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waf1和C-erbB-2基因蛋白在贲门癌中的表达及其临床意义

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WAF1和C-erbB-2基因蛋白在贲门癌中的表达及其临床意义

作者：刘迪填汕头大学

学位级别：硕士

在我国贲门癌为一高发的恶性肿瘤，死亡率高。目前主要的治疗方法是手术治疗，但预后仍未令人满意。术后死亡主要原因是肿瘤复发和转移。因此除应用临床资料作为治疗选择的依据外，找到预后的预测因子，准确判断其预后，发现有明显恶性... 详细信息

在我国贲门癌为一高发的恶性肿瘤，死亡率高。目前主要的治疗方法是手术治疗，但预后仍未令人满意。术后死亡主要原因是肿瘤复发和转移。因此除应用临床资料作为治疗选择的依据外，找到预后的预测因子，准确判断其预后，发现有明显恶性倾向的患者，并及时进行术后的综合治疗显得至关重要。waf1和C-erbB-2是近年发现的与细胞增殖有密切关系的基因，据报道它们的表达与多种肿瘤的临床意义有关。本研究的目的是：1检测贲门癌中waf1和C-erbB-2基因蛋白的表达;2分析其表达与临床病理参数之间的关系;3结合临床资料了解waf1和C-erbB-2基因蛋白表达的预后价值。材料和方法：选择1994-1995年在汕头大学医学院附属肿瘤医院胸科行手术治疗并经病理确诊而且于汕头大学医学院病理科保存完好的贲门癌蜡块104例。应用免疫组化二步法检测104例贲门癌组织中waf1和C-erbB-2基因蛋白表达的状况，结合临床病理资料进行分析。结果：贲门癌组织中waf1基因蛋白表达主要定位于细胞核，少数定位于细胞核的顶端，其癌组织的阳性率为26.0％(27／104)。而贲门癌组织中C-erbB-2基因蛋白表达的主要定位于细胞浆及细胞膜，其癌组织的阳性率为55.8％(58／104)，其中弱阳性率为20.2％(21／104)，强阳性率为35.6％(37／104)。waf1基因蛋白的表达与肿瘤的大小、分化程度、淋巴结转移及外侵密切相关。大体最大径＜5cm组waf1基因蛋白的表达率高于大体最大径≥5cm组(55.6％ vs 19.8％ P=0.004)。高中分化组waf1基因蛋白的表达率高于低分化组(40.6％vs 19.1％ P=0.037)。淋巴结转移组waf1基因蛋白的表达率低于淋巴结无转移组Q0．3％VS 40．0％P＝0 03o。局部肿瘤无外侵组 wafI 基因蛋白的表达率明显高于外侵组o 5．5％V Sll．9％P＝0 00O。而且wafI基因蛋白的表达率与不同的PTNM分期有关。I｛、Ill、IV 期的 wafI 基因蛋白的表达阳性率分别为 43．5％、30．2％、 3．6叭 P＝0 003。C飞rbB七基因蛋白过表达与肿瘤的分化程度、淋 i 巴结转移及临床 PTNM分期密切相关。淋巴结转移组 C飞rbB七蛋白表达强阳性率高于淋巴结无转移组N3．2％VS 16．7％尸司．010人高分化组、中分化组及低分化组C飞rbB上蛋白表达强阳性率分别为62．5％（10／16）、43．8％（7／16）及 31．97（15／47）。中低分化组 C－erbB－2 蛋白表达强阳性率低于高分化组（P刀．045人 IH 期组 C飞rbB七蛋白表达强阳性率低于 Ill＋IV期组门．4％VS 40．7％尸＝0．039）。结合随访资料分析表明waf、C飞rbB上基因蛋白的表达与预后有关。 waf表达阳性组1、3、5年的生存率分别为SS．2＊、38．87、26．6y，而 wafI 表达阴性组 1、3、5年的生存率分别为 66．47、32．6％、22．4％（P＜0．05人 C飞rbB七基因蛋白表达阴性及弱阳性组 1、3、5年的生存率分别为S3．2％、35．5％、24．5％，而C－erbB－2基因蛋白表达强阳性组 1、3、5年的生存率分别为 50．0％、31．7％、ZI．4％（尸＜ 0．05）。本组结果还显示：贲门癌组织中wafI基因蛋白表达与C飞rbB《基因蛋白强阳性表达无关。waf及C飞rbB七基因蛋白表达与年龄／性别。大体类型、组织类型、手术性质、浆膜是否受累及食管是否受累均无关。C飞rbB六基因蛋白的表达与肿瘤大小、肿瘤浸润深度也无关。结论： 1．贡门癌组织中wafI基因蛋白表达与肿瘤的大小、分化程度、淋巴结转移、局部外侵、PTN’M分期和预后有关。贲门癌组织中 wafI基因蛋白的表达缺失与病变的进展相关，wafI基因蛋白表达者预后好，表达缺失者预后差。 2．C《rbB上基因蛋白表达与贲门癌的分化程度、淋巴结转移、PTNM 分期和预后有关，C七rbB上基因蛋白的强阳性表达者与病变的进展及预后差相关。．3．认为通过免疫组化法检测 wafI及 C七rbB2基因蛋白在贲门癌组织中的表达可能有助预测贲门癌患者的预后。

