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trigger factor表面疏水区对其分子伴侣功能的影响

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Trigger factor表面疏水区对其分子伴侣功能的影响

作者：路伟振哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

分子伴侣在新生肽链成为功能蛋白的过程中发挥着重要作用，包括帮助新合成的肽链折叠，阻止蛋白质聚集并且能够在特定情况下介导功能丧失的蛋白质发生降解。细胞中的分子伴侣构成了一个复杂的网络体系，不同的分子伴侣协调作用，使蛋白... 详细信息

分子伴侣在新生肽链成为功能蛋白的过程中发挥着重要作用，包括帮助新合成的肽链折叠，阻止蛋白质聚集并且能够在特定情况下介导功能丧失的蛋白质发生降解。细胞中的分子伴侣构成了一个复杂的网络体系，不同的分子伴侣协调作用，使蛋白质在细胞内处于稳定的生理平衡，保证各项生命活动的正常进行。trigger factor（TF）是大肠杆菌分子伴侣体系的重要成员，是新生肽链遇到的第一个分子伴侣。TF由三个结构域组成，M端结构域具有肽脯酰胺顺反异构酶（PPIase）的活性，N端和C端结构域共同为新合成的肽链提供了一个保护区，新生肽链可以在保护区内进行折叠。TF与新生肽链之间的作用并不依赖ATP的存在也不需要辅因子的调控，通过与新生肽链周期性地结合和释放，TF能够减少了肽链不正确的折叠，提高了折叠效率。对TF的结构进行分析，发现TF的N端和C端结构域所围成的保护区内的侧面暴露着许多疏水微区，为了研究这些区域是否与TF的分子伴侣功能有关，我们拟通过定点突变的方法，改变这些区域的疏水性质，然后比较突变前后TF分子伴侣活性的差异，分析这些疏水微区在TF分子伴侣功能中的作用。本研究选取溶菌酶（Lysozyme），牛碳酸酐酶（BCAII）和甘油醛三磷酸脱氢酶（GAPDH）三种蛋白质作为TF的作用对象，检测TF突变体帮助变性蛋白质重新折叠以及阻止变性蛋白质聚集能力。实验结果显示，部分突变的位点使得TF的分子伴侣功能发生了明显的改变，但同一种突变体对于三种底物蛋白的折叠和聚集的影响却不完全一致，表明TF具有复杂的生物学功能作用机制。本研究加深了人们对TF分子作用机制的认识，为改造大肠杆菌的分子伴侣体系，提高大肠杆菌外源蛋白表达效率提供了理论基础。

关键词：分子伴侣 trigger factor 蛋白质折叠蛋白质聚集疏水区

trigger factor生理功能位点的鉴定

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Trigger factor生理功能位点的鉴定

作者：王金哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

分子伴侣在新生肽链折叠过程中发挥着非常重要的作用,细胞中的多种分子伴侣共同构成了一个复杂的网络体系,他们之间的协调作用能够维持胞内蛋白的生理平衡,保证生命活动的正常进行。trigger factor(TF)作为一种非ATP依赖的分子伴侣,是... 详细信息

分子伴侣在新生肽链折叠过程中发挥着非常重要的作用,细胞中的多种分子伴侣共同构成了一个复杂的网络体系,他们之间的协调作用能够维持胞内蛋白的生理平衡,保证生命活动的正常进行。trigger factor(TF)作为一种非ATP依赖的分子伴侣,是原核生物分子伴侣中的非常重要一员。已知TF可以通过N端结构域结合在核糖体新生肽链出口处,通过C端结构域与核糖体共同形成一个保护空腔,保护新生肽链在拥挤的环境中正确折叠。在这个保护空腔的内表面上有大量的由理化性质不同的残基构成的微区,这些理化性质不同的微区正是TF与新生肽链相互作用,发挥分子伴侣功能,帮助多肽正确折叠,最终使其获得具有功能性的三级结构的关键。为了确定这些微区在TF分子伴侣活性中的作用,本论文对TF表面上不同的微区进行了相应的定点突变,共制得27个TF突变体,包括将亲水氨基酸残基突变为丙氨酸残基以及疏水氨基酸残基突变为亲水性质的丝氨酸残基。这些突变体基因与底物蛋白腺苷酸激酶(Adenylate kinase,AK)基因共同克隆到p QE60共表达载体上,从而制备出TF与AK的共表达系统。通过检测在不同TF突变体辅助下AK可溶性以及活性的变化,即可确定突变对于TF分子伴侣活性的影响。研究发现TF保护空腔内表面上不同微区的突变对于TF的分子伴侣功能的影响是不同的,许多TF突变体的分子伴侣活性降低,甚至某些位点突变后的TF已无法辅助AK正确折叠,最终导致AK在细胞内大量聚集并沉淀。研究也发现某些TF突变体能够显著提高AK的可溶性以及活性。本研究结果表明TF上存在多个与底物蛋白相互作用的位点,这些位点以协同的方式发挥分子伴侣功能。本论文的研究结果将有助于阐明TF的分子伴侣作用机制。

