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Livin靶向si-rna对胶质瘤TJ905干细胞及肿瘤坏死因子α的影响

临床荟萃 2015年第3期30卷 312-315页

作者：刘阳郭强张浩李根华冯嵩靳峰天津医科大学研究生院天津300070 济宁医学院附属医院神经外科山东济宁272029

目的从人脑胶质瘤TJ905细胞中分离肿瘤干细胞,制作livin基因干扰模型si-rna livin,探讨livin靶向si-rna对TJ905干细胞增殖及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法 TJ905细胞经免疫磁珠法分离获取肿瘤干细胞,构建干扰livin基因si-rna... 详细信息

目的从人脑胶质瘤TJ905细胞中分离肿瘤干细胞,制作livin基因干扰模型si-rna livin,探讨livin靶向si-rna对TJ905干细胞增殖及肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响。方法 TJ905细胞经免疫磁珠法分离获取肿瘤干细胞,构建干扰livin基因si-rna,通过慢病毒转染干细胞建立干扰组,另设对照组转染空病毒,利用替莫唑胺(TMZ)干预,观察肿瘤干细胞的形态学改变,Cell Counting Kit-8(CCK8)法检测细胞增殖,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测livin、TNF-α的表达。结果成功制作慢病毒转染TJ905干细胞livin靶向si-rna模型。干扰组TJ905干细胞增殖活性及livin的表达较对照组显著降低(Psi-rna可能通过上调TNF-α基因的表达,并促使化疗药物TMZ对干细胞TNF-α的表达产生诱导作用,最终降低了干细胞的化疗耐药。

关键词：神经胶质瘤肿瘤干细胞肿瘤坏死因子α Livin si-rna

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基于TGF-β1/Smads信号通路探讨新风胶囊调控类风湿关节炎巨噬细胞极化的作用机制

基于TGF-β1/Smads信号通路探讨新风胶囊调控类风湿关节炎巨噬细...

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作者：费陈晨安徽中医药大学

学位级别：硕士

1目的基于临床研究与体外实验探讨新风胶囊(Xinfeng capsule,XFC)对TGF-β1/Smads信号通路及类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)巨噬细胞极化的作用及机制。2方法2.1临床方法将研究对象分为3组,即正常组、来氟米特(leflunomide,LEF... 详细信息

1目的基于临床研究与体外实验探讨新风胶囊(Xinfeng capsule,XFC)对TGF-β1/Smads信号通路及类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis,RA)巨噬细胞极化的作用及机制。2方法2.1临床方法将研究对象分为3组,即正常组、来氟米特(leflunomide,LEF)组和XFC组。治疗4周后,观察类风湿因子(Rheumatoid factor,RF)、抗环瓜氨酸抗体(anti-cyclic citrullinated peptide antibodies,CCP-Ab)、血沉(ESR)、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、免疫球蛋白G(Immunoglobulin G,Ig G)、免疫球蛋白M(Immunoglobulin M,Ig M),记录关节压痛和肿胀数目,计算视觉模拟评分法(visual analogue scale,VAS)、疾病活动度评分(Disease Activity Score in 28 jionts,DAS28)及中医证候评分。收集患者全血利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time fluorescence quantitative PCR,RT-q PCR)检测微小rna145-5p(Micro rna-145-5p,mi R145-5p)、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)、Smad3及Smad7的信使rna(messenger rna,m rna)的转录水平,蛋白免疫印迹法(Western blot,WB)检测TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表达;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定白细胞介素-10(Interleukin-10,IL-10)、白细胞介素-23(Interleukin-23,IL-23)的浓度。2.2实验方法将RA滑膜成纤维细胞(fibroblast-like synoviocytes,FLS)与巨噬细胞共培养,分别进行Smad3特异性小干扰rna(small interfering rna,si rna)转染及XFC干预治疗,利用RT-q PCR和WB检测巨噬细胞相关m rna的转录及蛋白的表达;ELISA测定巨噬细胞炎性细胞因子浓度;具体检测指标同临床实验。CCK-8法检测RA-FLS增殖情况;Transwell小室测定RA-FLS的迁移。3结果3.1临床结果3.1.1 XFC对RA患者关节疼痛、肿胀、VAS、DAS28评分及中医证候积分的影响RA患者的关节压痛数、肿胀数、VAS、DAS28评分和中医证候积分均显著高于正常人群(P0.05)。经治疗后LEF组患者Ig M水平显著下降(P0.05)。3.1.3 XFC对RA患者ESR、CRP的影响RA患者ESR和CRP水平均显著高于正常人群(P0.05)。3.1.4 XFC对RA患者细胞上清液中IL-23和IL-10的影响RA患者IL-23水平均显著高于正常,IL-10水平均显著低于正常(P0.05)。3.1.5 XFC对RA患者TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达的影响RA患者TGF-β1和Smad3蛋白的表达水平均显著高于正常人群,Smad7表达水平均显著低于正常人群(Prna转录的影响RA患者TGF-β1和Smad3 m rna的转录水平均显著高于正常人群,Smad7m rna转录

