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猪传染性胃肠炎病毒ts株非编码区的克隆及其一二级结构的分析

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动物医学进展 2005年第12期26卷 71-74页

作者：李建强柳纪省胡永浩甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070 中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃兰州730046

参照GenBank中Purdue株全序列对5′和3′非编码区各设计一对特异性引物,经RT-PCR分别获得了2 957 bp和516 bp大小的片段,与预期结果大小相符。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ts株与Puedue株、TH-98和FS772/70株的5′UTR核苷酸序列同源性分别... 详细信息

参照GenBank中Purdue株全序列对5′和3′非编码区各设计一对特异性引物,经RT-PCR分别获得了2 957 bp和516 bp大小的片段,与预期结果大小相符。猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)ts株与Puedue株、TH-98和FS772/70株的5′UTR核苷酸序列同源性分别为99.4%,99.3%,99.0%,TGEV ts株的3′UTR与Miller、Purdue、Niigata、h-5株的核苷酸同源性均为100.0%,与Aomori和Ogawa的同源性为99.3%。对非编码区的二级结构进行分析发现其具有复杂的二级结构。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 ts株非编码区克隆分析

猪传染性胃肠炎病毒S基因的克隆及其结构特征

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中国兽医科技 2004年第9期34卷 3-11页

作者：程杰柳纪省吴润殷相平李宝玉王辉兰喜中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学动物医学院甘肃兰州730070

参照GenBank中登录的TGEVS基因序列设计了 3对特异引物 ,经RT PCR扩增获得了ts株S基因的SⅠ、SⅡ和SⅢ 3个片段 ,其大小分别约为 12 6 2、2 36 8和 12 6 6bp。SⅠ、SⅡ和SⅢ片段经剪接后 ,可知ts株的S基因全长为 4 347nt ,共编码 14 4 ... 详细信息

参照GenBank中登录的TGEVS基因序列设计了 3对特异引物 ,经RT PCR扩增获得了ts株S基因的SⅠ、SⅡ和SⅢ 3个片段 ,其大小分别约为 12 6 2、2 36 8和 12 6 6bp。SⅠ、SⅡ和SⅢ片段经剪接后 ,可知ts株的S基因全长为 4 347nt ,共编码 14 4 9个氨基酸。对ts株与其他毒株的S基因序列进行比较发现 ,ts株与Miller株、FS72 2 / 70株、TGEVH株、96 1933株、TFI株均在 112 4～112 9位有 5′ ATGATA 3′六个碱基 ,而在Purdue株、TH 98株、NEB72 RT株和PRCV HOL87株中缺失 ;ts株与Miller株、FS72 2 / 70株、TFI株、Purdue株、96 1933株、TGEVH株、TH 98株、NEB72 RT株和PRCV HOL87株的核苷酸序列同源性分别为 99.6 %、98.9%、98.0 %、98.3%、95 .7%、99.3%、97.7%、98.3%和 97.5 % ,推导氨基酸序列的同源性分别为 99.2 %、98.4 %、97.7%、97.8%、94 .8%、98.6 %、97.2 %、97.7%和 97.0 % ;ts株S蛋白的推导氨基酸序列较Purdue株、TH 98株和NEB72 RT株多出 2个潜在的糖基化位点 ,共 34个。与不同毒株比较后 ,推测在TGEV的S蛋白中第 71位的Asp(D)与呼吸道嗜性有关 ,第 2 19位的Ala(A)

关键词： ts株 S基因分子克隆序列测定结构特征

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TGEV的sM、M和N基因克隆及特征分析

畜牧兽医学报 2005年第7期36卷 695-700页

作者：程杰柳纪省吴润殷相平李宝玉兰喜王辉中国农业科学院兰州兽医研究所甘肃农业大学动物医学院兰州730070

参照GenBank中收录的TGEVsM、M和N基因序列各设计1对特异引物,经RTPCR扩增获得了ts株的相应基因片段,分别约为346、932和1217bp,其大小与预计的目的片段相符。与其他毒株的相应基因相比较,并经剪接后,ts株的sM、M和N基因全长分别为248、... 详细信息

参照GenBank中收录的TGEVsM、M和N基因序列各设计1对特异引物,经RTPCR扩增获得了ts株的相应基因片段,分别约为346、932和1217bp,其大小与预计的目的片段相符。与其他毒株的相应基因相比较,并经剪接后,ts株的sM、M和N基因全长分别为248、789和1149bp,各编码82个、262个和382个氨基酸;ts株与Purdue株、TFI株和961933株的sM基因核苷酸序列同源性分别为95.2%、92.7%和90.2%;推导氨基酸的同源性分别为95.9%、97.2%、98.8%;与Purdue株、TFI株、TGEVH株和961933株的M基因核苷酸序列同源性分别为95.2%、98.0%、99.6%和95.0%;推导氨基酸的同源性分别为97.0%、97.3%、98.5%、93.5%;与Purdue株、TFI株、FS722/70株、Korea株、TO14株、TGEVH株和961933株的N基因核苷酸序列同源性分别为98.1%、97.7%、99.0%、98.3%、99.2%、99.0%和95.9%,推导氨基酸的同源性分别为97.9%、98.4%、99.0%、97.7%、99.5%、96.2%、96.6%。并对ts株基因间的保守序列和sM、M和N基因及其编码的相应氨基酸的结构特征进行了分析,发现sM和N基因在TGEV中保守;并提示在我国不仅存在有2个不同亚基因型的TGEV,而且我国的TGEV可能是输入性的。