关键词： trigger factor 分子伴侣表面微区腺苷酸激酶共表达

化学修饰对trigger factor分子伴侣功能的影响

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化学修饰对Trigger Factor分子伴侣功能的影响

作者：孙业润哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

细胞中蛋白的稳态由众多的蛋白因子来维持,这些因子共同形成一个可协调的稳态网络。分子伴侣是稳态网络成员中重要的一员,并且参与到所有的维持蛋白稳态的活动中。新生蛋白通常需要分子伴侣的协助才可以有效地折叠成有功能的三维结构。... 详细信息

细胞中蛋白的稳态由众多的蛋白因子来维持,这些因子共同形成一个可协调的稳态网络。分子伴侣是稳态网络成员中重要的一员,并且参与到所有的维持蛋白稳态的活动中。新生蛋白通常需要分子伴侣的协助才可以有效地折叠成有功能的三维结构。分子伴侣能够协助新生肽链的折叠,确保新生肽链不会错误折叠或者聚集。大肠杆菌trigger factor（TF）是核糖体结合分子伴侣,是大肠杆菌内新生肽链遇到的第一个分子伴侣。TF的结构中存在有一些特殊的区域,推测与TF功能相关。为了了解这些区域对TF功能的作用,本研究通过定点突变方法将所选择的14个位点对应的氨基酸残基用半胱氨酸残基替换,随后选取碘乙酰胺、碘乙酸、2-溴乙胺和N-苯基马来酰亚胺对半胱氨酸残基进行化学修饰从而改变局部理化性质;进而以溶菌酶和甘油醛-3-磷酸脱氢酶作为底物蛋白,检测TF突变体帮助变性蛋白质重新折叠以及阻止变性蛋白聚集的能力。通过比较化学修饰前后TF分子伴侣活性的差异,分析了这些区域在TF分子伴侣功能中的作用。研究结果发现,所研究的14个区域在TF分子伴侣活性中具有不同的功能作用,其功能作用与该区域的疏水、极性以及电荷状态相关。此外研究还发现,在TF帮助不同底物蛋白进行折叠时,相同区域的同种化学修饰也会产生不同的结果,说明TF对底物折叠的辅助情况也取决于底物本身的特性。这些研究结果将加深人们对TF分子作用机制的认识,为改造大肠杆菌的分子伴侣体系,提高大肠杆菌外源蛋白表达效率提供了理论基础。

关键词：分子伴侣 trigger factor 巯基修饰蛋白质折叠蛋白质聚集

Thermal Unfolding of Escherichia oli trigger factor Studied by Ultra-Sensitive Differential Scanning Calorimetry

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Thermal Unfolding of Escherichia oli Trigger Factor Studied ...

分子伴侣trigger factor新功能位点的鉴定

第九届全国酶学学术讨论会暨邹承鲁诞辰85周年纪念会

作者： Dong-Jie Fan Yan-Wei Ding Xian-Ming Pan Jun-Mei Zhou National Laboratory of Biomacromolecules,Institute of Biophysics,Chinese Academy of Sciences,15 Datun Road,Beijing 100101,China.Hefei National Laboratory for Physical Science at Microscale,University of Science and Technology of China,Hefei,230026.Graduate School of the Chinese Academy of Sciences,19 Yuquan Road,Shijinshan District,Beijing 100039,China

Escherichia coli trigger factor (TF) is an important molecular chaperone in nascent peptide *** binds at the ribosome exit tunnel through the interaction of the highly flexible loop in its N-terminal domain with the L... 详细信息

关键词： cross-linking DSC intermediate folding thermal denaturation trigger factor

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分子伴侣Trigger Factor新功能位点的鉴定

作者：李磊吉林大学

学位级别：硕士

分子伴侣广泛存在于细菌、酵母、哺乳动物中，在细胞中组成了庞大健全的网络，能够参与到多种细胞生理过程中，例如帮助蛋白质进行折叠;参与蛋白复合体的组装;参与蛋白质转运、分泌等过程。此外，分子伴侣网络在蛋白质质量控制方面也发... 详细信息

