼠、兔、绵羊血清做阻断试验 ,得到的OD值与阴性血清相当。结果表明 ,以重组日本血吸虫组织蛋白酶L作为诊断抗原检测日本血吸虫病牛感染情况 ,有一定的应用前景。

关键词：重组日本血吸虫组织蛋白酶L 间接ELISA 诊断

含日本血吸虫可溶性抗原及重组GST的免疫刺激复合物对小鼠的免疫试验

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中国农业大学学报 1998年第S2期3卷 60-64页

作者：刘金明王美叶萍傅志强蔡学忠石耀军陈永军林矫矫林邦发施幅恢中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232

免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免... 详细信息

免疫刺激复合物(ISCOM)是 Morein 创立的一种疫苗免疫载体,其中的主要佐剂成分是 Quil A(皂素的一种成分).本研究首先用日本血吸虫中国大陆株成虫可溶性租抗原(SWA)作为免疫抗原,按改进方法结合皂素制备 ISCOM,对其在小鼠体内诱导的免疫保护力和 SWA 在 FCA/FIA、蜂胶二种佐剂条件下的免疫保护力进行了比较研究,然后对不同剂量 SWA-ISCOM 的免疫效果进行考察;最后对重组日本血吸虫中国大陆株28kD GST(rSj28GST)-ISCOM 在小鼠体内所诱导的免疫保护力进行观察.结果表明 IS-COM 在进一步应用于各种基因工程苗方面有研究价值。

关键词：日本血吸虫免疫刺激复合物成虫可溶性粗抗原谷胱甘肽-S-转移酶

利用基因表达谱芯片研究东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后基因的差异性表达

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北京大学学报（自然科学版） 2004年第4期40卷 532-537页

作者：孙军林矫矫程国锋李浩石耀军陆珂蔡幼民江洪波中国农科院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海动物生物技术研究中心上海200232 中国科学院上海生命科学信息中心上海200031

利用大、小鼠基因表达谱芯片分别研究了Balb c小鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、东方田鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、1 2d时的肺和肝组织基因差异表达方式。结果表明 ,小鼠感染日本血吸虫 7d时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂 (Serineproteaseinhi... 详细信息

利用大、小鼠基因表达谱芯片分别研究了Balb c小鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、东方田鼠感染日本血吸虫 7d时肺组织、1 2d时的肺和肝组织基因差异表达方式。结果表明 ,小鼠感染日本血吸虫 7d时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂 (Serineproteaseinhibitor)基因表达上调 ,同时没有免疫相关基因的表达变化 ;与之相反 ,东方田鼠感染日本血吸虫 7d时肺丝氨酸蛋白酶抑制剂基因没有表达变化 ,非特异性免疫相关基因 ,如溶菌酶 (Lysozyme)和各类组织蛋白酶 (Cathepsin)基因表达上调 ,而且肺内特异性免疫相关基因如CD74、MHCⅡ和MHCⅠ等表达上调。这一现象得到东方田鼠感染日本血吸虫 1 2d时肺和肝中特异性免疫和非特异性免疫相关基因的上调表达的进一步证实。而且 ,东方田鼠感染日本血吸虫 1 2d时肺中丝氨酸蛋白酶抑制剂基因表达下调 ,肝组织中胰岛素样生长因子 1 (Insulin likegrowthfactor 1 ,IGF 1 )基因表达下调。提示日本血吸虫适宜性宿主小鼠和非适宜性宿主东方田鼠感染日本血吸虫前后两者有相反的基因表达方式。

关键词：东方田鼠基因芯片丝氨酸蛋白酶抑制剂溶菌酶组织蛋白酶 CD74 MHC Ⅱ MHC Ⅰ

日本血吸虫期别差异表达基因文库的构建及分析

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生物化学与生物物理进展 2005年第11期32卷 1038-1046页

作者：苑纯秀冯新港林矫矫李浩陆珂石耀军傅志强刘金明蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所农业部动物寄生虫学重点实验室上海市动物生物技术研究中心上海200232

为从期别差异表达基因分析入手研究血吸虫的生长发育机制,应用抑制性消减杂交(suppressedsubtractivehybridization,SSH)技术首次构建了日本血吸虫尾蚴、虫卵和成虫的期别差异表达基因文库.经消减效率分析和三种文库克隆的EST的期别差... 详细信息

