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sonic hedgehog信号通路在SAMP8小鼠海马中增龄性变化及针灸干预作用研究

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中华中医药学刊 2022年第10期40卷 64-67,I0016页

作者：刘欣媛杜艳军邓晓妮王丽陈江敏吴文辉湖北中医药大学针灸骨伤学院湖北武汉430061 针灸治未病湖北省协同创新中心湖北武汉430061

目的观察快速老化小鼠SAMP8海马中sonic hedgehog信号通路Shh、Smo、Gli1、Ptch1蛋白表达及转录水平的增龄性变化及针灸干预作用。方法选用3、6、10月龄的SAMP8小鼠及同龄且遗传背景相同的SAMR1小鼠作为实验对象。随机将3月龄SAMP8小... 详细信息

目的观察快速老化小鼠SAMP8海马中sonic hedgehog信号通路Shh、Smo、Gli1、Ptch1蛋白表达及转录水平的增龄性变化及针灸干预作用。方法选用3、6、10月龄的SAMP8小鼠及同龄且遗传背景相同的SAMR1小鼠作为实验对象。随机将3月龄SAMP8小鼠分为3M针灸组、3M模型组,每组6只;3M正常组为6只3月龄SAMR1小鼠。随机将6月龄SAMP8小鼠分为6M针灸组、6M模型组,每组6只;6M正常组为6只6月龄SAMR1小鼠。随机将10月龄SAMP8小鼠分为10M针灸组、10M模型组,每组6只;10M正常组为6只10月龄SAMR1小鼠。3M针灸组、6M针灸组、10M针灸组分别在“百会”穴、双侧“神门”穴进行针刺,双侧“肾俞”穴进行艾灸,15 min/次,1次/d。6 d为1个疗程共进行4个疗程,疗程间间隔1 d。治疗结束后采用免疫印迹法及qPCR法检测各组小鼠海马sonic hedgehog信号通路核心组成Shh、Smo、Gli1、Ptch1蛋白表达及转录水平。结果 Western blotting结果显示:3、6、10月龄针灸组小鼠海马Shh、Smo、Gli1相对表达量均高于相应模型组小鼠,Ptch1相对表达量较同月龄模型组降低,但10M针灸组与10M模型组差异无统计学意义。qPCR实验结果显示:3、6、10月龄针灸组小鼠海马Shh、Smo、Gli1基因转录水平较其相应模型组均上调,Ptch1基因转录水平较其相应模型组均下调,但10M针灸组与10M模型组差异无统计学意义。同时在SAMP8和SAMR1海马中Shh、Smo、Gli1、Ptch1蛋白表达水平存在相同的增龄性上升趋势。结论 Shh、Smo、Gli1、Ptch1蛋白表达水平在快速老化的SAMP8小鼠海马中呈增龄性上升趋势,针灸干预可能上调Shh信号通路蛋白水平,进一步促进NSCs增殖分化产生新神经元,可能是治疗神经退行性疾病的新途径。

关键词： sonic hedgehog信号通路 SAMP8 针灸疗法增龄性神经退行性疾病

sonic hedgehog信号通路对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞上皮-间质转分化的影响

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Sonic hedgehog信号通路对高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞上皮-间质...

作者：张菁慧中国医科大学

学位级别：硕士

研究背景腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是肾病末期进行一体化治疗的方式之一,操作简便,经济负担较轻,治疗时间灵活,并且能有效保护残存的肾功能,已逐渐成为大多数终末期肾病患者(End-stage renal disease,ESRD)的首选。腹膜间皮细胞... 详细信息

