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Chinese Journal of Cancer Research 2010年第2期22卷 119-125页

作者： Xi-zhen Xu Zhi-qiang Li Zhi-hua Wen Department of Neurosurgery Zhongnan Hospital Wuhan University Wuhan 430071 China Laboratory of Neuro-oncology Zhongnan Hospital Wuhan University Wuhan 430071 China

Objective： To investigate the role of urokinase-type plasminogen activator/urokinase-type plasminogen receptor（u-pa/u-paR） system in glioma angiogenesis under hypoxic conditions, we studied the effect of glioma-conditioned medium on the hypoxia induced changes in human endothelial-like ECV304 cells proliferation, apoptosis, cord formation in vitro and u-pa/u-paR expression. Methods： MTT assay was used to examine the changes in cell proliferation. Cell apoptosis was analyzed by Hoechst 33258 staining. Matrigel cord-like formation assay was used to evaluate the angiogenesis ability of ECV304 cells in vitro. Expressions of u-pa/u-paR mRNA were detected by quantitative real-time RT-PCR. Results： Hypoxia inhibited ECV304 cells proliferation and induced cell apoptosis. Hypoxic conditioned medium（H-CM） while not normoxic conditioned medium（N-CM） of u251 glioma ceils partially blocked the effect of hypoxia on ECV304 cells proliferation and apoptosis. H-CM of u251 glioma ceils also promoted the cord formation of ECV304 cells seeded on matrigel. When u-pa or u-paR monoclonal antibodies were added into ECV304 cells culturing medium, cord formation ability was partially inhibited. H-CM of u251 glioma cells induced upa and upaR expression in ECV304 cells. Conclusion： These suggest that u-pa/u-paR system is involved in glioma angiogenesis trigged by hypoxic microenviroment.

关键词： Endothelia Glioma Hypoxia u-pa u-paR

多孔微载体无血清培养rCHO细胞生产u-pa

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生物工程学报 2000年第3期16卷 387-391页

作者：胡显文肖成祖李佐虎郭志霞高丽华张正光胥照平王菲军事医学科学院生物工程研究所北京100071 中国科学院化工冶金研究所生化工程国家重点实验室北京100080

在 30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u pa)的DNA重组CHO细胞 ,定期部分更换Cytopore多孔微载体 ,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖 ,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在 91d连接换液培养过程中 ,... 详细信息

在 30L搅拌式反应器中无血清培养分泌尿激酶型纤溶酶原激活剂 (u pa)的DNA重组CHO细胞 ,定期部分更换Cytopore多孔微载体 ,使生长在多孔微载体中的细胞不断更新繁殖 ,解决大规模细胞培养中的细胞凋亡问题。在 91d连接换液培养过程中 ,细胞密度可维持在 (1 3～ 2 6 )× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 90 %以上。在7 5L搅拌罐中培养细胞 ,利用外部周期性压力振荡刺激并结合载体更新技术 ,可减轻密度效应对细胞生长和表达的影响 ,在一定程度上提高细胞在高密度培养条件下的表达水平。在 6 7d连续换液培养中 ,细胞最高密度为 2 6 4× 10 7/mL ,活细胞比率维持在 95 %以上。与稳压操作相比 ,利用周期变压刺激技术可提高产量 10 %～ 2 0 % ,且可降低葡萄糖厌氧代谢生成乳酸的转化率 ,利用 4步纯化工艺 ,从含u pa约 135g的 2 10 0L上清中获得约 80 gu pa(单链比例约为 90 % )。

关键词：动物细胞培养微载体更新 u-pa rCHO细胞

COX-2、u-pa和TSP-1在胃癌及周围淋巴结中的表达及意义

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第二军医大学学报 2009年第7期30卷 771-774页

作者：张富花周永宁张锦华庄剑波李强李高中陆斌张志镒吴正奇兰州大学第一医院消化科兰州730000 甘肃省第二人民医院消化科兰州730000 甘肃省武威肿瘤医院消化科武威733000