分子伴侣广泛存在于细菌、酵母、哺乳动物中，在细胞中组成了庞大健全的网络，能够参与到多种细胞生理过程中，例如帮助蛋白质进行折叠;参与蛋白复合体的组装;参与蛋白质转运、分泌等过程。此外，分子伴侣网络在蛋白质质量控制方面也发挥着重要的作用，通过对错误折叠或者变性蛋白进行去折叠和解聚作用，能够促使其降解。不同分子伴侣之间的相互协调共同作用，可以保证细胞内的蛋白质处于稳定平衡的状态。 trigger factor (TF)是原核分子伴侣网络中的重要成员。TF包含两部分结构：肽脯氨酰顺反异构酶（PPIase）结构域和一个由N-末端和C-末端共同构成的裂缝（Crevice）结构。这个裂缝区域为刚刚离开核糖体出口位点的多肽提供了保护空间使其可以正确折叠。TF具有分子伴侣活性的同时又有折叠酶活性，还能够调节蛋白折叠速度，协助蛋白质翻译之后的组装。在TF的作用下，绝大部分蛋白质能够快速高效地完成折叠，这使得TF在协助新生肽链折叠方面具有举足轻重的作用。通过对TF结构和序列进行分析，我们在TF的PPIase结构域和C-末端结构域发现两个可能与TF分子伴侣功能相关的疏水区域，为了确定这两个区域在TF分子伴侣功能中的作用，我们构建了两个缺失突变体以及四个位点突变体，即：缺失PPIase结构域的NC、TF389(1-389aa)、I195G、F233G、F322S、L336S/L337G。在利用亲合层析及凝胶层系等方法制备得到目的蛋白后，我们使用圆二色谱仪和荧光光谱仪对TF野生型和突变体蛋白的二级和三级结构进行了表征。然后我们选择了三种不同分子伴侣活性测定底物即Lysozyme、BCAII和GAPDH，研究了TF野生型和突变体分子伴侣活性，分析了所选疏水区域在TF分子伴侣功能中的作用。实验结果表明，所选疏水区域是TF重要的分子伴侣功能位点，其改变能够引起TF分子伴侣活性发生显著性变化。本研究将有助于加深人们对分子伴侣TF结构与功能的认识。

关键词： trigger factor 分子伴侣蛋白折叠蛋白聚集

疏水荧光探针bis-ANS对trigger factor分子伴侣功能及二聚化的影响

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疏水荧光探针bis-ANS对Trigger factor分子伴侣功能及二聚化的影响

C-domain对trigger factor体内分子伴侣作用的影响

第七届全国酶学学术讨论会

作者：石毅周筠梅中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室

trigger factor(TF)是大肠杆菌中新生肽链所遇到的第一个分子伴侣,具有肽基脯氨酰基顺反异构酶(PPIase)活性,由432个氨基酸残基组成,分子量约为48kD。TF分子可以分为结构和功能都相对独立的3个结构域:N端结构域(1-145)、M结构域(146-251... 详细信息

trigger factor(TF)是大肠杆菌中新生肽链所遇到的第一个分子伴侣,具有肽基脯氨酰基顺反异构酶(PPIase)活性,由432个氨基酸残基组成,分子量约为48kD。TF分子可以分为结构和功能都相对独立的3个结构域:N端结构域(1-145)、M结构域(146-251)和C端结构域(252-432)。已知TF的N端可以和核糖体结合;M结构域具有PPIase活力;但C端结构域的功能尚不十分清楚,可能与TF执行分子伴侣功能时与靶蛋白底物结合或形成二聚体有关。本实验室曾将TF中三个与PPIase活性相关的保守残基分别进行突变,得到了四个基本无PPIase活性的突变体:Phe233Gly,Ilel95Gly,Tyr221Gly和Phe233Tyr。这些突变体与野生型TF具有类似的分子伴侣功能,表明TF的分子伴侣活性独立于其PPIase酶活性。

关键词： trigger factor bis-ANS 分子伴侣功能二聚化

来源： cnki会议评论

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C-domain对Trigger Factor体内分子伴侣作用的影响

Effective Measure for Accident Prevention Onboard Sea Vessels—Improvements on 4M4E Analysis

