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作者：赵晓彪第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景:近年来,由于生活方式的改变和生存环境的恶化,我国各种肝脏疾病发病率呈上升趋势。目前,多种良恶性肝脏疾病的治疗方法最有效的仍然是肝部分切除术,但是切除过大有可能出现肝功能衰竭,切除过小则会引起肿瘤复发或者不能完全根... 详细信息

研究背景:近年来,由于生活方式的改变和生存环境的恶化,我国各种肝脏疾病发病率呈上升趋势。目前,多种良恶性肝脏疾病的治疗方法最有效的仍然是肝部分切除术,但是切除过大有可能出现肝功能衰竭,切除过小则会引起肿瘤复发或者不能完全根治肝脏疾病。然而,肝脏与其它脏器不同的是,它具有一定的再生能力。所以,用什么方法可以加快肝细胞增殖的速率成为近年来肝胆科的研究重点。但是,目前研究最多的是怎样利用药物保护肝功能,避免肝衰竭,而对其再生机制的研究甚少。如果能够阐明肝再生的机制,则可以控制其中抑制增殖的环节,从而加快肝再生速率,使肝衰竭的患者迅速恢复肝功能。但是,肝部分切除术后肝脏再生的机制非常复杂,不是单个肝脏实质器官的再生,而是由于肝切除术后引起的全身各个系统的应激反应,包括各种细胞因子,免疫因子,炎症因子,以及体内多种离子,多个脏器的共同参与。这是研究肝再生机制的难点。Tmub1是近年来在研究肝细胞增殖的过程中发现的一种含有泛素样结构域的核-胞浆穿梭蛋白,在正常肝脏的肝细胞内主要位于细胞浆中,它包含有1个类似泛素结构的区域,在增殖周期中,它可以穿梭于细胞浆和细胞核之间,Tmub1蛋白在肝细胞增殖期逐渐向细胞核内穿梭,在增殖后期,则几乎全部穿梭进入细胞核[1-5]。细胞增殖期,细胞核内的主要活动是DNA的复制和姐妹染色体的分离,所以Tmub1蛋白应该在细胞核内参与了细胞增殖的过程,但是具体的机制目前尚不清楚。securin即分离酶抑制蛋白,是参与细胞周期调控的重要物质,质量约22KD,由202个氨基酸残基组成,在多种肿瘤中高表达[6,7]。在正常的增殖细胞核内,粘着蛋白复合体使两条姐妹染色单体相连,活化的分离酶将粘着蛋白复合体分解后,姐妹染色单体分离[7]。securin通过抑制分离酶的活化,从而抑制染色体过早分离,在有丝分裂后期,securin蛋白N末端的毁坏盒与后期促进复合物连接,并在多种酶类参与下被泛素化降解,从而使分离酶活化。securin参与了有丝分裂,凋亡,细胞周期的进程以及DNA的修复等关键的细胞活动[7]。我们从结构上分析,tmub1蛋白内有泛素样结构域,而securin蛋白可以与泛素结合,也就是说securin蛋白有泛素结合域,所以tmub1蛋白可与securin蛋白结合。tmub1蛋白在g1期几乎完全表达于细胞质内,而当细胞进入g2期则大量穿梭进入细胞核,而此时正是增殖细胞的有丝分裂准备期[3-5]。因此,tmub1蛋白与securin蛋白同时具有结构以及空间的的可结合性。所以,如果能够证明肝部分切除术后肝细胞增殖的过程中tmub1蛋白能够与securin结合,并且能够影响肝细胞的增殖进程,将对我们今后预防和治疗肝切除术后肝功能衰竭具有重要的意义,并且对其它器官及细胞的增殖研究也有重要的借鉴作用。研究目的:1.证实肝部分切除术后tmub1蛋白能够与securin蛋白结合。2.明确tmub1蛋白在肝细胞增殖中的作用。材料方法:1.(1)建立大鼠70%的肝切除模型,动物实验采用40只大鼠随机分为5组,每组8只,第一组行肝切除术后直接灌注肝脏并取原代肝细胞,其余4组首先行肝部分切除术,分别于术后12,24,48,72h灌注肝脏并取原代肝细胞。(2)提取原代肝细胞tmub1蛋白和securin蛋白。(3)其中一部分首先进行免疫共沉淀实验,然后进行western-blot实验了解tmub1蛋白与securin蛋白的结合及其随肝切除术后时间的变化趋势;另外一部分直接进行western-blot实验,了解细胞内tmub1的变化趋势。2.(1)构建过表达tmub1慢病毒载体及阴性空载体对照。(2)构建沉默tmub1慢病毒载体及阴性空载体对照。3.(1)分别使用沉默tmub1慢病毒载体、过表达慢病毒载体及对应的空载体转染大鼠brl-3a肝细胞系,得到稳定转染的细胞。(2)转染后行流式细胞术及mtt检测细胞周期,各组间细胞周期进行对比,了解tmub1蛋白对肝细胞增殖的作用。结果:1.建立了的稳定的大鼠70%肝切除模型。2.通过co-ip技术证实tmub1蛋白和securin间相互结合。免疫共沉淀后进行western-blot得到蛋白条带显示tmub1蛋白与securin蛋白在肝切除术后相互结合。从条带的结果看,在肝切除术后0h条带灰度值较低,随着切除术后时间增加逐渐增强,到48h最高,72h再次下降。3.术后Tmub1蛋白western-blot检测发现肝切除术后各时相点Tmub1蛋白含量未发生明显改变。直接Tmub1蛋白western-blot实验发现术后各时相点条带亮度基本相同,IMAGE J图像分析软件分析各组每个灰度值,并进行统计学分析,术后各时相点Tmub1蛋白含量无显著差异(p>0.05)。4.成功构建了过表达Tmub1慢病毒载体