目的:研究COX-2、u-pa和TSP-1在胃癌及周围淋巴结中的表达状况,探讨它们在胃癌浸润和淋巴结转移中的作用和意义。方法:用组织芯片技术和免疫组化法检测COX-2、u-pa和TSP-1的表达。结果:COX-2、u-pa和TSP-1在胃癌组阳性表达率分别为67.7%... 详细信息

目的:研究COX-2、u-pa和TSP-1在胃癌及周围淋巴结中的表达状况,探讨它们在胃癌浸润和淋巴结转移中的作用和意义。方法:用组织芯片技术和免疫组化法检测COX-2、u-pa和TSP-1的表达。结果:COX-2、u-pa和TSP-1在胃癌组阳性表达率分别为67.7%、78.1%和78.6%,均显著高于对照组(40.0%、6.7%和40.0%,Pu-pa表达与浸润深度和淋巴结转移均有关(P0.05)。COX-2、u-pa和TSP-1在转移淋巴结和对应癌组织间的表达差异无显著性(P>0.05)。COX-2和u-pa、TSP-1的表达呈正相关,u-pa和TSP-1的表达无相关关系。结论:胃癌中COX-2、u-pa和TSP-1高表达;COX-2表达与胃癌的浸润深度有关,u-pa表达与浸润深度和淋巴结转移有关。

关键词：胃肿瘤 COX-2 u-pa TSP-1 淋巴结肿瘤浸润淋巴转移

基质降解酶u-pa,paI-1与人肺癌细胞浸润转移的相关关系的研究

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中国肿瘤临床 1998年第10期25卷 760-763页

作者：李攻戌林洪生李树奇赵钟宽裴迎霞祁鑫朴炳奎中国中医研究院广安门医院肿瘤实验室韩国大田大学校附属韩方病院

观察体外细胞株ＰＧ、ＰＡａ细胞的ｕ－ＰＡ，ＰＡＩ－１活性和抗原表达，结果发现ＰＧ、ＰＡａ细胞均能够产生ＰＡ及ＰＡＩ，免疫细胞化学法定位ＰＡ主要为ｕ－ＰＡ，ＰＡＩ主要为ＰＡＩ－１。在ＰＧ为ｕ－ＰＡ高表达，而ＰＡａ为低ｕ... 详细信息

观察体外细胞株ＰＧ、ＰＡａ细胞的ｕ－ＰＡ，ＰＡＩ－１活性和抗原表达，结果发现ＰＧ、ＰＡａ细胞均能够产生ＰＡ及ＰＡＩ，免疫细胞化学法定位ＰＡ主要为ｕ－ＰＡ，ＰＡＩ主要为ＰＡＩ－１。在ＰＧ为ｕ－ＰＡ高表达，而ＰＡａ为低ｕ－ＰＡ表达，ＰＡＩ－１在ＰＧ、ＰＡａ细胞中均高表达。对ＰＧ瘤细胞在ＢＡＬＢ／ＣＡ裸鼠皮下种植性瘤组织的免疫组化结果显示，ｕ－ＰＡ阳性～强阳性表达，ＰＡＩ－１为阴性表达。说明ｕ－ＰＡ是ＰＧ、ＰＡａ高低不同的转移能力的重要机制之一。

关键词： u-pa paI-1 肺肿瘤肿瘤转移癌细胞侵润

原位杂交检测骨巨细胞瘤u-pa、u-paR和paI-2 mRNA的表达及意义

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中华肿瘤杂志 2001年第5期23卷 386-388页

作者：李海刚董书堃曾韵洁沈溪明曾弘任明能中山医科大学孙逸仙纪念医院病理科广州510120

目的　研究骨巨细胞瘤 (giantcelltumorsofbone,GCT)组织u pa、u paR和paI 2mRNA的表达与GCT病理分级和复发的关系。方法　用原位杂交技术检测 42例GCT组织u pa和u paR和paI 2mRNA的表达。结果　 (1)u pa、u paR和paI 2mRNA在GCT组织多... 详细信息

