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经皮穴位电刺激通过SHH-Ptch-Smo-Gli1通路易化突触可塑性改善VD大鼠认知的机制研究

经皮穴位电刺激通过SHH-Ptch-Smo-Gli1通路易化突触可塑性改善VD...

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作者：王瑞赣南医学院

学位级别：硕士

目的:基于功能性近红外光谱成像技术(Functional near-infrared spectroscopy,FNIRS)探究血管性痴呆(vasculardementia,VD)患者和健康老年人(healthy elder,ELD)在执行不同认知任务时脑血流量的变化和脑区激活的情况。探究经皮穴位电刺... 详细信息

目的:基于功能性近红外光谱成像技术(Functional near-infrared spectroscopy,FNIRS)探究血管性痴呆(vasculardementia,VD)患者和健康老年人(healthy elder,ELD)在执行不同认知任务时脑血流量的变化和脑区激活的情况。探究经皮穴位电刺激(Transcutaneous Electrical Acupoint Stimulation,TEAS)是否通过SHH-Ptch-Smo-Gli1信号通路易化突触可塑性改善VD大鼠的认知功能。旨在为VD的治疗开发一种安全、有效、经济的康复技术和提供神经科学依据。方法:第一部分:本研究纳入宁波市康复医院(2022年07月-2022年12月)就诊符合纳入标准的脑卒中后认知功能障碍患者(VD组)20名,同时招募年龄匹配的健康老年人(ELD组)20名。用简易精神状态评价量表(mini-mental state examination,MMSE)对两组受试者进行认知功能评估。同时,用FNIRS实时监测两组受试者在执行语言流畅性课题(Verbal Fluency Task,VFT)、连续减7和Stroop认知任务时脑部血流的变化和脑区激活的情况。通过记录两组受试者不同认知范式下的前额叶皮层(pre-frontal cortex,PFC)氧合血红蛋白(Oxy-hemoglobin,Oxy-Hb)浓度和3D可视化脑区激活的情况,对比VD患者和ELD受试者在执行认知任务时神经-血管耦合的差异,挖掘VD的发病机制。第二部分:按照计算机随机数字法将80只健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠(250-300g)分为:假手术组(Sham组)、模型组(Model组)、经皮穴位电刺激组(TEAS组)、经皮穴位电刺激+SHH抑制剂组(TEAS+cyc组)、电针组(EA组)。除Sham组,采用改良两血管阻断(two-vessel occlusion,2-VO)法对其他组大鼠制备VD模型。造模成功后,采用TEAS刺激TEAS组大鼠百会穴和足三里穴,共治疗9天;TEAS+cyc组大鼠每天给予TEAS治疗和注射SHH特异性抑制剂环丙胺溶(cyclopropylamine:10mg/kg),其余组大鼠注射PBS溶液;采用电针刺激EA组大鼠百会穴和足三里穴,共治疗9天;每天抓取束缚Sham组和Model组大鼠,不进行治疗。治疗结束后,新物体识别实验(novel object recognition test,NORT)、Morris水迷宫实验(morris watermaze,MWM)行为学实验用以检测大鼠认知行为学的变化;苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色用以观察大鼠海马CA1区神经元形态结构的变化;透射电镜(Transmission electron microscopy,TEM)技术用以观察大鼠海马CA1区突触结构和形态学的改变;TEAS和EA干预后,采用Western Blot实验检测VD大鼠海马CA1区SHH、Ptch、Smo、Gli1、SYN、PSD-95和GAP-43蛋白表达水平变化。结果:第一部分:1.在执行VFT、连续减7和Stroop认知范式时,与静息态相比,ELD受试者任务态的PFC区域的Oxy-Hb浓度上升,VD患者任务态的PFC区域的Oxy-Hb浓度下降。2.在执行VFT、连续减7和Stroop认知范式时,与ELD组受试者相比,VD患者的休息阶段和任务阶段Oxy-Hb浓度相对变化(△Hb O)显著降低。3.3D可视化结果显示,在执行VFT、连续减7和Stroop认知范式时,ELD组受试者PFC区域均有明显激活且执行Stroop任务时激活最明显,VD患者PFC区域没有明显激活。第二部分:1.神经行为学实验显示,与Sham组相比,Model组大鼠新物体识别指数(discrimination index,DI)和在目标象限停留时间下降,逃避潜伏期延长。在TEAS和EA治疗后,VD大鼠的DI和在目标象限停留时间上升,TEAS+cyc组大鼠与TEAS组相比,DI和在目标象限停留时间下降,逃避潜伏期延长。TEAS和EA治疗后,VD大鼠的空间学习和记忆功能都有不同程度的改善。***染色结果显示,TEAS组和EA组大鼠海马神经元形态与Model组相比排列更加有序,神经元数目增加,细胞结构更加完整,TEAS+cyc组神经元与TEAS组相比排列紊乱、细胞结构不完整。TEAS治疗后,VD大鼠海马区神经元的形态结构得到改善。***结果显示,TEAS组和EA组大鼠海马突触与Model组相比分布更密集,突触结构清晰,前后边界明显,突触前膜囊泡丰富,染色深。TEAS+cyc组与TEAS组相比突触数目更少。VD大鼠

