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tat短肽修饰的聚乙烯亚胺-β-环糊精基因载体

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浙江大学学报（医学版） 2009年第1期38卷 15-23页

作者：来利华姜启英陈丹虎义平余海王青青汤谷平浙江大学医学院免疫学研究所浙江杭州310058 浙江大学化学生物和药物研究所浙江杭州310028

目的:将HIV-1的转录反式激活蛋白(trans-activator of transcription protein,tat)中的片段短肽(RKKRRQRRR)偶联于聚乙烯亚胺-β-环糊精(polyethylenimine-β-cyclodextrin,PEI-β-CyD)聚合物,构建出低毒性、高转染率的新型基因载体。方法:β-环糊精(β-CyD)和低分子量树枝状聚乙烯亚胺(PEI600)通过羰基二咪唑(1,1’-carbonyldiim idazole,CDI)聚合形成骨架结构,通过琥珀酰亚胺-3-(2-嘧啶二硫)丙酸酯[N-succinimidy-3-(2-pyridyldithio)propionate,SPDP]将tat短肽偶联于PEI-β-CyD,构成新的聚合物tat-PEI-β-CyD。采用1H-NMR和FT-IR对聚合物进行化学结构表征;凝胶电泳阻滞实验、粒径测定和透射电镜观察tat-PEI-β-CyD对DNA的浓缩能力,以及浓缩质粒DNA后颗粒形态和粒径大小;MTT法测定载体在A293和B16细胞上的毒性,并对A293和B16细胞进行体外细胞转染实验,以PEI25kDa作为对照。结果:1H-NMR和FT-IR结果显示,tat短肽已成功偶联到PEI-β-CyD。凝胶电泳阻滞试验显示,tat-PEI-β-CyD在N/P为4∶1时可以完全阻滞DNA的迁移。粒径测定结果和透射电镜图像表明,tat-PEI-β-CyD/pDNA(N/P=30∶1)复合物粒径在100nm左右。细胞毒性实验表明,在B16和A293两种不同细胞中,聚合物毒性低于PEI25kDa。体外转染结果表明,在N/P为30∶1时,聚合物在A293、B16和B16BL6细胞中的基因转染效率最高;tat短肽的偶联能提高PEI-β-CyD在B16、B16BL6细胞上的基因转染效率。结论:实验成功构建了tat短肽修饰的PEI-β-CyD新型基因载体。该载体毒性低,基因转染效率高。

关键词：聚乙烯亚胺 β-环糊精类基因产物 tat 遗传载体转染

冠心病患者血清tat、t-PAIC、TM的表达水平及其临床意义

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临床医学工程 2022年第4期29卷 515-516页

作者：朱秀娟申艳飞安阳市第三人民医院检验科河南安阳455000

目的探讨冠心病患者血清tat、t-PAIC、TM的表达水平及其临床意义。方法选取2020年6月至2020年12月期间我院收治的95例冠心病患者作为观察组,另选取同期于我院体检的60例健康者作为对照组,比较两组的血清tat、t-PAIC、TM水平,并绘制ROC... 详细信息

目的探讨冠心病患者血清tat、t-PAIC、TM的表达水平及其临床意义。方法选取2020年6月至2020年12月期间我院收治的95例冠心病患者作为观察组,另选取同期于我院体检的60例健康者作为对照组,比较两组的血清tat、t-PAIC、TM水平,并绘制ROC曲线分析tat、t-PAIC、TM对冠心病的诊断价值。根据Gensini评分结果将观察组患者分为严重亚组和轻度亚组,比较两亚组的血清tat、t-PAIC、TM水平,并采用Pearson相关分析探讨血清tat、t-PAIC、TM水平与Gensini评分的相关性。结果观察组的血清tat、t-PAIC、TM水平均高于对照组(Ptat、t-PAIC、TM对冠心病均具有较高的诊断价值(AUC>0.5,Ptat、t-PAIC、TM水平均高于轻度亚组(Ptat、t-PAIC、TM水平与Gensini评分均呈正相关(Ptat、t-PAIC、TM表达水平升高,检测以上各指标水平有助于冠心病的诊断和病情评估。

关键词：冠心病 tat t-PAIC TM 临床意义

噬菌体展示HIV-1 tat38-61碱性区51和55位随机突变体文库的构建

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生物工程学报 2011年第5期27卷 755-763页

作者：葛宜兵杨旭芳杜哲明庞强曹洁陈秋莉王锦红张华群廖文婷祁培培刘超章萍萍邓松华潘卫安徽医科大学病理生理学教研室合肥230032 中国人民解放军第二军医大学微生物学教研室上海200433 武警江西总队医院外一科南昌330000

为了构建噬菌体展示tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 tat38-61表位的分子进化筛选,采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有X... 详细信息