关键词：猪传染性胃肠炎病毒 TGEV ts株 sM基因 M基因 N基因克隆

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温度敏感突变株在病毒学研究中的应用

国外医学（微生物学分册） 1995年第2期18卷 1-2,6页

作者：周生华同济医科大学协和医院病毒室

本文根据病毒温度敏感突变(ts)株的特征,介绍了该突变林在病毒学研究中的应用情况;并简要介绍应用于预防病毒性疾病中的状况。

关键词：病毒温度敏感突变株病毒学 ts株结构

两株PRRSV结构蛋白基因变异分析及M基因的表达

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两株PRRSV结构蛋白基因变异分析及M基因的表达

作者：王娇河北农业大学

学位级别：硕士

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以怀孕母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为主的传染病,对全世界养猪业已造成巨大损失。控制这种传染病是生产上急需解决的问题,关键之一在于生产高效的疫苗,但由于PR... 详细信息

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起的一种以怀孕母猪繁殖障碍和仔猪呼吸道症状为主的传染病,对全世界养猪业已造成巨大损失。控制这种传染病是生产上急需解决的问题,关键之一在于生产高效的疫苗,但由于PRRSV变异程度很大,给高效疫苗的开发造成很大困难。本课题旨在从河北省本地猪场分离毒株,通过与国内外已发表毒株的结构蛋白基因进行序列对比,从分子水平上分析河北省近年来PRRSV的遗传变异情况,确定河北省内PRRSV流行毒株的分型地位,从而为河北地区PRRS的诊断与防治提供理论依据。此外,M蛋白是由ORF6基因编码的膜基质蛋白,它是欧美毒株结构蛋白中最保守的蛋白,是感染猪体液免疫的主要对象,具有很强的免疫原性。本实验还选择其中一株PRRSV的M蛋白基因进行原核表达,为进一步研制PRRSV新型疫苗及诊断试剂奠定基础。本研究从河北省不同地方分离得到的两株PRRSV,通过RT-PCR方法扩增各段结构蛋白基因,将扩增产物分别连接到pMDTM19-T载体并转化Top10感受态细胞,阳性重组质粒进行序列测定。结合2006年以来河北省已发表的毒株序列,并与国内外欧美代表毒株的相应序列进行遗传变异分析,结果显示:ts株和HB-3(cz)株均属北美洲型,包括二者在内的近年来河北省流行PRRSV毒株都在同一亚型,亲缘性很强,且与早期分离的河北毒株HB-1(sh)株亲缘关系很近。此外,PRRSV在国内的流行不表现明显的地域性。本实验还选择HB-3(cz)株的M蛋白为研究对象,将其基因克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建原核表达质粒,通过对表达条件的优化,成功诱导表达了该蛋白。SDS-PAGE可检测到分子质量约为36.9 kDa的目的蛋白,经Western-blotting分析表明,该重组蛋白可被兔抗PRRSV血清所识别,具有免疫原性。为进一步深入研究针对河北省PRRS毒株特异性疫苗及诊断试剂盒的研制奠定理论基础。

关键词： PRRSV ts株 HB-3(cz)株结构蛋白基因变异分析原核表达

猪繁殖与呼吸综合征病毒河北地方株ORF3基因的克隆及变异分析

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广东畜牧兽医科技 2010年第1期35卷 32-34页

作者：王娇赵泽坤王坤孙继国河北农业大学动物科技学院河北保定071001

从河北唐山分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经过4代盲传后,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为ts株。根据GenBank公布的PRRSV JXA1株ORF3基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增完整ORF3... 详细信息

从河北唐山分离到一株疑似猪繁殖与呼吸综合征病毒,接种Marc-145细胞,经过4代盲传后,出现细胞病变,经鉴定为PRRSV,命名为ts株。根据GenBank公布的PRRSV JXA1株ORF3基因的核苷酸序列,设计并合成一对特异性引物,用RT-PCR方法扩增完整ORF3基因,将扩增产物连接到pMD19-T载体并转化克隆菌,将阳性重组质粒PMD-GP3进行序列测定与分析。应用DNA Star软件,将测序结果与国内外已发表野毒株和疫苗株的ORF3基因进行序列比较,并绘制系统进化树。这为研制PRRSV新型疫苗及诊断试剂奠定了基础。

关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒 ts株 ORF3基因变异分析

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研制鸡鼻气管炎鸟杆菌(ORT)疫苗

中国家禽 2003年第2期25卷 12-12页

作者：心怡