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蛋白质谷氨酰胺酶在乳清蛋白肽酶法制备中的应用

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食品与发酵工业 2024年

作者：尉梦然刘坎振杨国民李江华张国强堵国成浙江科露宝食品有限公司江南大学生物工程学院

乳清蛋白是公认的人体优质蛋白质补充剂，却存在着一些过敏蛋白，为了降低乳清浓缩蛋白中的过敏原含量，开发β-乳球蛋白（β-lactoglobulin，β-LG）抗原性较低的乳清蛋白肽，该研究建立基于蛋白酶与蛋白质谷氨酰胺酶的乳清蛋白肽酶解... 详细信息

乳清蛋白是公认的人体优质蛋白质补充剂，却存在着一些过敏蛋白，为了降低乳清浓缩蛋白中的过敏原含量，开发β-乳球蛋白（β-lactoglobulin，β-LG）抗原性较低的乳清蛋白肽，该研究建立基于蛋白酶与蛋白质谷氨酰胺酶的乳清蛋白肽酶解工艺。通过蛋白酶筛选与复配确定最佳酶解组合——碱性蛋白酶+Prote AXH，建立蛋白质谷氨酰胺酶（protein glutaminase，PG）辅助蛋白酶酶解工艺：5%乳清蛋白溶液在50 ℃下，加入1% PG充分孵育0.5 h后调整pH值为7.5，分步加入1%碱性蛋白酶和1% Prote AXH共反应2 h，最终得到的深度水解乳清蛋白粉水解度可达29.82%，分子质量<3 000 Da的占比为88.48%，得率在93.5%，β-LG的降解率可达97.5%，必需氨基酸比例在46.16%。综上所述，PG的添加对提高乳清蛋白肽得率和过敏原降解率均有明显的效果，本研究可为低致敏乳清蛋白肽酶法制备提供一定的技术参考。

关键词：乳清蛋白蛋白质谷氨酰胺酶过敏原得率

人脐带间充质干细胞通过STAT3和AMPK信号通路调节白介素-6诱导的HeLa细胞的生物活性

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中国生物化学与分子生物学报 2024年第9期40卷 1262-1272页

作者：陈啸闫婉婷刘璐上海利康瑞生物工程有限公司上海201707 河南大学药学院河南开封475000

宫颈癌是全球第4大常见的女性癌症,目前,手术和放疗仍然是治疗非转移性宫颈癌的主要方法,然而,复发性和转移性宫颈癌尚无有效治疗手段。寻找新的更加有效的宫颈癌治疗靶点就显得尤为重要。已知白介素-6(interleukine-6,IL-6)作为肿瘤促... 详细信息

宫颈癌是全球第4大常见的女性癌症,目前,手术和放疗仍然是治疗非转移性宫颈癌的主要方法,然而,复发性和转移性宫颈癌尚无有效治疗手段。寻找新的更加有效的宫颈癌治疗靶点就显得尤为重要。已知白介素-6(interleukine-6,IL-6)作为肿瘤促进因子在宫颈癌的发展和转移过程中发挥着十分重要的作用。已有报道显示,间充质干细胞在多种肿瘤中发挥抑癌作用,但对于其内在机制的报道较少;且在宫颈癌的发展过程通常伴随着IL-6表达的增加。在IL-6存在的炎症病理条件下,MSCs对于宫颈癌细胞的增殖和迁移是否仍具有抑制作用仍未可知。本研究通过检测人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells,HUC-MSCs)对IL-6诱导的HeLa细胞增殖、迁移、侵袭以及STAT3/Bcl-2、AMPK/mTOR信号通路的调节作用,探讨其对宫颈癌Hela细胞生物活性的影响及其分子机制。集落形成实验、细胞划痕实验以及Transwell侵袭结果证明,炎症因子IL-6显著促进HeLa细胞增殖、迁移和侵袭(P<0.05)。而20%和50%MSCs条件培养基显著抑制IL-6诱导的HeLa增殖(P<0.0001)、迁移(P<0.01)和侵袭能力(P<0.0001)。进一步的机制研究结果显示,炎症因子IL-6显著上调抗凋亡信号通路中STAT 3和Bcl-2的mRNA(P<0.0001)和蛋白质(P<0.01)含量;同时下调AMPK、TSC 1和TSC 2等基因的表达(P<0.001),最终上调细胞代谢相关基因mTOR的表达(P<0.01)和蛋白质磷酸化水平(P<0.05)。20%MSCs条件培养基显著抑制HeLa细胞中STAT3/Bcl-2信号通路(P<0.05)。50%MSCs条件培养基显著抑制HeLa细胞中STAT3/Bcl-2信号通路(P<0.01)同时激活AMPK/mTOR信号通路(P<0.05),诱导细胞周期阻滞(P<0.0001)。综上所述,MSCs条件培养基通过下调STAT3信号通路和上调AMPK信号通路抑制白介素-6诱导的HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭。本研究结果有助于进一步阐释IL-6在宫颈癌中发生发展的作用和机制,为寻找宫颈癌治疗的新研究方向提供实验依据。