为了构建噬菌体展示tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库,进一步研究HIV-1 tat38-61表位的分子进化筛选,采用含随机核苷酸序列的引物,通过Overlap PCR的方法获得51和55位氨基酸随机突变的全长tat编码序列,再以此为模板PCR扩增出两端含有Xba I识别序列的tat38-61突变体片段HIV-1 tat38-61(51N/55N),克隆至噬菌体展示载体pCANTAB5S上,转化大肠杆菌TG1,经M13K07辅助噬菌体拯救,构建噬菌体展示tat38-61(51N/55N)碱性区突变体文库。结果显示文库的库容量为5.0×106,滴度为2.65×1012 TU/mL,阳性克隆率为56.50%;序列分析显示文库中51、55位核苷酸与氨基酸均呈随机性分布,达到了对文库进行分子进化筛选的要求,为获得可用作疫苗候选物的新型tat突变体奠定基础。

关键词： HIV-1 tat 碱性区随机突变噬菌体展示

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壳牌tat固定球阀的优化设计

阀门 2023年第2期 129-132页

作者：陈林李敏侯冶苏州道森阀门有限公司江苏苏州215000

介绍了根据荷兰壳牌(SHELL)球阀技术规范MESC SPE/77-130设计固定球阀的特殊结构特点,壳牌SHELL设计确认型式试验规范MESC SPE/77-300的要求。基于产品tat型式试验过程出现的问题对影响试验结果的关键部件进行分析,提出tat固定球阀的结... 详细信息

介绍了根据荷兰壳牌(SHELL)球阀技术规范MESC SPE/77-130设计固定球阀的特殊结构特点,壳牌SHELL设计确认型式试验规范MESC SPE/77-300的要求。基于产品tat型式试验过程出现的问题对影响试验结果的关键部件进行分析,提出tat固定球阀的结构优化设计。

关键词： tat 型式试验优化设计

tat-TOS,磷脂酶D抑制剂和阿霉素的多组分脂质体递送系统的制备及体内外评价（英文）

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Journal of Chinese Pharmaceutical Sciences 2018年第5期27卷 332-341页

作者：宋茂远张媛媛张文茜彭光华王佳星殷梦雅李佳佳刘雅婕李馨儒北京大学医学部药学院分子药剂学与新释药系统北京市重点实验室北京100191

本研究的目的是将α-维生素E琥珀酸酯的偶联物tat-TOS与磷脂酶D抑制剂FIPI以及抗肿瘤药阿霉素共同包载于脂质体递送系统中,用于抗肿瘤转移。首先采用固相合成法合成了tat-TOS,并对其进行结构确证,用诱导凋亡法考察了游离tat-TOS和tat-... 详细信息

本研究的目的是将α-维生素E琥珀酸酯的偶联物tat-TOS与磷脂酶D抑制剂FIPI以及抗肿瘤药阿霉素共同包载于脂质体递送系统中,用于抗肿瘤转移。首先采用固相合成法合成了tat-TOS,并对其进行结构确证,用诱导凋亡法考察了游离tat-TOS和tat-脂质体的体外诱导细胞凋亡的能力,并评价了表面修饰了tat-TOS脂质体的肺部靶向特性,采用薄膜分散法结合pH梯度法与后插入法制备了修饰有tat-TOS的载FIPI和阿霉素的多组分脂质体,并进行理化性质测定,最后评价了细胞对该制剂的体外摄取能力。研究结果表明,所制备脂质体具备粒径分布均一,粒径小的特点,FIPI和DOX的包封率均超过85%,无论是游离还是脂质体包载的tat-TOS均能显著提高诱导肿瘤细胞凋亡的能力,表面修饰了tat-TOS的脂质体具有明显聚集于健康肺组织和肿瘤转移肺组织,多组分脂质体具有最强的细胞摄取能力,预示该脂质体制剂具有更强的体外抗转移功效。

关键词：阿霉素 FIPI 脂质体 α-维生素E琥珀酸酯 tat

PCT、IL-6与D-Dimer、tat联合检测评估患者细菌感染程度和发生血栓风险的研究

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中文科技期刊数据库（引文版）医药卫生 2023年第4期 54-58页

作者：刘丹丹李敏王奎王亚洲郑州大学基础医学院河南郑州450000 郑州大学第三附属医院药学部河南郑州450000 郑州安图生物工程股份有限公司研发中心河南郑州450000

探讨PCT、IL-6与D-Dimer、tat联合检测在评估患者细菌感染程度和发生血栓风险的临床应用价值。方法收集和选用无血栓背景的肺部细菌感染患者样本55例、脓毒血症患者样本66例、无细菌感染的样本10例,总样本量共131例。采用化学发光法(CL... 详细信息

探讨PCT、IL-6与D-Dimer、tat联合检测在评估患者细菌感染程度和发生血栓风险的临床应用价值。方法收集和选用无血栓背景的肺部细菌感染患者样本55例、脓毒血症患者样本66例、无细菌感染的样本10例,总样本量共131例。采用化学发光法(CLIA)检测患者血浆中PCT、IL-6与D-Dimer、tat的表达水平,比较4中血浆标志物的表达差异。结果 PCT和IL-6联合检测在细菌感染的诊断价值高于PCT和IL-6单项指标的检测价值。D-Dimer和tat联合检测在血栓形成风险的诊断价值高于D-Dimer和tat单项指标的检测价值。结论细菌感染的严重程度与血栓形成的风险呈正相关;采用PCT、IL-6与 D-Dimer、tat四项联合检测,能同时评估患者细菌感染程度和发生血栓的风险,避免患者因细菌感染而发生血栓,对机体造成更大的伤害,起到早期预警、早期干预、早期治疗的作用。

