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早期凋亡细胞抑制LPS诱导炎症反应的研究

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第3期25卷 208-213页

作者：张文瑾郑树森浙江大学医学院附属第一医院肝胆胰外科卫生部多器官联合移植重点实验室杭州310003

目的　研究早期凋亡细胞的炎症抑制作用。方法　以紫外线照射诱导早期凋亡及坏死的Jurkat细胞 ,用流式细胞仪检测早期凋亡率。建立LPS诱导的小鼠炎症反应模型 ,分别向炎症部位滴注 1 0 0 μl灭菌磷酸缓冲液、坏死及早期凋亡Jurkat细胞。... 详细信息

目的　研究早期凋亡细胞的炎症抑制作用。方法　以紫外线照射诱导早期凋亡及坏死的Jurkat细胞 ,用流式细胞仪检测早期凋亡率。建立LPS诱导的小鼠炎症反应模型 ,分别向炎症部位滴注 1 0 0 μl灭菌磷酸缓冲液、坏死及早期凋亡Jurkat细胞。以HE染色切片病理学检查及激光共聚焦显微镜检查各处理组小鼠肺组织炎症反应程度 ;以双夹心ELISA、Westernblot、RT PCR等方法检测不同处理后小鼠炎症反应状态下细胞因子分泌和表达变化。结果　和注入灭菌磷酸缓冲液及坏死细胞相比 ,向炎症部位滴注早期凋亡细胞后 ,病理检查肺组织炎症反应程度明显减轻 ;激光共聚焦显微镜检查 ,肺间质CD3阳性荧光明显减少 ;肺组织Westernblot及RT PCR结果表明 ,注入外源性早期凋亡细胞后 ,LPS刺激下肺组织炎症性细胞因子MIP 2、TNF α的分泌及表达减少 ,抗炎性细胞因子TGF β1分泌增强 ;当TGF β1中和抗体和早期凋亡细胞共同滴入后 ,炎症性细胞因子MIP 2、TNF α的表达及分泌有所上调。腹腔灌洗液ELISA结果表明 ,早期凋亡细胞增强了LPS刺激的炎症性腹腔内抗炎性细胞因子TGF β1的分泌 ,抑制炎症性细胞因子MIP 2、TNF α的分泌。加入TGF β1中和抗体后逆转了早期凋亡细胞对MIP 2、TNF α分泌的抑制作用。结论　早期凋亡细胞通过增强炎症?

关键词： LPS诱导早期凋亡细胞抑制 Jurkat细胞共聚焦显微镜检查炎症性细胞因子 TGF-β1 肺组织炎症反应抗炎性细胞因子 MIP-2 TNF-α westem RT-PCR 流式细胞仪检测夹心ELISA 凋亡细胞抑制作用 HE染色切片细胞因子分泌

Smad信号通路在骨髓源性心肌干细胞向心肌分化中的作用

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解剖学报 2006年第5期37卷 525-529页

作者：王新艳谭玉珍王海杰张贵焘贺其志复旦大学上海医学院人体解剖学与组织学胚眙学系上海200032

目的研究Smad信号通路在BMP_2诱导的骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中的作用,探讨MCSCs向心肌分化的信号转导机制。方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用骨形态发生蛋白-2(BMP_2)诱导向心肌定向分化。Westernblotting和免疫细胞化学法... 详细信息

目的研究Smad信号通路在BMP_2诱导的骨髓源性心肌干细胞(MCSCs)向心肌分化中的作用,探讨MCSCs向心肌分化的信号转导机制。方法从SD大鼠骨髓中筛选MCSCs,用骨形态发生蛋白-2(BMP_2)诱导向心肌定向分化。Westernblotting和免疫细胞化学法检测诱导后细胞内磷酸化的Smadl/5/8的表达及其随诱导时间在细胞内分布的变化。RT_PCR检测诱导前后细胞内GATA_4和心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)mRNA的表达。结果BMP_2诱导后15min,细胞内可检测到磷酸化的Smadl/5/8的表达,30min^1h表达明显增加,1h后开始降低,4h呈低表达。BMP_2诱导后15min,磷酸化的Smadl/5/8仅见于胞质中,30min胞质和胞核均见表达,1h主要在胞核内表达。BMP_2诱导后2周,细胞明显表达GATA_4和cTnTmRNA。诱导后4周细胞呈现成熟心肌细胞样形态。用SB203580抑制Smad信号后,GATA_4和cTnTmRNA的表达显著降低,细胞形态变化不明显。结论Smad信号通路在BMP_2诱导MCSCs向心肌分化中发挥重要的介导作用。