关键词：宫颈癌白介素-6 人脐带间充质干细胞 AMP活化蛋白质激酶信号传导转录激活因子3

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猫泛白细胞减少症病毒VP2蛋白基因重组杆状病毒的构建及应用

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中国动物传染病学报 2024年

作者：郭伟伟向银辉刘大卫刘岳孙鹏崔晓霞杜元钊青岛易邦生物工程有限公司

本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后，构建重组Bacmid-VP2，转染昆虫细胞Sf9，获得了重组杆状病毒re-BacVP2，并对其进行一系列鉴定。结果表明，其病毒含量可达到107.1TCID50/ml。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛... 详细信息

本研究将猫泛白细胞减少症病毒FPV-SD株VP2基因克隆后，构建重组Bacmid-VP2，转染昆虫细胞Sf9，获得了重组杆状病毒re-BacVP2，并对其进行一系列鉴定。结果表明，其病毒含量可达到107.1TCID50/ml。SDS-PAGE、Western blot结果证明猫泛白细胞减少症病毒VP2基因在杆状病毒表达系统中成功表达，并于抗FPV的多抗发生特异性反应。该蛋白能凝集1%猪红细胞，红细胞凝集价达1︰16384。电镜观察可见表达的VP2蛋白能形成病毒样颗粒（VLPs），大小为20～22 nm。VP2蛋白制备的疫苗能产生较高的抗体滴度。VP2基因的成功表达为FPV疫苗的研制奠定基础。

关键词：猫泛白细胞减少症病毒 VP2基因重组杆状病毒鉴定

挤压膨化鹿茸菇-大麦复合粉的理化特性、胃肠消化和酵解特性

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食品科学 2024年第13期45卷 198-209页

作者：丁怡炜范松涛白娟顾耀军肖香江苏大学食品与生物工程学院江苏镇江202013 江苏江南生物科技有限公司江苏镇江212300

通过挤压膨化制备大麦粉(BF)、鹿茸菇-大麦复合粉(DLR)、鹿茸菇副产物-大麦复合粉(DBY),分析添加鹿茸菇组分对产品理化特性和营养功能的影响。结果表明,DLR和DBY的淀粉糊化程度明显降低。采用标准化INFOGEST 2.0方法模拟胃肠消化发现,DB... 详细信息

通过挤压膨化制备大麦粉(BF)、鹿茸菇-大麦复合粉(DLR)、鹿茸菇副产物-大麦复合粉(DBY),分析添加鹿茸菇组分对产品理化特性和营养功能的影响。结果表明,DLR和DBY的淀粉糊化程度明显降低。采用标准化INFOGEST 2.0方法模拟胃肠消化发现,DBY组因鹿茸菇副产物富含可溶性膳食纤维,其抗氧化能力显著高于BF和DLR组(P0.5,P<0.05)。综上,添加鹿茸菇组分有效改善复合大麦粉产品品质和功能特性,且DBY具有更好的抗氧化活性和肠道菌群调节作用,研究结果可为开发鹿茸菇-大麦膨化产品提供理论支持。

关键词：挤压膨化大麦鹿茸菇体外消化酵解肠道微生物

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人工韧带体外摩擦磨损测量方法

清华大学学报（自然科学版） 2024年第3期64卷 432-441页

作者：黄秀玲郑晔赖卫国朱俊俊华子恺上海大学机电工程与自动化学院上海200444 上海利格泰生物科技有限公司上海201712

人工韧带是韧带重建术中的重要植入物,临床上常见因摩擦磨损而导致人工韧带断裂失效等不良事件,因此磨损被认为是影响人工韧带使用寿命的重要因素之一。针对目前人工韧带体外摩擦磨损测量方法不明确,以及缺少摩擦磨损情况量化研究方法... 详细信息