研究背景腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)是肾病末期进行一体化治疗的方式之一,操作简便,经济负担较轻,治疗时间灵活,并且能有效保护残存的肾功能,已逐渐成为大多数终末期肾病患者(End-stage renal disease,ESRD)的首选。腹膜间皮细胞(peritoneal mesothelial cells,PMCs)是在PD过程中发挥主要作用的细胞,但腹膜长期与非生理的高糖透析液接触,高糖环境损害了PMCs,引起腹膜结构及功能的异常,并出现炎性细胞的大量增殖,最终通过一系列病理生理改变致使发生腹膜纤维化(Peritoeneal Fibrosis,PF),引起滤过功能持续下降直至衰竭,这也成为腹膜透析的患者退出腹透的主要原因,大大降低终末期肾脏病患者的生存质量。sonic hedgehog(Shh)信号转导通路是一组在正常生长发育过程中广泛表达、用来调节细胞生长的基因,生理状态下管控器官的起源与发育,主要通过级联反应调控下游核转录因子Gli1、Gli2、Gli3基因的表达,其中Gli1位于hedgehog信号通路最末端,只有转录激活的功能,所以认为Gli1的表达水平直接反映了hedgehog信号通路的活性状态。在正常发育过程中,Shh信号通路处于一种低活性的状态,但某些病理因素刺激后可出现再活化。现有的研究多集中在Shh通路在肝肺及肾脏等脏器纤维化中的作用,有关Shh通路在腹膜上的表达鲜有报道。本例研究旨在通过建立大鼠模型,探究Shh信号通路在PMCs的上皮-间质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)中的潜在作用,并探讨阻断Shh信号转导通路的激活,能否避免腹膜的损伤,从而提高长期腹膜透析的疗效,为临床上减少EMT及防治腹膜纤维化提出新思路。研究方法1.利用胰酶消化法原代培养大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCs),并应用免疫组织化学技术方法鉴定培养出的RPMCs。2.应用免疫印迹试验(Western blot)以及逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerase chain reaction,RT-PCR)测定培养细胞中Shh、GLi1的蛋白质及mRNA的表达,观察高糖环境刺激对RPMCs中Shh及GLi1表达的影响。3.应用不同剂量的Shh信号通路拮抗剂-环杷明(cyclopamine,CPN)干预后,通过Western blot法和RT-PCR法检测RPMCs中的Shh、GLi1以及纤维化相关标志物α-SMA等的表达情况,观察阻断Shh信号通路的表达给高糖诱导的大鼠腹膜间皮细胞纤维化带来的影响。实验结果***的培养及鉴定倒置光镜下可见培养出的细胞融合后是一种不规则的多边形,类似于鹅卵石的形状,免疫组化后可表达细胞角蛋白及波状蛋白,不能表达第Ⅷ因子相关抗原及白细胞CD45抗原,与文献记载PMCs表型一致,鉴定为RPMCs。2.高浓度的葡萄糖作用下,Shh和GLi1在RPMCs中的表达以时间及剂量依赖方式显著增加应用浓度为2.5%的葡萄糖培养液分别刺激RPMCs不同时间后,应用RT-PCR和Western blot法检测Shh、Gli1的mRNA及蛋白质的表达,发现与对照组相比,高糖组的表达呈现出明显的随时间增加而增长的趋势,时间越久,增长幅度越明显(P信号通路,同时伴有PMCs纤维化因子的表达下降。用不同浓度的CPN(2.5uM,5uM)分别预处理RPMCs,然后均用2.5%葡萄糖孵育24小时,之后通过RT-PCR和Western blot法研究发现,CPN不能抑制Shh的mRNA和蛋白质表达,但Gli1的mRNA和蛋白质表达较高糖组却有明显下降,这说明CPN有效地阻断了Shh的信号转导(P信号通路后,与单纯高糖组比较,RPMCs中相关纤维化因子α-SMA等的表达下降,E-cadherin的表达增加,并且这一作用呈现出剂量依赖的趋势。结论1.高糖以剂量和时间依赖的方式诱导大鼠腹膜间皮细胞Shh信号通路的活化;***信号通路的抑制剂环杷明可抑制高糖诱导的大鼠Shh信号通路的活化。3.环杷明以剂量依赖的方式使α-