关键词： Smad信号通路骨形态发生蛋白-2 骨髓源性心肌干细胞 GATA-4 心肌特异性肌钙蛋白T westem blotting 大鼠

连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及相互关系研究

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解剖学报 2006年第4期37卷 412-416页

作者：吕世军李和华中科技大学同济医学院组织学与胚胎学系

目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Wes... 详细信息

目的观察连接蛋白36和闭锁小带蛋白1在HeLa细胞的表达及探讨两者之间的相互关系。方法RT-PCR获得Cx36全长编码区基因片段,与PCR2.1TOPO克隆载体连接测序,亚克隆到pcDNA3真核表达载体,脂质体介导法转染HeLa细胞,G418抗性筛选阳性克隆,Western blotting,双标记免疫荧光和免疫沉淀分析HeLa细胞Cx36和ZO-1表达及关系。结果构建了重组真核表达载体Cx36-pcDNA3,转染的HeLa细胞获得稳定表达Cx36的克隆,Western blotting显示转染的HeLa细胞表达Cx36蛋白。双标记免疫荧光染色显示,HeLa细胞膜之间Cx36呈点状或线状表达,在Cx36表达部位也同样表达ZO-1。免疫沉淀显示细胞裂解液分别与抗ZO-1或抗Cx36抗体共沉淀,抗Cx36或抗ZO-1抗体进行免疫检测,前者在36kD有特异性Cx36蛋白带,后者在220kD处有ZO-1蛋白带。结论转染Cx36的HeLa细胞表达Cx36和ZO-1,两者共表达并且相互结合。

关键词：连接蛋白36(Cx36) 闭锁小带蛋白1(ZO-1) HeLa细胞 RT-PCR westem blotting 双标记免疫荧光免疫沉淀

半边旗提取物5F对人高转移卵巢癌细胞HO-8910PMETS-1mRNA和VEGF蛋白表达的影响

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中药材 2005年第4期28卷 307-309页

作者：何太平莫丽儿梁念慈广东医学院生物化学与分子生物学研究所广东湛江524023 广东天然药物研究与开发重点实验室广东湛江524023

目的:研究半边旗提取物5F(以下简称5F)对HO-8910PM细胞内VEGF蛋白及ETS-1mRNA表达的影响,探讨其抗肿瘤侵袭转移的作用机制.方法:RT-PCR分析ETS-1mRNA的表达;Western blot分析VEGF蛋白的表达.结果:25～100 μmol/L 5F作用HO-8910PM细胞24 h后,明显下调ETS-1mRNA的表达;5F明显下调VEGF蛋白表达水平.结论:5F抗肿瘤侵袭转移能力与ETS-1mRNA和VEGF蛋白的表达有关.

关键词：半边旗提取物卵巢癌细胞 5F 高转移 HO-8910PM VEGF蛋白 mRNA表达肿瘤侵袭转移 westem 蛋白表达水平 ETS-1 PCR分析 mol/L 抗肿瘤侵袭作用机制 blot 转移能力细胞内 RT- 24h M细胞

低氧运动后不同恢复环境腓肠肌热休克蛋白70表达变化

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中国应用生理学杂志 2009年第4期25卷 460-461,499页

作者：方卫斌周越蒋晓萍杨锐睿王瑞元北京体育大学北京100084

目的:实验旨在观察急性间歇低氧(氧含量12.7%)跑台运动后不同恢复环境下大鼠腓肠肌热休克蛋白HSP70表达的时程变化。方法:雄性SD大鼠进行低氧环境下的急性间歇跑台运动,用Western blot方法检测低氧运动后即刻、低氧运动后低氧恢复及常... 详细信息

目的:实验旨在观察急性间歇低氧(氧含量12.7%)跑台运动后不同恢复环境下大鼠腓肠肌热休克蛋白HSP70表达的时程变化。方法:雄性SD大鼠进行低氧环境下的急性间歇跑台运动,用Western blot方法检测低氧运动后即刻、低氧运动后低氧恢复及常氧氧恢复1 d、2 d、7 d的大鼠腓肠肌HSP70蛋白表达水平。结果:急性间歇低氧运动后即刻HSP70蛋白表达水平开始升高。常氧恢复第1 d HSP70蛋白表达水平显著高于常氧对照组,P<0.05。第2 d、第7 d呈现先降低后升高的趋势;低氧恢复中HSP70蛋白表达水平均显著高于常氧对照组,P<0.05。结论:急性间歇低氧运动后能诱导HSP70蛋白表达水平升高;低氧恢复过程中HSP70蛋白高水平表达维持的时间要比常氧恢复长。

关键词：热休克蛋白70 westem Blot 蛋白表达大鼠腓肠肌

益妇宁软胶囊对去势大鼠骨组织雌激素受体表达的影响

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中药材 2005年第5期28卷 400-402页

作者：邓虹珠梁磊武金宝南方医科大学中医系广州510515 南方医院消化病研究所广州510515

目的:研究不同剂量的益妇宁软胶囊(YFN)对去势大鼠骨组织中雌激素受体(ER)表达的影响,探讨该方对绝经后骨质疏松症(PMO)的治疗机制。方法:采用3月龄SD雌性大鼠60只, 50只行双侧卵巢切除术,随机分为YFN大剂量组(相当于原生药0 .8g/kg)、... 详细信息