关键词：贲门肿瘤 waf1 C-erbB-2 蛋白表达免疫组化临床意义

电离辐射对小鼠骨髓细胞p53、waf1、gadd45基因转录水平的影响

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中华放射医学与防护杂志 2003年第1期23卷 11-13页

作者：马淑梅刘晓冬鞠桂芝刘树铮吉林大学白求恩医学部卫生部放射生物学重点实验室长春130021

目的　研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞p5 3、waf1、gadd4 5基因转录水平的影响 ,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1 阻滞的分子机理。方法　采用Northernblot和半定量RT PCR方法分别检测p5 3、waf1、gadd4 5基因转录水平变化。结果　 ... 详细信息

目的　研究X射线全身照射对小鼠骨髓细胞p5 3、waf1、gadd4 5基因转录水平的影响 ,以探讨电离辐射诱导小鼠骨髓细胞G1 阻滞的分子机理。方法　采用Northernblot和半定量RT PCR方法分别检测p5 3、waf1、gadd4 5基因转录水平变化。结果　 2GyX射线全身照射后 2～ 72hp5 3基因转录水平均有不同程度的升高 ,waf1基因在照射后 2h开始升高 ,4h达峰值 ,一直持续到照后 4 8h开始恢复 ,gadd4 5转录水平除在照射后 2h一过性升高外 ,从 8h即开始不同程度下降 ,照射后 72h开始恢复。分别以 0 5～ 6 0GyX射线全身照射后 12h取小鼠骨髓细胞作量效研究表明 ,p5 3的改变在照射后各组虽有不同程度的升高 ,但未见明显的剂量依赖 ,waf1基因转录呈明显的剂量依赖性升高 ,6 0GyX射线照射后达对照组的 3 4 1倍 ,gadd4 5未见升高趋势。结论　在电离辐射诱导的小鼠骨髓细胞周期G1 阻滞中p5 3 waf1通路起重要作用 ,而gadd4 5可能不参与该过程调控。

关键词：电离辐射骨髓细胞 p53 waf1 gadd45 基因转录影响动物实验

CyclinE和p21/waf1/CIP1在结直肠癌组织中的表达及意义

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陕西医学杂志 2002年第6期31卷 481-483页

作者：吴涛张瑜庆陈熹纪宗正马双余西安交通大学第二医院普外科西安710004 西安交通大学陕西人民医院

目的 :研究 Cyclin E、p2 1 /waf1 /CIP1蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及其与生物学行为和预后的关系。方法 :用免疫组化方法检测 5 5例结直肠癌组织中 P2 1 /waf1 /CIP1、Cyclin E蛋白的表达。结果 :1 0例癌旁结直肠组织中 ,Cyclin ... 详细信息