关键词：血管性痴呆功能性近红外脑功能成像经皮穴位电刺激 sonic hedgehog 突触可塑性

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小鼠EPM纤毛IFT88与Shh信号表达及纤毛解体关系的研究

小鼠EPM纤毛IFT88与Shh信号表达及纤毛解体关系的研究

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作者：王世林遵义医科大学

学位级别：硕士

目的:敲减小鼠腭胚突间充质(Embryonic Palatal Mesenchymal,EPM)细胞初级纤毛内运输系统(Intraflagellar transport,IFT)相关重要组件Ift88,探讨EPM细胞初级纤毛与sonic hedgehog(Shh)信号传递之间的关系及IFT88在纤毛解体中的作用。方法:体外培养胚胎13.5天C57BL/6J小鼠EPM细胞并鉴定,将培育细胞分为三组,实验组细胞慢病毒转染敲减Ift88,空白对照组细胞常规培养,阴性对照组细胞转染空载慢病毒培养。实验1:上述三组细胞加入分泌性Shh蛋白培养24小时后提取总蛋白,利用免疫印迹技术检测对比三组细胞Shh信号通路相关因子Ptch1、Smo、Gli3、Cyclin D1,并比较转录因子Gli3A/Gli3R的比率变化;同时对比三组细胞纤毛解体相关蛋白Aurora A、磷酸化Aurora A和HEF1的变化;实验2:实验组细胞分成两组分别不加分泌性Shh蛋白(实验A组)和加入分泌性Shh蛋白(实验B组),检测对比Gli3A/Gli3R比率变化及Cyclin D1表达的变化,进行统计学分析。结果:实验1:Smo与Ptch1表达量在实验组和空白对照组中比较无统计学差异。Gli3A/Gli3R比率在实验组较空白对照组升高(P<0.05),Cyclin D1在实验组与空白对照组相比表达增加(P<0.05);HEF1实验组与空白对照组相比表达减少(P<0.05),Aurora A实验组与空白对照组相比表达明显减少(P<0.05),磷酸化Aurora A实验组与空白对照组及阴性对照组相比无统计学差异;实验2:实验A组与实验B组比较,实验B组Cyclin D1表达和Gli3A/Gli3R比率均升高(P<0.05)。结论:敲减Ift88后影响Shh信号通路相关组件和纤毛解体相关蛋白的表达,Shh信号在小鼠EPM细胞中可能通过非依赖于初级纤毛的通路传递其下游信号因子,同时IFT88影响纤毛调控器HEF1及Aurora A进而影响纤毛的稳定性。

关键词： EPM 初级纤毛 sonic hedgehog IFT 纤毛解体

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VEGF-C和sonichedgehog在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