关键词：高糖 sonic hedgehog信号通路腹膜间皮细胞上皮-间质转分化环杷明

sonic hedgehog信号通路在人肝细胞肝癌中的表达及意义

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Sonic Hedgehog信号通路在人肝细胞肝癌中的表达及意义

作者：罗小军重庆医科大学

学位级别：硕士

目的:原发性肝细胞肝癌(primary human hepatocellular,HCC)是世界上常见的消化系统恶性肿瘤之一,已成为严重危害人类健康的主要疾病,其发病率在我国有明显增加趋势。迄今为止HCC的发病机制尚未完全清楚。相关文献发现,sonic hedgehog(S... 详细信息

目的:原发性肝细胞肝癌(primary human hepatocellular,HCC)是世界上常见的消化系统恶性肿瘤之一,已成为严重危害人类健康的主要疾病,其发病率在我国有明显增加趋势。迄今为止HCC的发病机制尚未完全清楚。相关文献发现,sonic hedgehog(SHH)信号通路参与多种肿瘤的发生、发展,本研究采用免疫组化和RT-PCR方法检测SHH信号通路分子Shh、Smo和Gli2在HCC组织和细胞系HepG2、Huh7中的表达,并探讨其临床意义。方法:1.采用免疫组化方法检测30例HCC组织及10例正常肝组织中SHH信号通路分子Shh、Smo和Gli2蛋白的表达。2.分析SHH信号通路分子Shh、Smo和Gli2蛋白的表达与HCC临床病理特征包括肿瘤直径、门静脉侵犯、病理分级、合并肝硬化、AFP值大小、HBV感染的关系。3.采用RT-PCR方法检测10例HCC组织及相应癌旁组织和细胞系HepG2、Huh7中SHH信号通路分子Shh、Smo和Gli2 mRNA的表达。4.分析SHH信号通路分子Shh、Smo和Gli2 mRNA在HCC组织及相应癌旁组织和细胞系HepG2、Huh7中的表达情况。结果:1.免疫组化结果显示Shh、Smo和Gli2蛋白在30例HCC组织中阳性率分别为63.3%(19/30)、76.7%(23/30)、66.7%(20/30);Shh、Smo和Gli2蛋白在正常肝组织中无表达。***蛋白的表达与HCC肿瘤大小相关,差异有统计学意义(P0.05)。结论:SHH信号通路的HH信号肽Shh,膜蛋白受体Smo,核转录因子Gli2在HCC组织和细胞系中都高度表达,表明SHH信号通路可能参与肝癌的发生发展,为肝癌的防治研究提供了新的实验依据。

关键词： sonic hedgehog信号通路肝癌癌

sonic hedgehog信号通路在脂多糖所致小鼠急性肺损伤中的表达变化及意义

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Sonic hedgehog信号通路在脂多糖所致小鼠急性肺损伤中的表达变化...

作者：靳雨婷山东大学

学位级别：硕士

目的：探讨sonic hedgehog (SHH)信号通路中的相关分子SHH、PTC、GLI1在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)所致的小鼠急性肺损伤(acute lung jinjury, ALI)中的表达变化及意义,为临床上急性肺损伤的治疗提供新的思路。方法：选择5-7周龄... 详细信息

