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猴头菇多糖对新型vibdv感染后免疫调控作用的研究

猴头菇多糖对新型vIBDV感染后免疫调控作用的研究

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作者：郭彪彪山西农业大学

学位级别：硕士

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是引起鸡法氏囊受损而抑制机体先天性免疫的急性传染病,该病不仅能造成免疫抑制,而且会影响其它疫苗的免疫效果导致免疫失败,其中以传染性法氏囊病毒变异株(vibdv)引起的免疫抑制最为... 详细信息

鸡传染性法氏囊病(Infectious bursal disease,IBD)是引起鸡法氏囊受损而抑制机体先天性免疫的急性传染病,该病不仅能造成免疫抑制,而且会影响其它疫苗的免疫效果导致免疫失败,其中以传染性法氏囊病毒变异株(vibdv)引起的免疫抑制最为严重。猴头菇多糖(HEP)是猴头菇最主要的活性成分,能通过激活先天性免疫通路、调节体内细胞因子分泌而提高动物机体的免疫力,已成为预防和治疗动物免疫性疾病的理想添加剂或佐剂。NF-κB信号通路是先天性免疫的重要通路,TLR4是HEP作用于免疫细胞的主要受体,IBDV感染后会通过抑制NF-κB信号通路而降低机体的抗病毒能力,而HEP可以通过激活TLR4/My D88/NF-κB信号通路,增强细胞因子的表达水平。探讨HEP是否能对vibdv抑制的NF-κB信号通路产生调节作用,有助于进一步了解vibdv免疫抑制机制。为探讨HEP对感染vibdv细胞的影响,本研究以DT-40细胞为研究对象,经过HEP孵育后感染vibdv GD-1株,通过显微镜观察DT-40细胞的病变情况,并通过实时荧光定量PCR技术检测DT-40细胞中TNF-α以及IL-1β的mRNA表达水平。结果显示,HEP能减轻vibdv GD-1株对DT-40细胞造成的损伤;此外,在感染72 h后,HEP可以上调DT-40细胞中TNF-α和IL-1β的表达量。为探讨HEP对感染vibdv雏鸡免疫功能的影响,本研究将40只SPF鸡随机分成空白组、vibdv组、HEP组和HEP+vibdv组,于负压隔离器中分组隔离饲养;HEP组和HEP+vibdv组雏鸡从1日龄开始连续7 d在饮水中添加375 mg/mL的HEP,自由采食饮水;vibdv组和HEP+vibdv组雏鸡在8日龄时通过滴鼻点眼感染vibdv GD-1株。感染病毒后3 d、7 d、10 d分别从每组选取3只鸡采集样品,并运用实时荧光定量PCR方法从m RNA水平检测雏鸡各组织中TLR4、My D88、NF-κB基因以及细胞因子的基因表达情况。TLR4、My D88、NF-κB的检测结果显示:在病毒感染后第3 d,各分组除肝脏外其余组织中TLR4和My D88的m RNA表达水平显著高于空白组(Pvibdv组相比vibdv组来说,TLR4、My D88、NF-κB的m RNA表达水平普遍上调,且随着感染时间的延长,差异更为显著。在感染后第3 d,HEP组与HEP+vibdv组NF-κB的表达量差异不显著;在感染后第7 d和第10 d,HEP组NF-κB的表达量高于vibdv组,低于HEP+vibdv组。细胞因子检测结果显示:HEP能够显著提高TNF-α表达量,在病毒感染后第10 d表现得尤为显著;而vibdv组在感染初期TNF-α的表达量显著下调,IL-1β表达量除肾脏外也均表现下调,后期逐渐恢复;病毒感染后第10 d时,HEP+vibdv组的TNF-α以及IL-1β表达量要显著高于vibdv组。为探讨HEP对感染vibdv雏鸡新城疫疫苗免疫应答的影响,本研究将30只SPF鸡分为三组:新城疫组、新城疫+vibdv组、HEP+新城疫+vibdv组,饲养方式及攻毒时间同上,于9日龄免疫新城疫Lasota株,并于接种后第7 d、14 d、21 d以及28 d采血,收集血清并通过血凝抑制试验检测新城疫抗体效价。结果显示:接种新城疫疫苗后,雏鸡体内新城疫抗体水平呈现上升趋势,到第14 d时到达峰值,之后逐渐下降;且新城疫+vibdv组的抗体水平要低于另外两组,HEP+新城疫+vibdv组的抗体水平要高于另外两组,且抗体持续时间较长。以上结果表明,HEP能够有效减少vibdv对DT-40细胞造成的损伤,同时可以上调细胞因子的表达;此外,HEP能够缓解vibdv对雏鸡先天性免疫的抑制,增强雏鸡的免疫力,激活被vibdv抑制的NF-κB信号通路,调节细胞因子的分泌;HEP还能够增强新城疫疫苗的免疫效果。

关键词： vibdv HEP TLR4/MyD88/NF-κB信号通路细胞因子免疫抑制

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