关键词：类风湿关节炎巨噬细胞极化 TGF-β1/Smads si-rna 新风胶囊

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sirna干扰MAS基因对小鼠MS-1细胞功能及增殖的影响

SiRNA干扰MAS基因对小鼠MS-1细胞功能及增殖的影响

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作者：李小雅华中科技大学

学位级别：硕士

【目的】胰岛微循环中胰岛内皮细胞与β细胞相互毗邻，相互依存。内皮细胞不但参与构成胰岛微循环，为β细胞的生存提供物质基础，而且还能分泌多种细胞因子，影响β细胞的功能和状态。新近发现的ACE2-Ang1-7–Mas通路能拮抗经典RAS途... 详细信息

【目的】胰岛微循环中胰岛内皮细胞与β细胞相互毗邻，相互依存。内皮细胞不但参与构成胰岛微循环，为β细胞的生存提供物质基础，而且还能分泌多种细胞因子，影响β细胞的功能和状态。新近发现的ACE2-Ang1-7–Mas通路能拮抗经典RAS途径ACE-AngⅡ-AT1R通路的作用，发挥血管舒张，抗氧化应激及改善内皮功能等作用。在胰腺的内分泌组织中已发现完整的局部RAS系统。MAS受体是Ang1-7的内源性受体，其主要分布于胰岛内皮细胞。为了进一步研究胰岛内ACE2-Ang1-7–Mas路径的功能及其对内皮细胞功能的作用，本研究采用sirna干扰技术沉默胰岛微循环内皮MS-1细胞的MAS基因，以观察探究其对MS-1细胞的功能及增殖的影响。【方法】化学合成针对MAS基因的3对sirna，用脂质体LipofectaminTM2000将其转染至小鼠胰岛微循环内皮细胞MS-1细胞中。应用FCM检测FAM sirna转染MS-1细胞后转染效率，实时荧光定量PCR检测MAS sirna转染后的抑制效率，以及反映内皮功能e NOS，ICAM-1，VCAM-1的mrna的表达。蛋白质印迹法检测eNOS的蛋白表达，cck8（cell counting kit-8）法检测转染后细胞增殖情况，FCM检测转染后细胞增殖指数PI的变化。【结果】 FCM检测FAM sirna转染MS-1细胞后转染效率79.41%。与空白对照组相比，MAS sirna转染MS-1细胞后，其MAS抑制效率为78%，差异有统计学意义（P＜0.05）。与未转染组相比，eNOS mrna的表达下降了18.36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。eNOS的蛋白水平未见显著改变。ICAM-1,VCAM-1的表达与未转染组相比，其mrna的表达有上升的趋势，但是无统计学差异。PI检测显示MAS sirna转染MS-1细胞后，细胞PI明显增加（P＜0.05）。CCK-8检测转染后细胞增殖活性，与对照组相比，MS-1细胞增殖活性增加（P＜0.05）。【结论】MAS受体沉默后，内皮细胞增殖异常加速，内皮细胞功能下降。

关键词：小鼠胰腺内皮细胞(MS-1) rna干扰 MAS si-rna 内皮功能细胞增殖

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低氧介导下HIF-1对-catenin表达的影响及在子宫内膜异位症发病机制中的作用

低氧介导下HIF-1对-catenin表达的影响及在子宫内膜异位症发病机...