目的 :研究 Cyclin E、p2 1 /waf1 /CIP1蛋白在结直肠癌组织中的表达水平及其与生物学行为和预后的关系。方法 :用免疫组化方法检测 5 5例结直肠癌组织中 P2 1 /waf1 /CIP1、Cyclin E蛋白的表达。结果 :1 0例癌旁结直肠组织中 ,Cyclin E表达均为阴性 ,5 5例结直肠组织中 ,3 4例 Cyclin E表达阳性 ;1 0例癌旁结直肠组织中 ,p2 1表达均为阳性 ,5 5例结直肠癌组织中 2 5例 p2 1表达阳性 ;Cyclin E蛋白表达多见于浸润深、分化差、淋巴结转移、临床分期晚的结直肠癌组织中 ;p2 1 /waf1 /CIP1蛋白表达多见于分化好、浸润浅、未发生淋巴结转移、临床分期较早的结直肠癌组织中 ;Cyclin E蛋白表达组的 5年生存率低于阴性组 ;p2 1 /waf1 /CIP1蛋白表达组的 5年生存率高于阴性组。结论 :Cyclin E、p2 1 /waf1 /CIP1可作为反映结直肠癌恶性生物学行为及预后的指标。

关键词： p21 waf1 CIP1 直肠癌肿瘤组织基因表达细胞周期蛋白E 结肠癌

waf1基因调控大肠癌细胞c-myc和CDK4表达的实验研究

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WAF1基因调控大肠癌细胞c-myc和CDK4表达的实验研究

作者：王海吉林大学

学位级别：硕士

肿瘤形成机制的研究一直是人们关注的焦点，关键在于细胞周期的调控，如能使细胞停滞于G1期，则可以避免肿瘤的发生或诱导肿瘤细胞的分化。多数肿瘤细胞的G1期调控基因表达异常，p21waf1、c-myc和CDK4是其中三种主要的作用于G1期的细胞... 详细信息

肿瘤形成机制的研究一直是人们关注的焦点，关键在于细胞周期的调控，如能使细胞停滞于G1期，则可以避免肿瘤的发生或诱导肿瘤细胞的分化。多数肿瘤细胞的G1期调控基因表达异常，p21waf1、c-myc和CDK4是其中三种主要的作用于G1期的细胞周期调控因子。本实验通过对它们相互调控作用的研究，深入探讨肿瘤的发生与细胞周期G1期调控的关系。 waf1基因表达产物p21waf1 是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白（cyclin-dependent kinase inhibitor, CDI）家族中最早被发现的成员，是细胞周期调控的主要因子之一，通过一系列基因作用于细胞周期的G1-S检测点，使细胞停滞在G1期。c-myc基因表达产物c-myc蛋白具有调节细胞增殖分化的作用，被激活的c-myc蛋白，能使大量细胞通过G1期进入细胞周期S期，在多种癌细胞中过度表达。当抑制c-myc的表达可引起细胞周期G1期停滞。CDK4基因表达产物细胞周期素依赖激酶4（cyclin-dependent kinase 4,CDK4）主要与细胞周期素Cyclin D1形成Cyclin D1/ CDK4复合物的形式存在，当Cyclin D1/ CDK4复合物过表达时，将使细胞由G1期进入S期。本实验以大肠癌细胞株HCT/8细胞为研究对象，分HCT/8细胞转染waf1基因组、HCT/8细胞转染空质粒组及对照组（HCT/8细胞）进行研究。应用免疫荧光技术鉴定waf1基因的表达，应用免疫组织化学技术测定三组细胞c-myc和CDK4基因的表达情况，分析p21 waf1、c-myc和CDK4三种调控因子之间的相互作用关系。并用流式细胞仪检测三组细胞的细胞周期变化，进而探讨p21 waf1、c-myc和CDK4三种调控因子的变化对肿瘤细胞周期的影响。实验结果：1、p21waf1免疫荧光检测结果：空质粒组p21waf1表达阳性细胞的百分数与对照组计数结果相比无统计学差异。而转染waf1基因组p21waf1表达阳性细胞91.68%±6.24%与空质粒组及对照组计数结果相比有显著差异（5.02%±3.61% 和 3.63%±2.89% ，p1），前者阳性细胞的百分数明显高于后两者，说明waf1基因转染成功并具有表达功能。2、CDK4免疫组化检测结果：空质粒组CDK4表达阳性细胞的百分数与对照组计数结果相比无统计学差异。而重组基因组CDK4表达阳性细胞56.73%±5.98%与空质粒组及对照组计数结果相比有显著差异（26.00%±5.69% 和 27.93%±3.99%，p12.20%±3.93%与对照组及空质粒组计数结果相比有显著差异（31.93%±4.68% 和33.80%±4.35%，p1、S及 G2/M各期的计数结果与对照组相比无统计学差异。而重组基因组G1期(80.56%±2.96%)及S期（14.16%±4.39%）与对照组及空质粒组计数结果相比有显著差异（p1期细胞的百分数明显高于后两者，而S期细胞的百分数明显低于后两者。结论：1、转染waf1基因可抑制HCT/8细胞周期的进行，使细胞周期停滞于G1期。2、转染waf1基因可抑制c-myc的表达，从而加强了p21 waf1对细胞周期的抑制作用。3、p21 waf1是通过抑制CDK4的活性而抑制细胞周期的，而非抑制CDK4的表达。4、根据各基因间的相互关系，建立了细胞周期G1期的部分调控网络。本实验深入探讨了p21 waf1、c-myc和CDK4在肿瘤细胞周期调控中的关系，建立起相应的调控通路，从分子水平研究肿瘤的发生机制，为肿瘤的基因治疗提供了依据。