目的：探讨sonic hedgehog (SHH)信号通路中的相关分子SHH、PTC、GLI1在脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)所致的小鼠急性肺损伤(acute lung jinjury, ALI)中的表达变化及意义,为临床上急性肺损伤的治疗提供新的思路。方法：选择5-7周龄、体质量20-25g的雄性BALB/c小鼠作为实验动物,并随机分为对照组(腹腔注射等量生理盐水)、LPS处理组(5mg/kg LPS腹腔注射)、环巴胺处理组(5mg/kg LPS腹腔注射后30min腹腔注射环巴胺50mg/kg)。分别于给药后6h、12h、24h,戊巴比妥钠腹腔注射麻醉后留取标本,肉眼观察肺组织大体改变,4%多聚甲醛固定后切片并HE染色观察肺组织病理学改变,并做出病理损伤评分;取一肺叶60℃48h烘干后,测定肺组织湿干质量比值(wet mass/dry mass, W/D);荧光实时定量PCR检测不同处理组肺组织肿瘤坏死因子-α (turner necrosis factor-alpha, TNF-α)、SHH、PTC及下游转录因子GLI1的mRNA表达;Western blot检测各处理组肺组织核因子-κB (nuclear factor-κB, NF-κB)、SHH和GLIl的蛋白表达情况。结果：对照组肺组织光镜下可见肺泡腔清晰、无明显炎性细胞浸润,病理损伤评分很低;LPS处理组肺组织肺泡充血水肿、肺泡隔明显增厚,肺间质广泛炎性细胞浸润,肺组织病理损伤评分明显高于对照组(P0.05),而在12h、24h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达均明显高于对照组(P0.05),12h时SHH、PTC、GLI1的InRNA表达均较LPS处理组降低(P信号通路处于抑制状态,而LPS处理后12h、24h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达量及6h、12h、24h时SHH、GLI1的蛋白表达量均明显高于对照组,提示在LPS所致的急性肺损伤中存在SHH信号通路的激活,表达量明显增加。2.给予SHH信号通路的抑制剂环巴胺干预后,12h、24h时SHH、PTC、GLI1的mRNA表达量及SHH、GLI1的蛋白表达量均较单独LPS处理组下降,提示SHH信号通路的表达受到抑制,而此时,环巴胺处理组的肺组织病理损伤评分、W/D、TNF-α mRNA和NF-κB蛋白的表达却较单独LPS处理SHH信号通路激活时更高,即SHH信号通路受抑制时的肺组织损伤程度较SHH信号通路激活时重,说明SHH信号通路受抑制可加重肺组织的损伤程度,提示SHH信号通路的激活可减轻肺组织损伤、参与肺组织损伤后修复过程。

关键词： sonic hedgehog信号通路急性肺损伤脂多糖环巴胺

sonic hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞增殖的影响

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中国临床新医学 2021年第5期14卷 464-468页

作者：张敏鸿曾勇卢洪飞赣南医学院第一附属医院临床医学研究中心江西341000 赣南医学院第一附属医院小儿外科江西341000 赣南医学院第一附属医院检验科江西341000

目的探讨sonic hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA细胞)增殖的影响。方法常规培养EOMA细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测sonic hedgehog信号通路抑制剂GANT61对EOMA细胞增殖的影响。采用EdU染色流式细胞术检测GANT61及sonic Hedg... 详细信息

目的探讨sonic hedgehog信号通路对小鼠血管瘤内皮细胞(EOMA细胞)增殖的影响。方法常规培养EOMA细胞,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测sonic hedgehog信号通路抑制剂GANT61对EOMA细胞增殖的影响。采用EdU染色流式细胞术检测GANT61及sonic hedgehog信号通路激动剂SAG对EOMA细胞增殖的影响。采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)检测GANT61及SAG对EOMA细胞增殖细胞核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)基因mRNA表达的影响。结果GANT61作用EOMA细胞后,细胞增殖受到抑制,且呈剂量及时间依赖性,24 h半数抑制浓度(IC50)为79.42μmol/L。EdU染色流式细胞术检测结果显示,GANT61干预可抑制EOMA细胞增殖,而SAG干预可促进EOMA细胞增殖。RT-qPCR检测结果显示,GANT61干预可抑制PCNA及Cyclin D1 mRNA表达,而SAG干预可促进PCNA及Cyclin D1 mRNA表达。结论sonic hedgehog信号通路可调控EOMA细胞增殖,其可能参与血管瘤的发生发展。