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作者：杜正娟华中科技大学

学位级别：硕士

目的：探讨低氧介导下HIF-1是否通过对-catenin表达的影响参与子宫内膜异位症的发病机制。方法：第一部分，用transwell技术检测1%O2低氧及21%常氧环境中T HESCs的侵袭能力变化;第二部分，经由不同时间低氧及常氧培养T HESCs后，通过Re... 详细信息

目的：探讨低氧介导下HIF-1是否通过对-catenin表达的影响参与子宫内膜异位症的发病机制。方法：第一部分，用transwell技术检测1%O2低氧及21%常氧环境中T HESCs的侵袭能力变化;第二部分，经由不同时间低氧及常氧培养T HESCs后，通过Real time PCR和western blot技术检测其HIF-1α和β-catenin mrna和蛋白质的表达;第三部分，低氧与雌激素（17β-E2）同时刺激后T HESCs，western blot技术检测其表达HIF-1α和β-catenin的变化;第四部分，脂质体liopfectamine2000转染HIF-1α质粒使其过表达和同法转染HIF-1α-sirna靶向阻断HIF-1α表达后，T HESCs中HIF-1α和β-catenin的表达变化，并用免疫共沉淀（Co-IP）技术检测低氧及低氧和雌激素共同作用下HIF-1α和β-catenin的相互作用及表达变化。结果：一，低氧培养的T HESCs侵袭性较常氧组明显增加;二，不同时间低氧处理后HIF-1α和β-catenin mrna的表达均随时间的延长而降低，其中以1h表达量最高;低氧处理T HESCs HIF-1α蛋白表达量增加，其中以4h表达量最多;相同时间点的β-catenin蛋白表达量也相应增加;三，低氧和雌激素同时刺激T HESCs4h，HIF-1α和β-catenin蛋白表达显著增加;四，HIF-1α si-rna靶向沉默组与常氧组比较，HIF-1α蛋白表达无统计学差异，但β-catenin蛋白表达量低于转染组和低氧组，高于常氧组，推测HIF-1α沉默后对β-catenin有部分阻断作用。结论：HIF-1α可能通过部分影响β-catenin的表达而参与EMs的发病过程。

关键词：子宫内膜异位症 β-catenin HIF-1α 17β-雌二醇(17β-E2) 侵袭试验质粒转染 si-rna

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THBS1在乳腺癌细胞中的表达及对生物学行为的影响

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医学研究杂志 2022年第4期51卷 76-80,89页

作者：马若男包楠丁刘霞陈永霞云芬施琳贾永峰内蒙古医科大学基础医学院呼和浩特010030 内蒙古医科大学附属人民医院呼和浩特010030 内蒙古医科大学病理学教研室呼和浩特010030

目的探讨THBS1基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法生物信息学分析THBS1在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异。利用si-rna沉默人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中THBS1基因,检测细胞的增殖、侵袭能力和凋亡率变化。结果THBS1在乳腺癌... 详细信息

目的探讨THBS1基因对乳腺癌细胞生物学行为的影响。方法生物信息学分析THBS1在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达差异。利用si-rna沉默人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中THBS1基因,检测细胞的增殖、侵袭能力和凋亡率变化。结果THBS1在乳腺癌组织中表达量高于癌旁组织(Psi-NC组比较,MDA-MB-231细胞和MCF-7细胞si-THBS1组的沉默效率分别为62.9%±2.9%和94.98%±0.37%(P0.05);MDA-MB-231细胞si-THBS1组细胞侵袭数为95.8±11.5个/HP,MCF-7细胞为13.7±5.0个/HP,均小于si-NC组(Psi-THBS1组细胞凋亡率为4.68%±0.83%,MCF-7细胞为4.91%±0.82%,均小于si-NC组(P<0.05)。结论THBS1在乳腺癌组织中高表达。THBS1基因可能促进MCF-7细胞增殖,促进两种乳腺癌细胞侵袭,并抑制凋亡。

关键词：乳腺癌细胞 THBS1基因 si-rna

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