目的:研究不同剂量的益妇宁软胶囊(YFN)对去势大鼠骨组织中雌激素受体(ER)表达的影响,探讨该方对绝经后骨质疏松症(PMO)的治疗机制。方法:采用3月龄SD雌性大鼠60只, 50只行双侧卵巢切除术,随机分为YFN大剂量组(相当于原生药0 .8g/kg)、YFN中剂量组(相当于原生药0 .4g/kg)、YFN小剂量组(相当于原生药0 .2g/kg)和阳性药对照组(己烯雌酚0 1mg/kg)、模型对照组,每组10只;另10只为假手术组。术后4周开始给药,给药12周后收集标本。采用放免法测定血清雌二醇水平,Westernblotting免疫印迹法检测胫骨组织中ER表达情况。结论:YFN能明显提高去势大鼠体内雌激素水平及骨组织雌激素受体的表达量,通过这两条途径起到治疗绝经后骨质疏松症的作用。

关键词：益妇宁软胶囊大鼠骨组织激素受体表达绝经后骨质疏松症 blotting 双侧卵巢切除术雌激素受体 SD雌性大鼠 westem 雌二醇水平放免法测定免疫印迹法雌激素水平原生药不同剂量治疗机制己烯雌酚表达情况去势大鼠

西红花酸合成酶(7,8-二加氧酶)片段的克隆及在大肠杆菌中的表达与检测

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四川大学学报（自然科学版） 2008年第1期45卷 199-204页

作者：严琛赵婷婷唐琳陈放四川大学生命科学学院成都610064

根据已发表西红花酸合成酶(7,8-二加氧酶)基因序列设计PCR特异性引物,从西红花柱头总RNA中扩增并克隆到一段长为1.2 kb的片段.测序结果表明该片段含有两个序列.一个与已知西红花酸合成酶基因序列高度同源(同源性99%),命名为CsZCD;另一... 详细信息

根据已发表西红花酸合成酶(7,8-二加氧酶)基因序列设计PCR特异性引物,从西红花柱头总RNA中扩增并克隆到一段长为1.2 kb的片段.测序结果表明该片段含有两个序列.一个与已知西红花酸合成酶基因序列高度同源(同源性99%),命名为CsZCD;另一个的同源性为96%,命名为CsZCD-NEW.将CsZCD-NEW片段克隆到表达载体pQE31上,得到重组质粒CsZCD-NEW-pQE31.经IPTG诱导,重组质粒在***15中表达.

关键词：西红花 GZCD-NEW westem Blot

抗棉铃虫组织蛋白酶B单克隆抗体的制备及鉴定

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山东大学学报（理学版） 2004年第6期39卷 116-120页

作者：杨晓梅侯立静康翠洁邵红莲张新昌杜欣军王金星赵小凡山东大学生命科学学院山东济南250100

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB c小鼠 ,选择血清抗体滴度高的免疫小鼠 ,取其脾细胞和Sp2 0骨髓瘤细胞进行细胞融合 .经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞 ,共获得分... 详细信息

分别以棉铃虫组织表达的组织蛋白酶B和基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B为抗原免疫BALB c小鼠 ,选择血清抗体滴度高的免疫小鼠 ,取其脾细胞和Sp2 0骨髓瘤细胞进行细胞融合 .经ELISA法筛选阳性克隆和有限稀释法克隆细胞 ,共获得分泌抗组织蛋白酶B的单克隆抗体杂交瘤细胞 3株 ,分别命名为 9D5 ,10 0E2和10 0H6 .以ELISA法和Westernblotting法对 3株杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体进行了特异性鉴定 ,其中 9D5和10 0E2能够同时识别两种不同来源的组织蛋白酶B ,而 10 0H6只能识别基因重组的大肠杆菌表达的组织蛋白酶B .

关键词：棉铃虫组织蛋白酶B 单克隆抗体 ELISA westem blotting

电离辐射后ERp29蛋白在IEC-6细胞中的表达

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免疫学杂志 2006年第3期22卷 286-288页

作者：杨媛章波王蒙艾国平粟永萍第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨大鼠空肠上皮细胞株(IEC-6)受到不同剂量γ射线照射后,ERp29蛋白(endoplasmic reticulum protein)在不同时相点的表达变化情况。方法分别提取正常IEC-6细胞和5、101、52、0 Gy照射后3、12、24、48、72 h细胞的蛋白样品,采用West... 详细信息

目的探讨大鼠空肠上皮细胞株(IEC-6)受到不同剂量γ射线照射后,ERp29蛋白(endoplasmic reticulum protein)在不同时相点的表达变化情况。方法分别提取正常IEC-6细胞和5、101、52、0 Gy照射后3、12、24、48、72 h细胞的蛋白样品,采用Western blotting方法检测ERp29的表达。结果不同剂量照射后IEC-6 ERp29蛋白表达比正常细胞高,蛋白表达随照射时间的增加而增加。结论电离辐射可诱导IEC-6细胞高表达ERp29蛋白,提示该蛋白在肠道的损伤修复中起重要作用。

关键词： ERp29 电离辐射肠上皮细胞 westem blotting