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Regulation of U6 Promoter Activity by transcriptional interference in Viral Vector-Based RNAi

Genomics, Proteomics & Bioinformatics 2010年第3期8卷 170-179页

作者： Linghu Nie Meghna Das Thakur Yumei Wang Qin Su Yongliang Zhao Yunfeng Feng Key Laboratory of Genome Sciences and Information Cancer Biology and Genetics Group Beijing Institute of Genomics Chinese Acadamy of Sciences Beijing 100029 China Departments of Medicine and Cell Biology Washington University St. Louis MO 63110 USA Immunocore Limited Abingdon Oxon OX14 4RX UK.

The direct negative impact of the transcriptional activity of one component on the second one in c/s is referred to as transcriptional interference （TI）. U6 is a type III RNA polymerase III promoter commonly used for driving small hairpin RNA （shRNA） expression in vector-based RNAi. In the design and construction of viral vectors, multiple transcription units may be arranged in close proximity in a space-limited vector. Determining if U6 promoter activity can be affected by TI is critical for the expression of target shRNA in gene therapy or loss-of-function studies. In this research, we designed and implemented a modified retroviral system where shRNA and exogenous gene expressions were driven by two independent transcriptional units. We arranged U6 promoter driving .shRNA expression and UbiC promoter in two promoter arrangements. In primary macrophages, we found U6 promoter activity was inhibited by UbiC promoter when in the divergent arrangement but not in tandem. In contrast, PKG promoter had no such negative impact. Instead of enhancing U6 promoter activity, CMV enhancer had significant negative impact on U6 promoter activity in the presence of UbiC promoter. Our results indicate that U6 promoter activity can be affected by TI in a proximal promoter-specific and arrange- ment-dependent manner.

关键词： transcriptional interference U6 promoter shRNA retrovirus

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