为从期别差异表达基因分析入手研究血吸虫的生长发育机制,应用抑制性消减杂交(suppressedsubtractivehybridization,SSH)技术首次构建了日本血吸虫尾蚴、虫卵和成虫的期别差异表达基因文库.经消减效率分析和三种文库克隆的EST的期别差异性鉴定,表明所建文库质量较高,为在整个基因组水平分离血吸虫的差异表达基因提供了重要材料.由三个文库选择257个插入片段大于500bp的克隆测定了EST序列.同源性分析结果表明257个EST代表182种血吸虫基因,其中有22种为血吸虫已知基因,有128种为血吸虫已知EST,有32种为新发现的血吸虫基因.对EST编码蛋白的功能预测结果显示:尾蚴消减文库的基因多与运动、能量代谢、转录调节及致病性相关;虫卵消减文库的基因可能参与信号转导、细胞粘附、蛋白质和碳水化合物的代谢以及抗氧化反应;成虫消减文库的基因多参与蛋白质的合成、转运及分解代谢,参与虫体的运动等.大规模分离、分析血吸虫期别差异表达基因将对从分子水平去解读血吸虫的生长发育机制,筛选高效疫苗候选抗原、药物靶标及诊断制剂有重要意义.

关键词：日本血吸虫期别差异表达基因文库

日本血吸虫中国大陆株Sj23抗原基因在家蚕细胞中的表达及鉴定

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中国兽医学报 2004年第1期24卷 43-46页

作者：肖西志林矫矫于三科张亮程国峰顾越星金亚美沈阳苑纯秀刘金明付志强张福来西北农林科技大学动物科技学院陕西杨凌712100 上海动物生物技术研究中心上海200232 中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海200232 西安亨通光华制药有限公司陕西西安710075

将日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白 (Sj2 3抗原 )基因从原核表达载体 p ET2 8(c)中亚克隆入转移载体 p Bac PAK- His1,构建了 p Bac PAK- his1- Sj2 3转移载体 ,并与线性化家蚕杆状病毒共转染家蚕细胞 ;经 PCR鉴定得到重组病毒 ,经过蓝、白... 详细信息

将日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白 (Sj2 3抗原 )基因从原核表达载体 p ET2 8(c)中亚克隆入转移载体 p Bac PAK- His1,构建了 p Bac PAK- his1- Sj2 3转移载体 ,并与线性化家蚕杆状病毒共转染家蚕细胞 ;经 PCR鉴定得到重组病毒 ,经过蓝、白斑筛选得到纯化的重组病毒 ;SDS- PAGE显示日本血吸虫 2 30 0 0膜蛋白基因在家蚕细胞中实现表达 ,蛋白的相对分子质量为 2 6 0 0 0 ;重组 Sj2 3经 Western-

关键词：日本血吸虫 Sj23抗原基因家蚕细胞原核表达

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免疫印渍技术诊断耕牛血吸虫病

中国兽医科技 1991年第9期21卷 23-24页

作者：刘训暹林矫矫叶萍吴文涓王云方中国农科院上海家畜寄生虫病研究所 200232

酶联免疫印渍技术(下称EITB)是近几年发展起来的新技术,它结合了SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)的高分辨力和酶联免疫反应的高敏感性和特异性,已成为生物化学、免疫化学和分子生物学等研究领域中的一项十分有用的分析手段。这几年该技术... 详细信息

酶联免疫印渍技术(下称EITB)是近几年发展起来的新技术,它结合了SDS-PAGE(聚丙烯酰胺凝胶电泳)的高分辨力和酶联免疫反应的高敏感性和特异性,已成为生物化学、免疫化学和分子生物学等研究领域中的一项十分有用的分析手段。这几年该技术已被应用于分析寄生虫抗原及寄生虫病的免疫诊断。本文应用SDS-PAGE分析了血吸虫尾蚴、成虫、虫卵抗原及肝片吸虫成虫抗原,并对EITB在耕牛血吸虫病免疫诊断上的应用价值作了初步的探索。

关键词：牛耕牛血吸虫病免疫印清诊断

日本血吸虫(中国大陆株)虫卵全长cDNA文库的构建及分析

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中国预防兽医学报 2006年第1期28卷 109-112页