关键词： waf1 HCT/8 c-myc CDK4

胃肠道间质瘤中P21 waf1及Cyclin D1的表达和意义

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中国组织化学与细胞化学杂志 2009年第3期18卷 291-294页

作者：孙洁宦大为王翠芳沈阳医学院奉天医院病理科辽宁沈阳110024

目的检测P21waf1及cyclin D1在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)中的表达及分布,并探讨其与GIST的Fletcher分级、有无坏死及转移复发等临床病理学特征之间的关系,分析p21waf1和cyclin D1在GIST中的作用及其相关性。... 详细信息

目的检测P21waf1及cyclin D1在胃肠道间质瘤(gastrointestinal stromal tumor,GIST)中的表达及分布,并探讨其与GIST的Fletcher分级、有无坏死及转移复发等临床病理学特征之间的关系,分析p21waf1和cyclin D1在GIST中的作用及其相关性。方法应用免疫组化SP法观察70例手术切除胃肠道间质瘤中P21waf1及cyclin D1的表达情况。结果P21waf1和cyclin D1在GIST中阳性表达率分别为34.29%(24/70)和57.14%(40/70)。按Fletcher分级,随着危险程度级别的增高,P21waf1蛋白阳性表达逐渐减低,cyclin D1蛋白阳性表达逐渐增高,差异有统计学意义。此外,cyclin D1与肿瘤细胞有无坏死及转移复发有关(P1高表达率。P21waf1与cyclin D1在蛋白表达上无相关性(r=-0.165P=0.172)。结论P21waf1蛋白表达与Fletcher分级相关(P1与Fletcher分级、肿瘤细胞有无坏死及转移复发有关(P1waf1与cyclin D1在蛋白表达上无相关性。P21waf1和cyclin D1的表达情况能够提示GIST的恶性程度的高低及预后的好坏,与GIST生物学行为密切相关,它们有可能成为判断GIST生物学行为的评价指标。

关键词：胃肠道间质瘤 P21 waf1 细胞周期素D1

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人waf1基因表达质粒的构建

白求恩医科大学学报 2000年第6期26卷 559-561页

作者：侯治富王维忠王华吴晓冬卜丽莎王丽颖吉林长春第三临床学院中心实验室吉林长春130031

目的 :克隆人 waf1基因 ,构建成 waf1 - pc DNA3真核表达质粒。方法 :采用逆转录聚合酶链反应从 Hela细胞中扩增人 waf1基因 ,并克隆到 pc DNA3真核克隆载体中。结果 :从 Hela细胞扩增的人 waf1基因克隆至真核克隆表达载体 pc DNA3中 ,... 详细信息

目的 :克隆人 waf1基因 ,构建成 waf1 - pc DNA3真核表达质粒。方法 :采用逆转录聚合酶链反应从 Hela细胞中扩增人 waf1基因 ,并克隆到 pc DNA3真核克隆载体中。结果 :从 Hela细胞扩增的人 waf1基因克隆至真核克隆表达载体 pc DNA3中 ,经 DNA直接测序 ,获得了 waf1 -pc DNA3重组质粒。结论 :成功地构建人 waf1表达质粒 waf1 - pc DNA3,为进一步研究 waf1基因表达及生物学效应奠定了基础。