人工韧带是韧带重建术中的重要植入物,临床上常见因摩擦磨损而导致人工韧带断裂失效等不良事件,因此磨损被认为是影响人工韧带使用寿命的重要因素之一。针对目前人工韧带体外摩擦磨损测量方法不明确,以及缺少摩擦磨损情况量化研究方法等问题,该文对人工韧带进行了2.0×10^(6)次体外磨损试验,测量人工韧带磨损量并获取其磨损表面形貌,对磨损产生的磨屑进行提取与表征。结果显示:经2.0×10^(6)次磨损后,人工韧带磨损率为(6.94±2.30) mg/10^(6)次;人工韧带磨损后表面部分组织起毛且编织状结构受损,丝线排序松散并出现断裂;从润滑介质中提取的磨屑大部分呈类球状,少部分呈纤维条状,且小尺寸磨屑较多,大尺寸磨屑较少。该研究结果可为完善人工韧带的体外磨损测试标准提供有力的参考依据。

关键词：人工韧带摩擦磨损测量方法磨屑分离提取

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mRNA技术在疫苗领域的探索与实践

中国药科大学学报 2024年第1期55卷 127-136页

作者：刘健康希诺生物(上海)有限公司上海201306

mRNA疫苗是将编码抗原的mRNA递送到人体细胞内,在细胞内翻译后产生相应的抗原蛋白,从而诱导机体产生有效的免疫反应。与传统疫苗相比,mRNA疫苗安全性好、研发周期短、免疫效力高,可以同时刺激细胞免疫反应和体液免疫反应。随着核苷酸修... 详细信息

mRNA疫苗是将编码抗原的mRNA递送到人体细胞内,在细胞内翻译后产生相应的抗原蛋白,从而诱导机体产生有效的免疫反应。与传统疫苗相比,mRNA疫苗安全性好、研发周期短、免疫效力高,可以同时刺激细胞免疫反应和体液免疫反应。随着核苷酸修饰技术和递送技术的发展,mRNA疫苗也迎来了广阔的应用前景。本文对mRNA技术及其在疫苗领域的应用进行综述,以期为正在或即将开展mRNA疫苗研发工作的学者提供理论和实践指导。

关键词：疫苗信使核糖核酸修饰核苷核酸递送脂质纳米颗粒

抗真菌内切几丁质酶酶学性质及制备低聚壳寡糖功能分析

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食品科学 2024年第5期45卷 49-58页

作者：赵节昌王启源宋珂昕陈腾王峰杨杰高兆建徐州工程学院食品与生物工程学院江苏徐州221018 徐州奥卡姆食品有限公司江苏徐州221000 徐州鸿宇农业科技有限公司江苏徐州221000

为开发几丁质及壳聚糖生物转化活性寡聚糖并实现几丁质酶在食品防腐及生防方面的应用,从金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)XZ-Sa62中分离纯化几丁质酶(ChiA-Sa62),并研究其生物转化及抗菌功能。本实验采用Q-Sepharose Fast Flow、S... 详细信息

为开发几丁质及壳聚糖生物转化活性寡聚糖并实现几丁质酶在食品防腐及生防方面的应用,从金色链霉菌(Streptomyces aureofaciens)XZ-Sa62中分离纯化几丁质酶(ChiA-Sa62),并研究其生物转化及抗菌功能。本实验采用Q-Sepharose Fast Flow、Sephadex G-100层析和反相高效液相色谱纯化ChiA-Sa62,经纯化后ChiA-Sa62纯化倍数为41.3倍,比活力为1119.8 U/mg。并采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱测得ChiA-Sa62是分子质量为62.55 kDa的单亚基蛋白。ChiA-Sa62在50℃和pH 5.0的条件下,活性最高,并在60℃以下及pH 3.0~9.0范围内有良好稳定性。金属盐离子Ca^(2+)、Mn^(2+)、Mg^(2+)和Co^(2+)可激活酶活性。ChiA-Sa62对几丁质及脱乙酰度75%的壳聚糖具有专一内切水解活性,薄层色谱显示,水解产物分别为2~5个N-乙酰氨基葡萄糖单位的几丁寡糖和2~4个D-氨基葡萄糖单位的壳寡糖。ChiA-Sa62对底物胶体几丁质的米氏常数K_m和最大反应速率V_(max)值分别为2.75 mg/mL和64.52 U/mg。ChiA-Sa62可强烈抑制所试病原真菌菌丝生长;碘化丙啶染色显示,经ChiA-Sa62处理后的灰葡萄孢菌丝其细胞膜受到破坏。水解产物壳寡糖对致病性G^(-)菌(大肠杆菌和铜绿假单胞菌)和G~+菌(金黄色葡萄球菌和蜡样芽孢杆菌)有抑制作用,并且LIVE/DEAD染色显示壳寡糖可致使金黄色葡萄球菌死亡。本实验结果表明,Chi A-Sa62几丁质及壳聚糖在生物转化以及食品防腐及生物防治方面具有较大的应用潜力。