目的　研究骨巨细胞瘤 (giantcelltumorsofbone,GCT)组织u pa、u paR和paI 2mRNA的表达与GCT病理分级和复发的关系。方法　用原位杂交技术检测 42例GCT组织u pa和u paR和paI 2mRNA的表达。结果　 (1)u pa、u paR和paI 2mRNA在GCT组织多核巨细胞 (MGC)的阳性率分别为 6 4.3%、71.4%和 40 .5 % ;单核基质细胞 (MC)的阳性率分别为 5 4.8%、45 .2 %和 9.5 %。 (2 )Ⅱ、Ⅲ级和复发组GCT的MGCu pamRNA与MCu pa、u paRmRNA的表达率均明显高于Ⅰ级和无复发组 (P均 u pamRNA表达、MGCu paR与paI 2mRNA的表达间、MCu pa与u paRmRNA的表达间均呈正相关 ;MGCpaI 2mRNA的阳性率明显高于MC的阳性率(P均 u pa、u paRmRNA在GCT组织中的表达 ,尤其是在MC中的表达 ,提示肿瘤分化较低和有复发倾向 ;MC可能是GCT中主要的肿瘤细胞。

关键词：骨肿瘤骨巨细胞瘤纤溶酶原激活剂原位杂交 u-pa u-paR paI-2 mRNA

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u-pa在细胞培养上清中的稳定性

军事医学科学院院刊 2003年第5期27卷 395-397页

作者：高丽华胡显文胥照平肖成祖李世崇张正光军事医学科学院生物工程研究所北京100071

尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-pa)主要是由无酶催化活性的单链酶原(scu-pa或pro-uK)和具有激活纤溶酶原(plasminogen)活性的双链尿激酶(tcu-pa或uK)组成.scu-pa只激活吸附在纤维蛋白表面的纤溶酶原,具有选择性溶栓作用。

关键词： u-pa 稳定性双链尿激酶细胞培养

重组paI－1在大肠杆菌中表达条件的研究及其对t－pa，u－pa抑制的分析

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北京大学学报（自然科学版） 1996年第6期32卷 734-740页

作者：隋广超张曼胡美浩北京大学生命科学学院

带有表达质粒ｐＢＶ２２０／ＰＡＩ－１的大肠杆菌中，在菌体密度为Ａ６００ｎｍ＝０．３～０．４时诱导，表达重组ＰＡＩ－１（ｒＰＡＩ－１）的效率最高。在诱导后的６ｈ以内，ｒＰＡＩ－１的百分含量持续升高。ｒＰＡＩ－１经分离纯... 详细信息

带有表达质粒ｐＢＶ２２０／ＰＡＩ－１的大肠杆菌中，在菌体密度为Ａ６００ｎｍ＝０．３～０．４时诱导，表达重组ＰＡＩ－１（ｒＰＡＩ－１）的效率最高。在诱导后的６ｈ以内，ｒＰＡＩ－１的百分含量持续升高。ｒＰＡＩ－１经分离纯化并用盐酸胍激活后，能够与ｔ－ＰＡ及ｕ－ＰＡ反应。

关键词：抑制活性抑制因子纤溶酶原激活物 t-pa u-pa

paI-1、u-pa、VEGF在非霍奇金淋巴瘤中的表达及临床意义

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武汉大学学报（医学版） 2009年第4期30卷 477-480,I0002页

作者：张克俭张丽何莉左学兰陈飞武汉大学中南医院血液科湖北武汉430071 中国医学科学院血液学研究所/血液病医院天津300020

目的:探讨血浆纤溶醇原激活物抑制因子-1(paI-1)、尿激酶纤溶酶原激活物(u-pa)、血管内皮生长因子(VEGF)在非霍奇淋巴瘤(NHL)中的表达及意义。方法:采用SABC免疫组化法检测上述指标在69例NHL中的表达。结果:paI-1、u-pa、VEGF在非霍奇... 详细信息

目的:探讨血浆纤溶醇原激活物抑制因子-1(paI-1)、尿激酶纤溶酶原激活物(u-pa)、血管内皮生长因子(VEGF)在非霍奇淋巴瘤(NHL)中的表达及意义。方法:采用SABC免疫组化法检测上述指标在69例NHL中的表达。结果:paI-1、u-pa、VEGF在非霍奇金淋巴瘤中表达率分别为62.31%,44.93%,34.78%,均显著高于正常淋巴结组织中的表达(Pu-pa在伴有全身症状组中表达较高,u-pa(+)组治疗缓解率较u-pa(-)组低;paI-1(+)组3年生存率明显低于paI-1(-)组;paI-1、u-pa、VEGF之间无协同表达。结论:paI-1、u-pa、VEGF在NHL中的高表达,与NHL的生物学行为密切相关,应联合检测对NHL进行综合评价。