关键词： waf1 克隆直接测序基因表达质粒

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waf1在人脑胶质瘤中的表达及临床意义

中华今日医学杂志 2003年第8期3卷 10-11页

作者：徐寿水中国人民解放军第461医院外科，长春130021

目的：检测抑癌基因waf1在人脑胶质瘤中的表达及其与临床的相立关系。方法：46例人脑胶质瘤手术切除的新鲜瘤组织,12例脑外伤组织，提取其mRNA扩增，用waf1作为模板进行逆转录PCR。结果：46例胶质瘤中14例有waf1蛋白表达(14／46)，表达... 详细信息

目的：检测抑癌基因waf1在人脑胶质瘤中的表达及其与临床的相立关系。方法：46例人脑胶质瘤手术切除的新鲜瘤组织,12例脑外伤组织，提取其mRNA扩增，用waf1作为模板进行逆转录PCR。结果：46例胶质瘤中14例有waf1蛋白表达(14／46)，表达率为30.4％，且均在病理分级(Ⅰ、Ⅱ级)中表达，病理Ⅲ、Ⅳ级胶质瘤无表达；而脑外伤标本waf1全部表达(12／12)，表达率为100％，两组比较有显著差异(Pwaf1；胶质瘤中waf1的缺失是其发生、发展的原因之一。

关键词： waf1 人脑胶质瘤临床意义抑癌基因检测逆转录PCR

外源性p21 waf1基因转染对人肺癌细胞系A549细胞增殖的影响

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中国实用医刊 2012年第21期39卷 1-4页

作者：王万忠种瑞峰罗宜人牟光远陈志强山东省潍坊市肿瘤专科医院胸外科 261100 青岛大学医学院附属医院胸外科

目的探讨外源性p21waf1基因转染对人肺癌细胞系A549细胞增殖的影响。方法用脂质体介导的方法将pIRES—p21waf1真核表达载体转染人肺癌细胞系A549分为pIRES—p21waf1转染组、pIRES—neo空载体组及未转染组，应用实时荧光定量RT-PCR、West... 详细信息

目的探讨外源性p21waf1基因转染对人肺癌细胞系A549细胞增殖的影响。方法用脂质体介导的方法将pIRES—p21waf1真核表达载体转染人肺癌细胞系A549分为pIRES—p21waf1转染组、pIRES—neo空载体组及未转染组，应用实时荧光定量RT-PCR、Western blot分别检测各组p21waf1基因mRNA及p21蛋白表达情况，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞仪分析细胞周期变化，所有数据进行统计学分析。结果p21waf1转染组p21waf1mRNA和p21蛋白高表达，差异有统计学意义（P〈0．01）；p21waf1转染组A549细胞生长速度明显低于空载体组和未转染组（P〈0．01）；流式细胞仪观察到p21waf1转染组细胞发生G1／S阻滞，G1期细胞比例显著高于空载体组和未转染组[（76．68±2．56）％vs（50．27±1．24）％、（49．89±1．31）％，P〈0．01）]，S期比例显著低于空载体组和未转染组[（12．48±1．08）％VS（39．59±1．19）％、（41．56±1．17）％，P〈0．01]，并出现凋亡峰。结论p21waf1基因转染可以抑制人肺癌细胞系A549细胞增殖并能诱导其发生细胞凋亡，可能为肺癌的基因治疗提供一条新的途径。

关键词：基因转染 p21 waf1 细胞增殖肺癌

抑癌基因 P21CIP1/waf1研究进展

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医学综述 1999年第7期5卷 295-296页

作者：张维冷延华山东医科大学附属医院济南250012 青岛医学院附属医院

近年来,细胞周期调控对肿瘤发展的影响越来越受到人们的关注。细胞周期调控有关的分子有:细胞周期蛋白(eyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cyelin dependent kinese,CDK),磷酸化酶和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin dependent kina... 详细信息

近年来,细胞周期调控对肿瘤发展的影响越来越受到人们的关注。细胞周期调控有关的分子有:细胞周期蛋白(eyclin),细胞周期蛋白依赖性激酶(cyelin dependent kinese,CDK),磷酸化酶和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin dependent kinase inhibitor,CDI)。其中,cyclin的周期性积累与分解对细胞周期进程起着决定性作用,而CDI通过在细胞周期适当的时间点上负调节CDK的活性,从而在细胞周期的进程中起着关键性作用,CDI可划分为二大类:一类为CIP/KIP。

关键词：抑癌基因 P21CIP1 waf1 生物学特性作用机理