关键词： sonic hedgehog信号通路血管瘤 GANT61 SAG 增殖

sonic hedgehog信号通路及其在脊髓损伤后表达的研究进展

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江西中医药 2020年第10期51卷 74-77页

作者：颜浪辉鄢来军唐焕章福建中医药大学福州350122 联勤保障部队第九〇〇医院福州350025

脊髓损伤是一种临床上常见的创伤性疾病,致伤致残率高,发病率也逐年上升,给患者家庭和社会造成越来越重的负担。近些年来,sonic hedgehog信号通路被大量研究,发现其在脊髓损伤中发挥着重要的作用。研究sonic hedgehog信号通路将有助于... 详细信息

脊髓损伤是一种临床上常见的创伤性疾病,致伤致残率高,发病率也逐年上升,给患者家庭和社会造成越来越重的负担。近些年来,sonic hedgehog信号通路被大量研究,发现其在脊髓损伤中发挥着重要的作用。研究sonic hedgehog信号通路将有助于了解脊髓损伤的病理过程,同时也将为脊髓损伤提供一条新的治疗途径。本文主要从sonic hedgehog信号通路及其在脊髓损伤后表达进行了综述。

关键词： sonic hedgehog信号通路脊髓损伤研究进展

健脾清化舒络中药对慢性萎缩性胃炎大鼠sonic hedgehog信号通路的影响

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北京中医药大学学报 2021年第2期44卷 143-151页

作者：李思汉林秀明田琳李明珠黄铭涵广州中医药大学基础医学院广东510006 福建中医药大学附属第二人民医院

目的探讨健脾清化舒络中药对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠sonic hedgehog信号通路的影响。方法雄性Wistar大鼠59只,随机分为空白对照组16只、造模组43只,采用复合造模法进行病证结合CAG模型构建,期间随机抽取造模组大鼠3只验证CAG造模是否... 详细信息

目的探讨健脾清化舒络中药对慢性萎缩性胃炎(CAG)大鼠sonic hedgehog信号通路的影响。方法雄性Wistar大鼠59只,随机分为空白对照组16只、造模组43只,采用复合造模法进行病证结合CAG模型构建,期间随机抽取造模组大鼠3只验证CAG造模是否成功。造模成功后,予健脾清化舒络中药(复方胃炎合剂)进行相关干预。具体干预方案为:将空白对照组随机分为空白组、健脾清化舒络中药高剂量[61.04 g/(kg·d)]空白组,造模组随机分为CAG模型组、维酶素[0.2 g/(kg·d)]组和健脾清化舒络中药低、中、高剂量[15.26、30.52、61.04 g/(kg·d)]组,每组8只,给予相应药物连续干预4周。检测大鼠胃组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、Gli2、Gli3、Sufu蛋白表达水平及血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、胃泌素(GAS)含量。结果与空白组比较,模型组大鼠Shh、Ptch1、Smo、Gli1蛋白表达及血清GAS水平降低,Gli2、Gli3、Sufu蛋白表达及血清IL-1β水平上升,差异均有统计学意义(Psonic hedgehog信号通路的表达有关。

关键词：慢性萎缩性胃炎健脾清化舒络中药 sonic hedgehog信号通路大鼠

sonic hedgehog信号通路在口腔鳞癌干细胞中调控作用

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Sonic Hedgehog信号通路在口腔鳞癌干细胞中调控作用

益气活血方对胃癌前病变大鼠胃黏膜sonic hedgehog信号通路的影响

第十二次全国医学遗传学学术会议

作者：严明王丽君陈万涛张萍上海交通大学医学院附属第九人民医院上海市口腔医学研究所/上海市口腔医学重点实验室

目的富集口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)干细胞,进一步探讨sonic hedgehog信号通路在口腔鳞癌干细胞中的作用及临床意义。材料与方法应用口腔鳞癌细胞CAL27,HN6,HN12,HN13为研究对象,通过微球体培养法富集口腔鳞癌... 详细信息