关键词： paI-1 u-pa VEGF 非何杰金氏淋巴瘤

paI-1、u-pa、VEGF、CD34在动脉粥样硬化鼠急性脑缺血中的表达及意义

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武汉大学学报（医学版） 2007年第6期28卷 711-714,F0002页

作者：张克俭刘煜敏张丽孙屿何莉武汉大学中南医院血液科湖北武汉430071 武汉大学中南医院神经科湖北武汉430071 华中科技大学同济医学院附属同济医院血液科湖北武汉430030

目的:探讨paI-1、u-pa、VEGF、CD34在动脉粥样硬化大鼠急性脑缺血中的表达及意义。方法:将大鼠随机分成正常饮食组(A组)和高脂饮食组(B组),分别制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞/再灌注(MCAO/R)模型;观察大鼠神经病学评分,HE染色法检测脑... 详细信息

目的:探讨paI-1、u-pa、VEGF、CD34在动脉粥样硬化大鼠急性脑缺血中的表达及意义。方法:将大鼠随机分成正常饮食组(A组)和高脂饮食组(B组),分别制备大鼠局灶性大脑中动脉栓塞/再灌注(MCAO/R)模型;观察大鼠神经病学评分,HE染色法检测脑缺血区病理改变,免疫组化法检测缺血区paI-1、u-pa、VEGF、CD34表达,并应用流式细胞仪计数外周血CD34+血管内皮祖细胞(EPC)。结果:脑缺血后再灌注24h,paI-1、u-pa、VEGF的表达增高,B组paI-1、VEGF表达较A组明显,u-pa相反;再灌注48h后,外周血CD34+EPC计数B组(0.89%)较A组(1.11%)降低(PpaI-1、u-pa及VEGF高表达促进了动脉粥样硬化的形成并加重急性脑缺血/再灌注损伤,CD34+低表达及EPC减少使血管再生能力降低。

关键词：动脉粥样硬化脑缺血/再灌注 paI-1 u-pa VEGF CD34

狼疮性肾炎中u-pa和paI-1的表达及其意义

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上海医学 2001年第3期24卷 169-172,T003页

作者：洪寅峰张志刚高山上海第二医科大学附属瑞金医院肾脏科 200025

目的　了解尿激酶型纤溶酶原激活物 (u pa)及其I型抑制因子 (paI 1)在狼疮性肾炎 (LN)肾小球病变中的表达及其意义。方法　对 5 0例不同类型的LN和 10例原发性肾小球轻微病变的肾活检组织 ,采用免疫组化及图象分析法比较观察了u pa和pa... 详细信息

目的　了解尿激酶型纤溶酶原激活物 (u pa)及其I型抑制因子 (paI 1)在狼疮性肾炎 (LN)肾小球病变中的表达及其意义。方法　对 5 0例不同类型的LN和 10例原发性肾小球轻微病变的肾活检组织 ,采用免疫组化及图象分析法比较观察了u pa和paI 1在肾小球的表达强度 ,并与肾小球增殖细胞核抗原 (PCNA)阳性细胞数和Ⅳ型胶原染色强度作相关分析。结果　u pa和paI 1在各型LN病变肾小球中的表达 ,均比肾小球轻微病变明显增强 (P paI 1的染色反应强于同组的u pa ,两者有显著差异 (P u pa和paI 1的表达均与PCNA阳性细胞核数呈正相关 (P paI 1的表达还与肾小球内IV型胶原沉积呈正相关 (P u pa和paI 1的异常表达与肾小球的病变程度和病理类型相关 ,并可能是影响狼疮性肾炎发生发展的重要因素。

关键词：狼疮性肾炎尿激酶型纤溶酶原激活物 u-pa Ⅰ型纤溶酶原激活物抑制因子 paI-1