VEGF-C和SonicHedgehog在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

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作者：伍宁复旦大学

学位级别：硕士

目的:探讨血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)和sonic hedgehog(SHH)在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化SABC法检测45例食管鳞状细胞癌组织和25例癌旁正常食管粘膜组织中VEGF-C和... 详细信息

目的:探讨血管内皮生长因子C(vascular endothelial growth factor-C,VEGF-C)和sonic hedgehog(SHH)在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义。方法:应用免疫组化SABC法检测45例食管鳞状细胞癌组织和25例癌旁正常食管粘膜组织中VEGF-C和Shh的表达。结果:食管鳞状细胞癌组织中VEGF-C和SHH阳性表达率分别为42.2%和60.0%,显著高于癌旁正常食管粘膜组织中的表达(P值分别为0.025、0.027)。VEGF-C的表达与淋巴结转移相关(P=0.004),与性别及肿瘤大体类型、肿瘤长度、肿瘤分化程度、浸润深度等临床病理因素和术后生存率无关(P>0.05);SHH的表达与淋巴结转移以及肿瘤分化程度相关(P值分别为0.025、0.008),与性别及肿瘤大体类型、肿瘤长度、浸润深度等临床病理因素和术后生存率无关(P>0.05);食管鳞状细胞癌组织中VEGF-C与SHH的表达无相关性(P>0.05)。结论:食管鳞状细胞癌组织中VEGF-C和SHH的高表达预示着它们在食管鳞状细胞癌发生发展中起到一定的作用,VEGF-C和SHH可能成为食管癌治疗的重要分子靶向,联合检测两者对于食管鳞状细胞癌的早期诊断、侵袭转移能力评估、预后判断具有重要的临床意义。

关键词：血管内皮生长因子C sonic hedgehog 食管鳞状细胞癌免疫组化临床病理因素

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SHH and TRPCs coordinately increase intracellular calcium elevation in neurons

SHH and TRPCs coordinately increase intracellular calcium el...

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中国神经科学学会第十届全国学术会议

作者： Yu-Juan SU Shao-Rong MA Rui LU Qing WANG Qian HE Yi-Zheng WANG Laboratory of Neural Signal Transduction Institute of NeuroscienceShanghai Institutes of Biological SciencesState Key Laboratory of Neuroscience The Graduate School Chinese Academy of Science

Objective The hedgehog pathway is a major regulator of embryonic development,and mutations that decrease its activity are known to be associated with severe defects in nervous system *** sonic hedgehog(SHH),one hedgehog expressed mainly in the central nervous system,acts as both morphogen and mitogen and plays critical roles in cell differentiation and *** the development processes in which SHH participates,need calcium However,whether SHH can induce intracellular calcium elevation remains *** present study is to explore whether SHH can induce intracellular calcium *** Primary hippocampal neurons were isolated and cultured as described ***,the neurons were obtained by dissociating the hippocampus from embryonic day 18 Sprague Dawley rat brains and then seeded onto coverslips coated with *** were cultured in Neurobasal supplemented with B-27 and glutamax for 8-12 days before *** in Cytosolic Ca concentration were measured using Fura-2 AM(Invitrogen).Results(1) SHH stimulation can increase intracellular calcium elevation via promoting calcium influx in cultured hippocampal neurons.(2)Transient receptor potential canonical channels(TRPCs) may be involved in this *** SHH and TRPCs can coordinately increase intracellular calcium elevation in neurons.