作者：苑纯秀冯新港林矫矫杨柳石耀军李浩陆珂蔡幼民中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所上海市动物生物技术研究中心上海200232

成熟虫卵是血吸虫病的主要致病因素和传播的唯一因子,抗卵免疫对于预防血吸虫病和阻断传播流行均具有重要意义。应用SMART cDNA文库构建技术,构建日本血吸虫虫卵全长cDNA文库。文库容量为7.55×106,滴度为7.2×1010,重组比率为97%。应... 详细信息

成熟虫卵是血吸虫病的主要致病因素和传播的唯一因子,抗卵免疫对于预防血吸虫病和阻断传播流行均具有重要意义。应用SMART cDNA文库构建技术,构建日本血吸虫虫卵全长cDNA文库。文库容量为7.55×106,滴度为7.2×1010,重组比率为97%。应用三个已知全长基因(SjPP,SjTEGT and SjeIF 5)引物在文库中成功钓取到相应的全长基因。另外还由文库直接扩增到一个日本血吸虫新基因烯醇酶基因。高质量的虫卵全长cDNA文库的构建,为抗病疫苗尤其是抗卵抗原的筛选和研究提供了重要资源。

关键词：日本血吸虫虫卵 cDNA文库

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东方田鼠IgG3抗体抗血吸虫病作用研究

中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2008年第1期26卷 34-36页

作者：蒋守富魏梅雄林矫矫潘彩娥邱倩雯何艳燕李浩石耀军上海市疾病预防控制中心上海200336 中国农业科学院上海兽医研究所农业部动物寄生虫学重点开放实验室上海200232

采用ELISA方法,平行检测东方田鼠、BALB/c小鼠和昆明小鼠在攻击感染前、后的血清抗血吸虫童虫(SSA)、成虫(SAWA)和虫卵(SEA)IgG3抗体水平,并进行体内、外试验,观察IgG3抗体抗血吸虫效应。结果攻击感染后第4周,东方田鼠抗SSA和SAWA的IgG... 详细信息

采用ELISA方法,平行检测东方田鼠、BALB/c小鼠和昆明小鼠在攻击感染前、后的血清抗血吸虫童虫(SSA)、成虫(SAWA)和虫卵(SEA)IgG3抗体水平,并进行体内、外试验,观察IgG3抗体抗血吸虫效应。结果攻击感染后第4周,东方田鼠抗SSA和SAWA的IgG3抗体水平增幅较大,分别较感染前增加79.6%和49.6%,BALB/c小鼠IgG3抗体在攻击感染后无明显增加。野生和室内繁殖的东方田鼠的IgG3抗体所致童虫死亡率分别为昆明小鼠的5.88和2.35倍,前者还诱生出较高的减虫率(39.8%)。提示东方田鼠IgG3抗体可能是其抗血吸虫感染的主要免疫物质。

关键词：东方田鼠 IgG3抗体血吸虫

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应用基因重组抗原诊断丙型肝炎研究

中国病毒学 2005年第2期20卷 206-208页

作者：沈阳林矫矫李铭刘金明蔡幼民吴祥甫上海动物生物技术研究中心中国科学院上海生物化学与细胞生物研究所上海200232

In order to improve the diagnostic efficiency of the hepatitis C in China, the DNA fragments of core, C33c,NS4 in Hepatitis C virus(HCV) were connected and subcloned to pET24a(+). The pET24a-CCN was highly expressed with the inducement IPTG in the *** BL21(DE3). In 1L bacterial culture medium,30mg purified recombinant proteins were available using His Binding Resin under denatured condition. Used as diagnostic antigen to detect the human hepatitis C by ELISA, The results showed that the 100% positive coincidence rate (66/66) and 94.5% negative coincidence rate (86/91) were obtained. To detect 46 positive HAV sera and 46 positive HBs sera, all the results were negative. At the same time, the freeze-dried recombinant antigen detects 66 HCV positive sera, all the results were positive. Therefore, the recombinant antigen was sensitivity, specialty and stability to detect hepatitis C. It was an ideal reagent to detect hepatitis C.

关键词：丙型肝炎重组抗原检测