关键词：几丁质酶金色链霉菌酶学特性生物转化抗真菌活性

离子交换层析分离单抗电荷异质体的模型辅助过程优化

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化工学报 2024年第5期75卷 1903-1911页

作者：许茹枫陈煜成高丹焦静雨高栋王海彬姚善泾林东强浙江大学化学工程与生物工程学院生物质化工教育部重点实验室浙江杭州310058 海正生物制药有限公司浙江杭州311404

针对单抗电荷异质体分离,采用离子交换层析机理模型,预测洗脱分离行为,辅助工艺条件优化。设计了校准实验,拟合得到模型参数,模型计算与实验吻合良好,具有良好的预测能力。利用模型分析比较了不同洗脱方式,得到最优的两步阶跃洗脱方案,... 详细信息

针对单抗电荷异质体分离,采用离子交换层析机理模型,预测洗脱分离行为,辅助工艺条件优化。设计了校准实验,拟合得到模型参数,模型计算与实验吻合良好,具有良好的预测能力。利用模型分析比较了不同洗脱方式,得到最优的两步阶跃洗脱方案,具有较高的收率,但发现该分离过程对盐浓度极为敏感。进一步针对第一步洗脱盐浓度进行过程稳健性约束的过程优化,发现盐浓度为108.5 mmol/L时过程稳健性增强。经实验验证,两步阶跃洗脱收率最高可达到85.3%,稳健约束优化后第一步等度洗脱盐浓度操作区间增大为98.9~117.5 mmol/L。结果表明,模型辅助的工艺优化可以进行复杂条件分析,促进难分离体系的分离过程优化,并能够针对过程稳健性给出合理解决方案。

关键词：单克隆抗体电荷异质体分离离子交换层析层析模型过程优化

微波辅助干制对双孢菇提取物腌制鲍肌肉品质的影响

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水产学报 2024年第7期48卷 58-68页

作者：廖玉琴石林凡任中阳翁武银黄文美集美大学海洋食品与生物工程学院厦门市岛之原生物科技有限公司

为探究微波辅助干制对鲍肌肉品质的影响，本实验考察了干制过程中微波处理对经30%NaCl和5%双孢菇提取物腌制的鲍肌肉褐变强度、荧光强度、还原糖、氨基酸组成、糖蛋白等理化性质和挥发性风味的影响。结果显示，未微波(WMT)组和微波(MT)... 详细信息

为探究微波辅助干制对鲍肌肉品质的影响，本实验考察了干制过程中微波处理对经30%NaCl和5%双孢菇提取物腌制的鲍肌肉褐变强度、荧光强度、还原糖、氨基酸组成、糖蛋白等理化性质和挥发性风味的影响。结果显示，未微波(WMT)组和微波(MT)组鲍肌肉的荧光强度值和褐变强度值在干制过程中均逐渐增加，在105 d时达到最大值后开始下降。经120 d干制的WMT组鲍肌肉还原糖含量由7.24下降至5.58 mg/g，而MT组鲍肌肉还原糖含量由7.24增加至14.05 mg/g。WMT和MT组鲍肌肉总氨基酸含量由39.69 g/100 g分别增加至44.06和41.54 g/100 g。在干制30 d后，电泳图谱中出现明显高分子化合物和糖蛋白聚集物。相比WMT组，MT组鲍肌肉傅里叶变换红外光谱中不仅酰胺A带的波数下降更加显著，而且酰胺Ⅰ带和酰胺Ⅱ带吸收峰强度更强。不管是否微波处理，干制90 d的鲍肌肉的电子鼻中W2W (芳香成分、有机硫化物)和W2S (醛醇酮类化合物)传感器响应值明显大于未干制的样品。气相色谱-质谱联用仪测定的壬醛和1-辛烯-3-醇含量在干制90 d时明显下降，而芳樟醇含量明显增加。在相同干制时间内，MT组鲍肌肉中芳樟醇含量高于WMT组样品。研究表明，在干制过程中微波处理可以促进鲍肌肉美拉德反应程度，进而生成良好的挥发性气味。本研究结果将为利用微波辅助改良干鲍的制备工艺提供理论参考。

关键词：鲍双孢菇提取物微波处理干制时间肌肉挥发性风味