关键词： sonic hedgehog calcium TRPC channels hippocampal neurons

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Shh信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性影响的研究

Shh信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性影响的研究

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作者：张武阳第四军医大学

学位级别：硕士

髁突肥大(Condylar hyperplasia,CH)是发生于青少年的一种具有自限性的单侧髁突过度生长性疾病,无性别差异,常导致患者面部偏斜和咬合紊乱,从而影响美观和咀嚼。髁突肥大的确切发病机制未明,关于其治疗方式目前仍以髁突高位切除术为主... 详细信息

髁突肥大(Condylar hyperplasia,CH)是发生于青少年的一种具有自限性的单侧髁突过度生长性疾病,无性别差异,常导致患者面部偏斜和咬合紊乱,从而影响美观和咀嚼。髁突肥大的确切发病机制未明,关于其治疗方式目前仍以髁突高位切除术为主。因此,针对髁突肥大病因开展基础研究,有助于探索新的治疗方式,从而在疾病的早期阻断其发生,减轻或避免手术带来的创伤。大量临床证据和组织学证据已证实患侧髁突的生长活跃是髁突肥大的主要病因。髁突软骨是髁突的生长中心,其生长过程包括软骨细胞的增殖、分化、肥大及凋亡等重要过程。本课题组前期研究发现,与正常髁突软骨细胞相比,髁突肥大软骨细胞的增殖能力显著升高。但是关于髁突肥大软骨细胞的凋亡活性变化对髁突肥大病理进程的影响目前尚未见相关报道。经查阅文献发现,在正常软骨的生长发育过程中,Shh信号通路发挥着至关重要的作用。Shh信号通路的主要成分包括配体Shh,膜受体Ptc和Smo以及转录因子Gli等。Tavella S等研究发现,过表达的Shh信号通路能够抑制小鼠肢体关节软骨的凋亡。而且Shh信号能够通过介导PI3K/AKT或ERK进而来调控细胞的凋亡。但是Shh信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性的影响尚未明晰,因此,本研究拟探究Shh信号通路在髁突肥大软骨中的表达情况,并验证Shh信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性的影响以及潜在的分子机制。实验一、软骨组织标本的收集和软骨细胞的分离培养实验方法:1,标本来源:正常髁突软骨标本来至于第四军医大学口腔医院髁突骨折手术患者(骨折块无法固定),髁突肥大软骨标本源于武汉大学口腔医院SPECT阳性的髁突肥大手术患者;2,组织标本的处理:选取结构完整的正常髁突软骨标本及髁突肥大软骨标本各3例,常规多聚甲醛固定,EDTA脱钙;3,软骨细胞的分离培养:利用酶消化法分离培养软骨细胞;收集第二代软骨细胞,转藻酸盐微珠三维培养,以防止软骨细胞的去分化。实验结果:在平板培养状态下,软骨细胞形态多为多角形、三角形,少数呈圆形或短梭形,细胞集聚生长成簇,呈“铺路石”样外观。藻酸盐三维培养状态下微珠呈水滴状或圆形,软骨细胞呈圆球形亮点状散在分布。实验结论:利用机械和酶联合消化法能够获得细胞活性较高的髁突软骨细胞。实验二、Shh信号通路在髁突肥大软骨细胞的表达变化情况实验方法:1,选取正常髁突软骨及髁突肥大软骨组织标本各3例,利用免疫组化染色检测Shh及其膜受体Smo在两组软骨中的表达情况;2,在三维培养的第21天分别收集正常软骨细胞及髁突肥大软骨细胞,提取总蛋白及RNA,然后利用Western blotting及Real-time PCR分别从蛋白及基因水平检测Shh及Smo在两组软骨细胞中的表达情况。实验结果:免疫组化染色结果显示,髁突肥大软骨中Shh和Smo均呈异常高表达,且主要集中于未分化间充质层和肥大层。与正常髁突软骨细胞相比,髁突肥大软骨细胞中Shh和Smo蛋白和基因的表达水平均显著增高(P<0.05)。实验结论:Shh信号通路在髁突肥大软骨中呈异常高表达。实验三、Shh信号通路对髁突肥大软骨细胞凋亡活性的影响实验方法:将软骨细胞随机分为三组:正常髁突软骨细胞组(NC组)、髁突肥大软骨细胞组(CH组)及Cyclopamine(Smo受体阻断剂)刺激肥大软骨细胞组(CH+Cyclo组),在三维培养的第5、12、19天分别向CH+Cyclo组添加Cyclopamine刺激48h,分别提取总蛋白及RNA,然后利用Western blotting和Real-time PCR检测Cleaved-caspase3在三组细胞中的表达情况。实验结果:与NC组相比,CH组中Cleaved-caspase3基因及蛋白的表达水平均显著降低(P<0.05),添加Cyclopamine阻断Shh信号通路之后,Cleaved-caspase3基因及蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05)。实验结论:Shh信号通路能够抑制髁突肥大软骨细胞的凋亡。实验四、Shh信号通路对软骨细胞凋亡活性影响的机制研究实验方法:将软骨细胞随机分为4组:CH组、CH+Cyclo组、LY294002刺激髁突肥大软骨细胞组(CH+LY294002组)及U0126刺激髁突肥大软骨细胞组(CH+U0126组)。在三维培养的第5、12、19天分别用Cyclopamine、LY294002(PI3K/AKT阻断剂)及U0126(MAPK/ERK阻断剂)刺激细胞48h,于第21天分别提取总蛋白和RNA,然后利用Western blotting检测Cleaved-caspase3、AKT、ERK、P-AKT及P-ERK的表达变化情况,并用Real-time PCR检测Cleaved-caspase3 m RNA的表达情况。实验结果:与C