关键词：炎症血栓联合检测 PCT IL-6 D-Dimer tat

D-Dimer、tat、PIC联合检测在老年患者深静脉血栓性疾病中的临床应用价值研究

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智慧健康 2022年第26期8卷 10-13页

作者：廖声凯罗玉梅王志军闵倩新疆老年病医院新疆乌鲁木齐830002

目的分析探讨D-Dimer、tat、PIC联合检测在老年患者深静脉血栓性疾病中的临床应用价值研究。方法选取新疆老年病医院2021年10月-2022年2月收治的老年深静脉血栓患者作为本次研究观察组,再选取同时间段老年健康体检者作为对照组。结果观... 详细信息

目的分析探讨D-Dimer、tat、PIC联合检测在老年患者深静脉血栓性疾病中的临床应用价值研究。方法选取新疆老年病医院2021年10月-2022年2月收治的老年深静脉血栓患者作为本次研究观察组,再选取同时间段老年健康体检者作为对照组。结果观察组患者的D-Dimer、tat、PIC检测指标均高于对照组(Ptat、PIC指标高于亚急性期,亚急性期的D-Dimer、tat、PIC检测指标高于慢性期(Ptat、PIC联合检测在老年患者深静脉血栓性疾病中具有重要临床应用价值,老年患者深静脉血栓性疾病患者的检测指标会明显高于健康者。

关键词： D-Dimer tat PIC 老年患者深静脉血栓

HIV-1 tat通过抑制启动子活性调控MCAK基因表达

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第二军医大学学报 2010年第4期31卷 349-353页

作者：黄越承孙薏张士猛徐勤枝周平坤蔡建明第二军医大学海军医学系放射医学教研室上海200433 军事医学科学院放射与辐射医学研究所四室北京100850

目的验证HIV-1tat对有丝分裂着丝点关联驱动蛋白MCAK基因表达的调节作用并探讨其分子机制。方法利用表达tat的人横纹肌肉瘤细胞(TE671)模型及原核表达纯化的tat蛋白,通过Northern印迹法和蛋白印迹技术验证HIV-1 tat对MCAK基因表达的抑... 详细信息

目的验证HIV-1tat对有丝分裂着丝点关联驱动蛋白MCAK基因表达的调节作用并探讨其分子机制。方法利用表达tat的人横纹肌肉瘤细胞(TE671)模型及原核表达纯化的tat蛋白,通过Northern印迹法和蛋白印迹技术验证HIV-1 tat对MCAK基因表达的抑制作用。PCR扩增MCAK基因各启动区片段,与荧光素酶报告质粒相连接,并转染到TE671细胞,通过荧光素活性分析法检测DNA片段启动活性,确定MCAK基因的活性启动区域。进一步通过HIV-1tat与MCAK启动区作用,分析tat对启动子活性的调控作用。结果Northern印迹和蛋白印迹结果证实tat蛋白对MCAK转录、翻译水平的表达都有强烈的抑制作用;荧光报告质粒检测系统分析表明MCAK的核心启动区存在于-399～+1bp区域,且其启动子活性在tat存在的情况下受到明显的抑制。结论HIV-1 tat能作用于MCAK基因启动区-399～+1bp区域,导致MCAK启动子活性降低,从而抑制MCAK基因的表达。

关键词： tat MCAK TE671细胞启动子活性

tat-p21融合蛋白的表达及其在A549细胞中的活性研究

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四川大学学报（自然科学版） 2013年第3期50卷 655-660页

作者：施慧敏吴兰赵梓亦吴传芳四川大学生命科学学院成都610064

在本研究中,通过分子克隆的手段,将编码tat跨膜转运结构域的CDS与人野生型p21蛋白的CDS相连接,并通过原核表达系统表达纯化相应蛋白;然后用该蛋白按浓度梯度:100,200,400,800,1000nmol/L与A549细胞共同孵育,各浓度在10,60,120,240min终... 详细信息

在本研究中,通过分子克隆的手段,将编码tat跨膜转运结构域的CDS与人野生型p21蛋白的CDS相连接,并通过原核表达系统表达纯化相应蛋白;然后用该蛋白按浓度梯度:100,200,400,800,1000nmol/L与A549细胞共同孵育,各浓度在10,60,120,240min终止反应,通过Western Blotting检测进入细胞的p21蛋白量,以此确定最佳的转导条件;接着检测了转导进入A549细胞的tat-p21融合蛋白在细胞中稳定存在的时间.然后通过绘制细胞生长曲线的方法比较了转导tat-p21的细胞与负对照实验组生长速度的区别.结果发现,融合tat跨膜结构域的p21蛋白能够高效进入A549细胞,并在细胞内发挥相应生物学功能,使细胞的生长受到抑制,增殖减慢;而作为负对照的p21蛋白则无相应功能.

关键词： tat p21蛋白 A549细胞