目的富集口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)干细胞,进一步探讨sonic hedgehog信号通路在口腔鳞癌干细胞中的作用及临床意义。材料与方法应用口腔鳞癌细胞CAL27,HN6,HN12,HN13为研究对象,通过微球体培养法富集口腔鳞癌干细胞,激光共聚焦法检测微球体干细胞相关标志物(ABCG2,Nestin,CD29,EpCAM,CD140)表达,裸鼠皮下成瘤实验检测口腔鳞癌细胞微球体的成瘤性。通过激光共聚焦检测sonichedgehog信号通路中Shh,Gli2的表达。运用136例口腔鳞癌标本通过免疫组化法分析Gli2的表达。通过通路抑制剂cyclopamine和GANT61抑制口腔鳞癌细胞Sonci hedgehog信号通路活性,运用Western blot、生长曲线、划痕试验等方法检测sonic hedgehog通路抑制后对细胞生长、增殖、凋亡及侵袭的影响。结果:口腔鳞癌微球体高表达ABCG2,Nestin,CD29,EpCAM,CD140等干细胞相关标志物,并具有高效的裸鼠成瘤能力,因此通过微球体培养可富集口腔鳞癌干细胞。口腔鳞癌微球体中sonic hedgehog通路中Gli2及Shh蛋白高表达,提示sonic hedgehog通路在口腔鳞癌干细胞中处于激活状态。免疫组化结果显示,Gli2在60例(44%)的口腔鳞癌标本中高表达,并与预后明显相关。sonic hedgehog通路抑制后,能明显抑制口腔鳞癌细胞生长、增殖及侵袭。结论sonic Hedge通路在维持口腔鳞癌干细胞状态中发挥重要作用,并与口腔鳞癌患者预后明显相关,可能是潜在的治疗靶点。

关键词：口腔癌癌干细胞 sonic hedgehog信号通路

来源： cnki会议评论

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中华中医药杂志 2021年第1期36卷 446-451页

作者：钱素婷俞建顺蔡丹莉何蓓晖严茂祥陈芝芸邱静刘庆生浙江中医药大学附属广兴医院杭州310007 杭州市丁桥医院杭州310021 浙江省中医院杭州310006 浙江中医药大学杭州310053 杭州市中医院杭州310007

目的:研究益气活血方对1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)诱导的新生大鼠胃癌前病变胃黏膜组织sonic hedgehog(Shh)信号通路的影响。方法:48只雄性乳鼠随机分为正常组8只,造模组40只。造模组灌服800mg/L的MNNG 0.1mL/只,正常组灌服等量0.9... 详细信息

目的:研究益气活血方对1-甲基-3-硝基-1-亚硝基胍(MNNG)诱导的新生大鼠胃癌前病变胃黏膜组织sonic hedgehog(Shh)信号通路的影响。方法:48只雄性乳鼠随机分为正常组8只,造模组40只。造模组灌服800mg/L的MNNG 0.1mL/只,正常组灌服等量0.9%氯化钠溶液,共10d。23周后将造模组随机均分为模型组,中药高、中、低剂量组,环耙明组。正常组、模型组灌服0.9%氯化钠溶液10mL/kg,中药高、中、低剂量组分别灌服38.4、19.2、9.6g/kg的益气活血方流浸膏,环耙明组腹腔注射0.2mg/kg环靶明,均每日1次,12周后HE染色观察胃黏膜组织病理学变化,免疫组化检测胃黏膜PCNA的表达,qRT-PCR法检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc mRNA的表达,Western Blot检测胃黏膜组织Shh、Ptch1、Smo、Gli1、SuFu、CyclinD1、CyclinE1、C-Myc、p-c-Myc蛋白表达。结果:与模型组比较,益气活血方高、中、低剂量组和环耙明组大鼠胃黏膜炎症及异型增生程度均显著减轻,PCNA表达水平显著降低(P信号通路的表达起到对胃癌前病变的防治作用。

关键词：胃癌前病变益气活血方 sonic hedgehog信号通路