关键词：颞下颌关节髁突软骨髁突肥大细胞凋亡 sonic hedgehog

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牦牛睫毛毛囊的形态发生及其SHH与β-catenin的表达

牦牛睫毛毛囊的形态发生及其SHH与β-catenin的表达

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作者：李静西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究用胚龄（Ed）45～240牦牛胚胎上睑皮肤为实验材料,相同个体的牦牛背部皮肤和相同胚龄的当地黄牛上睑皮肤作为对照,通过制作石蜡组织切片,HE染色和EnVision免疫组化法,研究牦牛睫毛毛囊的形态发生过程中的组织形态学变化,并定性定... 详细信息

本研究用胚龄（Ed）45～240牦牛胚胎上睑皮肤为实验材料,相同个体的牦牛背部皮肤和相同胚龄的当地黄牛上睑皮肤作为对照,通过制作石蜡组织切片,HE染色和EnVision免疫组化法,研究牦牛睫毛毛囊的形态发生过程中的组织形态学变化,并定性定量检测SHH（sonic hedgehog）和β-catenin在牦牛睫毛毛囊形态发生中的表达。结果如下: 1.牦牛睫毛毛囊的形态发生约开始于Ed 55,背皮毛囊则开始于Ed65;睫毛形成毛囊的时间约为Ed120,而背部毛囊约为Ed150;睫毛毛球直径和下陷深度远大于背部毛囊,牦牛睫毛毛囊彼此独立,无次级毛囊,而背部皮肤毛囊有次级毛囊且以毛囊群的形式存在;牦牛睫毛毛囊较密,鞘平直,黄牛睫毛毛囊稍稀且鞘弯曲。 2. SHH和β-catenin在牦牛睫毛毛囊形态发生的表皮和间充质中均有表达,但SHH表达先于β-catenin;β-catenin在牦牛睫毛毛囊形态发生的表皮和间充质中表达波形一致,表皮高于间充质;SHH的表达波形不一致,在表皮中表达与毛囊发育阶段密切相关,而在间充质中的表达主要见于毛囊发育的早期和晚期。 3. SHH和β-catenin在牦牛背皮毛囊形态发生的表皮和间充质表达波形一致,但与睫毛比较差异很大,两种信号分子的表达强度均低于睫毛毛囊。结果表明:SHH和β-catenin信号在睫毛毛囊形态发生过程的表皮-间充质相互作用中起着极为重要的作用,以表皮为主,间充质为辅;SHH与β-catenin在睫毛毛囊形态发生中既有协同作用,也有各自的分工,据推测SHH与β-catenin的表达时间、强度差异可能对于毛囊类型的决定具有重要作用。