第七届全国酶学学术讨论会

作者：曾丽玲周筠梅中科院生物物理所生物大分子国家重点实验室

trigger factor(TF)是广泛存在于原核生物中的分子伴侣。它可以分为三个结构域:N-domain,M-domain,C-domain。N-domain可以与核糖体大亚基相互作用,从而将TF定位于核糖体新生肽链的出口处,使得TF成为新生肽链折叠所遇到的第一个分子伴侣... 详细信息

trigger factor(TF)是广泛存在于原核生物中的分子伴侣。它可以分为三个结构域:N-domain,M-domain,C-domain。N-domain可以与核糖体大亚基相互作用,从而将TF定位于核糖体新生肽链的出口处,使得TF成为新生肽链折叠所遇到的第一个分子伴侣。M-domain具有肽脯氨酰顺反异构酶活性。而

关键词：分子伴侣 trigger factor 腺苷酸激酶共表达

来源： cnki会议评论

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Journal of Traffic and Transportation Engineering 2020年第2期8卷 47-54页

作者： Yoshiaki Kunieda Anju Ino Hideyuki Kashima Koji Murai School of Marine Technology Tokyo University of Marine Science and TechnologyTokyo 135-8533Japan Japan Agency of Maritime Education and Training for Seafarers Yokohama 231-0003Japan

The 4M4E analysis is a type of root-cause analysis that can multilaterally pinpoint the trigger factors of an accident or disaster using its analytic capabilities and can clarify various countermeasures against each trigger *** study aims to reduce the number of vessel accidents and disasters involving seafarers by improving the practical use of 4M4E *** accidents or disasters involving seafarers,related to a mooring line,sometimes result in a fatality;therefore,this research area has attracted international *** consideration of this,we devised an analysis method for accidents involving a mooring line by adding prediction to the 4Ms of 4M4E,having first extracted the potential causes of an accident through *** 4M4E+P analysis could obtain additional trigger factors that were not revealed in the 4M4E ***,a measure of adopting these newly acquired trigger factors was *** addition,it is thought that 4M4E+P analysis can reduce the risk of vessel accidents and disasters involving seafarers.

关键词： Root-cause analysis 4M4E analysis 4M4E+P analysis mooring line accident trigger factor

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不同分子伴侣活性对新生肽链的影响

不同分子伴侣活性对新生肽链的影响

作者：郑岩哈尔滨工业大学

学位级别：硕士

trigger factor（TF）是大肠杆菌中具有核糖体结合位点的分子伴侣。作为新生肽链合成后遇到的第一个分子伴侣,TF执行着协助蛋白质正确折叠这一重要功能,在原核生物分子伴侣网络中占据极其重要的地位。TF具有foldase、unfoldase和holdas... 详细信息

trigger factor（TF）是大肠杆菌中具有核糖体结合位点的分子伴侣。作为新生肽链合成后遇到的第一个分子伴侣,TF执行着协助蛋白质正确折叠这一重要功能,在原核生物分子伴侣网络中占据极其重要的地位。TF具有foldase、unfoldase和holdase三种分子伴侣活性,各种活性之间以不同程度作用于新生肽链,帮助后者进行折叠。本课题将通过构建具有不同分子伴侣活性的,能够与核糖体结合的分子伴侣,并检测其性质,从而探究三种分子伴侣活性各自对肽链折叠所产生的影响。本课题选取Dna K、Clp B、Dna J和Skp四种具有不同活性的分子伴侣作为改造对象,将TF的N结构域连接到这四种分子伴侣中,构建出具有核糖体结合位点的不同分子伴侣活性的融合蛋白NTF-Dna K、NTF-Clp B、NTF-Dna J和NTF-Skp,并通过蛋白诱导表达和纯化,得到了目的蛋白。之后,本研究对融合蛋白进行了分子伴侣活性和结构性质检测,结果表明TF的N结构域的存在不会对所制备的融合蛋白的活性产生影响。与此同时,本研究还对TF及其他分子伴侣的单基因敲除菌株的转录组、蛋白质组、表型数据进行了分析,发现具有多种分子伴侣活性的TF的敲除能够造成众多基因表达水平发生显著性改变,对细胞生理产生广泛影响,并且造成细胞表型发生多种变化。具有foldase活性的Dna K、具有unfoldase活性的Clp B和具有holdase活性的Skp对基因表达和细胞表型的影响与TF缺失所造成的影响具有重叠性。本课题研究结果将有助于进一步阐释不同分子伴侣活性对蛋白质折叠产生的影响作用,为最终确定不同分子伴侣活性的核糖体结合分子伴侣的生理功能奠定了基础。

关键词：分子伴侣折叠酶活性去折叠酶活性保持酶活性 trigger factor