关键词：牦牛睫毛形态发生 sonic hedgehog β-catenin 时空表达

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一例遗传性Haas型并多指畸形家系遗传鉴定与基因分析

一例遗传性Haas型并多指畸形家系遗传鉴定与基因分析

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作者：蒲思宇四川大学

学位级别：硕士

目的:本研究对一个临床表型为Haas型并多指的家系进行基因变异分析,以期明确致病突变及其遗传模式。材料和方法:1、通过遗传咨询、临床检查和血液采集,得到该家系的遗传特点、手足照片、影像资料与血液样本,并根据信息绘制遗传图谱。通... 详细信息

目的:本研究对一个临床表型为Haas型并多指的家系进行基因变异分析,以期明确致病突变及其遗传模式。材料和方法:1、通过遗传咨询、临床检查和血液采集,得到该家系的遗传特点、手足照片、影像资料与血液样本,并根据信息绘制遗传图谱。通过分析家系各成员的患病情况,结合文献筛查与对照,初步推测遗传方式。2、从该家系4代11人的外周血中提取基因组后,运用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction;PCR)扩增对可疑突变位点极性决定区调节序列(ZPA regulation sequence;ZRS)进行检测,结果通过凝胶电泳和外送测序验证。3、选取该家系中8人的基因组应用Illumina PE150平台进行第二代全基因组测序,将测序结果进行比对,过滤筛查得出突变位点,并由此构建该家系突变模式。为了最终确定突变模式并验证其正确性,再次将三名患者II-6/III-2/IV-2的基因组进行第三代全基因组测序(Nanopore)。4、运用分子实验对突变模式进行验证。首先进行突变后新增接头的PCR扩增,结果通过凝胶电泳和外送测序获得。随后进行基因组的实时荧光定量PCR,对患者基因组内的缺失与重复突变进行定量分析。结果:1、该家系主要表现为双手1-5指并指,双手三指节拇指,伴足部畸形,表型随着传代的进行,表现出逐渐加重的趋势。初步推测遗传方式为常染色体显性遗传。2、未在患者组和正常对照组间发现异常突变位点,排除了ZRS区段上插入、缺失和点突变的情况。为进一步验证是否存在ZRS片段重复,并筛查新突变位点,我们拟对该家系进行基因组测序。3、第二代全基因组测序结果中发现在7号染色体7q36.3区域肢体发育膜蛋白1(limb development membrane pro-tein 1;LMBR1)基因内部ZRS附近存在一染色体内倒位和重复突变,并由此假定了该家系的突变模式。第三代全基因组测序进一步证实了最终的突变模式。4、PCR后的凝胶电泳显示两个基因组结构变异才产生的接头在II-6、III-2和IV-2中存在,而在正常对照III-1中未见,且II-6突变的条带亮度低于III-2和IV-2,证实在患者中确实存在该基因组结构变异。荧光定量PCR直接定量地检测了基因组中Loss和Duplication的量,III-2和IV-2量的改变相较于II-6更加明显。结论:该家系为常染色体显性遗传,突变位于7号染色体q36.3区域LMBR1基因内部,突变模式为ZRS区段丢失,ZRS附近区域片段的重复与倒位。该重复片段与倒位模式作用于肢体发育的机制尚无相关研究,故仍需进一步功能鉴定,将丰富目前单纯性并多指分子遗传学认识。

关键词：并多指基因测序定位信号分子 sonic hedgehog

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小鼠胚胎腭间充质细胞中Smo蛋白在初级纤毛的定位研究

小鼠胚胎腭间充质细胞中Smo蛋白在初级纤毛的定位研究

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作者：殷杰遵义医学院

学位级别：硕士

目的:探讨对体外培养的小鼠腭间充质细胞初级纤毛数量的影响因素,观察Shh下游信号分子Smo在小鼠腭间充质细胞初级纤毛中的传递。方法:体外培养胚胎13.5-15.5天C57BL/6J小鼠腭板间充质细胞,并对培养细胞进行血清饥饿,免疫荧光标记间充质... 详细信息

目的:探讨对体外培养的小鼠腭间充质细胞初级纤毛数量的影响因素,观察Shh下游信号分子Smo在小鼠腭间充质细胞初级纤毛中的传递。方法:体外培养胚胎13.5-15.5天C57BL/6J小鼠腭板间充质细胞,并对培养细胞进行血清饥饿,免疫荧光标记间充质细胞的Smo,观察血清饥饿前后小鼠胚胎腭间充质细胞中有纤毛细胞数量的变化。将培养的细胞分为对照组、实验组1和实验组2,在实验组1和2的培养细胞中分别用Shh蛋白和SAG处理,免疫荧光标记间充质细胞乙酰化α-微管蛋白和Smo,观察Smo蛋白在细胞内的位置变化。结果:通过对间充质细胞的初级纤毛标记后观察发现,使用血清饥饿可增加有纤毛细胞占总细胞的数量比例;Shh蛋白或SAG处理体外培养的小鼠胚胎腭间充质细胞后,在初级纤毛内检测到Smo,而对照组细胞初级纤毛内未检测到Smo聚集。结论:(1)血清饥饿可以提高体外培养的小鼠胚胎腭间充质细胞纤毛率。(2)小鼠胚胎13.5-15.5天的腭板间充质在体外环境下可接收Shh信号,对SAG处理能产生反应。

关键词：小鼠胚胎腭间充质细胞初级纤毛 sonic hedgehog Smoothened

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LPS诱导人胃癌细胞上皮间质转化的作用及机制

LPS诱导人胃癌细胞上皮间质转化的作用及机制

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作者：余功旺广东药学院

学位级别：硕士

目的探讨LPS诱导人胃癌细胞上皮间质转化的作用及机制,为胃癌治疗提供新思路。方法LPS作用于人胃癌细胞,显微镜下观察细胞形态变化、Western blot和Real-time PCR技术检测EMT相关分子的表达、划痕-愈合实验和Transwell侵袭实验检测细胞... 详细信息

目的探讨LPS诱导人胃癌细胞上皮间质转化的作用及机制,为胃癌治疗提供新思路。方法LPS作用于人胃癌细胞,显微镜下观察细胞形态变化、Western blot和Real-time PCR技术检测EMT相关分子的表达、划痕-愈合实验和Transwell侵袭实验检测细胞的迁移和侵袭能力。Western blot和Real-time PCR技术检测LPS诱导前后Shh信号通路相关分子(Shh、Ptch1、Gli2)的表达水平;采用Shh信号通路特异性抑制剂环巴胺联合LPS作用于人胃癌细胞,观察抑制Shh信号通路对LPS诱导人胃癌细胞EMT、迁移和侵袭能力的影响。利用NF-κB信号通路特异性抑制剂BAY11-7028,观察抑制NF-κB信号通路对LPS诱导Shh信号通路活化的影响,以确定LPS是否通过NF-κB信号通路调控Shh信号通路。结果10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,AGS细胞形态由鹅卵石样变为长梭形,HGC-27和SGC-7901细胞形态无明显改变;Real-time PCR结果显示,10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞的上皮细胞标记物E-cadherin m RNA表达较对照组降低,间质细胞标记物N-cadherin m RNA表达较对照组升高,差异无统计学意义(P>0.05);Western blot结果显示10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞的上皮细胞标记物E-cadherin蛋白表达较对照组显著升高,间质细胞标记物N-cadherin蛋白表达较对照组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);划痕-愈合实验和Transwell侵袭实验结果显示,10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞的迁移和侵袭能力较对照组显著增强,差异有统计学意义(P<0.05)。10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-790148 h后,Shh信号通路相关分子Shh、Gli2、Ptch1 m RNA和蛋白表达水平较对照组显著升高,差异均有统计学意义。10μM环巴胺和10μg/m L LPS联合作用于人胃癌细胞AGS、HGC-27和SGC-7901 48 h后,三株人胃癌细胞Shh信号通路相关分子Shh、Gli2、Ptch1 m RNA和蛋白表达水平较LPS组显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05);三株人胃癌细胞上皮细胞标记物E-cadherin蛋白表达较LPS组显著升高,间质细胞标记物N-cadherin、Slug和Vimentin蛋白表达较LPS组显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);三株人胃癌细胞的迁移和侵袭能力较LPS组亦显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。10μg/m L LPS作用于人胃癌细胞SGC-7901 48 h后,NF-κB p65蛋白表达较对照组显著升高,IκBα蛋白表达显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。10μM BAY11-7028和10μg/m L LPS联合作用于人胃癌细胞SGC-7901 48 h后,Shh信号通路相关分子Shh、Gli2、Ptch1的m RNA和蛋白表达水平较LPS组显著降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论LPS可以诱导人胃癌细胞发生EMT,促进人胃癌细胞的迁移和侵袭。LPS诱导人胃癌细胞发生EMT的机制可能与激活NF-κB/Shh信号通路有关。

关键词：胃癌上皮间质转化脂多糖 sonic hedgehog NF-κB

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SHH和β-catenin在牦牛蹄缘不同位点毛囊形态发生中的时空表达

SHH和β-catenin在牦牛蹄缘不同位点毛囊形态发生中的时空表达

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作者：赵云辉西北农林科技大学

学位级别：硕士

本研究用胚龄(Ed)45～248牦牛胚胎蹄缘皮肤为实验材料,Ed 55～275黄牛胚胎蹄缘皮肤作为对照,通过石蜡组织切片、HE染色和EnVison免疫组化法,研究牦牛蹄缘不同位点毛囊的形态发生过程中的组织形态学变化,并定性定量检测SHH(sonic Hedgeh... 详细信息

本研究用胚龄(Ed)45～248牦牛胚胎蹄缘皮肤为实验材料,Ed 55～275黄牛胚胎蹄缘皮肤作为对照,通过石蜡组织切片、HE染色和EnVison免疫组化法,研究牦牛蹄缘不同位点毛囊的形态发生过程中的组织形态学变化,并定性定量检测SHH(sonic hedgehog)和β-catenin在牦牛蹄缘不同位点毛囊形态发生中的时空表达,结果如下: 1.牦牛蹄缘近蹄端毛囊的形态发生约开始于Ed 45,远蹄端为Ed 55,形成成熟毛囊的时间约为Ed 120;近蹄端至远蹄端蹄缘毛囊形态发生的时间、阶段、大小和下陷深度依次呈递减梯度,可见次级毛囊,毛囊均以毛囊群形式存在。 2. SHH和β-catenin在牦牛蹄缘毛囊的表达时间与位点有关,信号波由近蹄端向远蹄端传递;但在黄牛的表达与位点无关,信号传递方式不同。 3. SHH与β-catenin在牦牛与黄牛毛囊形态发生中的作用均与毛囊发育阶段相关,但牦牛的信号表达强度远高于黄牛。 4.在牦牛蹄缘毛囊形态发生过程中,SHH对表皮的作用强于间充质。 5.在牦牛蹄缘毛囊形态发生过程中,β-catenin对表皮作用强于间充质。结果表明,SHH和β-catenin信号在蹄缘毛囊形态发生过程的表皮-间充质相互作用中起着极为重要的作用。据推测,SHH负责发出信号指导细胞分化,决定细胞命运。β-catenin则主管维持细胞分化状态并大量增殖。SHH与β-catenin在毛囊形态发生中既有协同作用,也有各自的分工,提示SHH的表达时间、强度差异可能是决定近蹄端—远蹄端毛囊形态发生时间的关键因素;而β-catenin表达的强度差异可能是决定毛囊的大小梯度的关键因素;在毛囊形态发生过程中SHH与β-catenin对表皮—间充质相互作用调控以表皮为主,间充质为辅。

关键词：牦牛蹄缘毛囊形态发生 sonic hedgehog β-catenin 时空表达

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