关键词： Tmub1 securin 肝部分切除术肝细胞增殖 BRL-3A细胞慢病毒

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Tmub1对大鼠肝再生过程中肝细胞增殖及securin泛素化的影响

Tmub1对大鼠肝再生过程中肝细胞增殖及securin泛素化的影响

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作者：付航玮第三军医大学

学位级别：硕士

一、研究背景肝功能衰竭是各种肝脏疾病的终末期状态,死亡率极高,是目前肝脏疾病治疗的难点。近年来人工肝、组织工程等技术有了较大的突破,但这些技术仍有较大的局限性,生物人工肝的临床疗效有限,而组织工程技术又短时难以应用于临床... 详细信息

一、研究背景肝功能衰竭是各种肝脏疾病的终末期状态,死亡率极高,是目前肝脏疾病治疗的难点。近年来人工肝、组织工程等技术有了较大的突破,但这些技术仍有较大的局限性,生物人工肝的临床疗效有限,而组织工程技术又短时难以应用于临床。目前肝脏移植是治疗肝衰竭的唯一有效手段,但由于存在供体短缺、价格昂贵、免疫排斥等不足,难以广泛开展。由于肝脏具有极强再生能力,在受到各种理化损伤后能通过自身的再生修复受损的肝脏组织和细胞,因此有效刺激肝脏自身的合理再生被认为是治疗肝脏功能衰竭的理想手段。对于肝脏外科而言,肝切除术(partial hepatectomy,PH)被广泛应用于各种肝脏外科良恶性疾病的治疗[1],而过多地切除肝脏组织也易导致术后肝功能衰竭。在肝切除术后,成熟肝细胞可以在一系列精密调控的情况下[2],通过增生和增殖进行肝再生[3]。如果能够增强肝脏本身的再生能力,并给予适当的约束和调控,将对肝功能衰竭的防治提供巨大的帮助,为肝脏外科医生开展更大范围的肝切除提供有力的支持。因此,研究肝切除术后的肝脏再生调控网络对于理解肝再生过程、防治肝衰竭具有非常重要的意义[4]。Tmub1(transmembrane and ubiquitin like domain containing 1)是一个包含泛素样结构域和跨膜结构域的核质穿梭蛋白。研究发现,在肝再生过程中,Tmub1迅速出核并高表达,发挥负向调控肝细胞增殖的作用[5],但目前对于Tmub1负向调控肝再生的机制仍缺乏了解。课题组通过前期研究发现,securin可能是Tmub1的下游靶蛋白之一[6]。securin即分离酶抑制蛋白,在细胞周期调节中发挥了重要的作用。在有丝分裂结束之前securin必须经过泛素化-蛋白酶体途径降解,才能使细胞顺利完成姐妹染色单体的分离[7]。有研究表明,在内质网相关的蛋白降解通路(endoplasmic reticulum associated degradation,ERAD)中,Tmub1可以与gp78和SPFH2形成复合体,介导HMG-Co A还原酶的泛素化[8],因此,Tmub1有可能通过参与securin的泛素化降解过程来影响肝细胞的增殖。但是,Tmub1参与泛素化的现象和机制仍报道极少,而且目前人们对泛素样蛋白的功能还没有统一的认识,该类蛋白也可能通过非泛素化途径发挥作用。因此,具体的作用机制需深入研究,Tmub1的泛素样结构域(UBL)是否能直接或间接地参与泛素化调控也需要进一步明确。二、研究目的1.利用大鼠70%肝切除模型,明确Tmub1和securin的m RNA和蛋白水平在肝再生全程中的表达规律及相关性。2.进一步明确Tmub1对大鼠正常肝细胞增殖能力、细胞周期和有丝分裂的影响。3.明确Tmub1对securin泛素化调控过程的影响,并初步探索Tmub1的泛素样结构域(UBL)在securin泛素化过程中的作用。三、材料和方法1.通过构建大鼠70%肝切除再生模型,采用RT-q PCR和Western Blotting技术检测Tmub1和securin在肝再生过程中的表达规律。2.分别构建Tmub1过表达和sh RNA干扰的慢病毒载体,分别感染大鼠正常肝细胞系BRL-3A并建立稳定感染细胞株,通过CCK-8、Ed U、流式细胞术等方法检测Tmub1表达对BRL-3A细胞增殖能力及细胞周期的影响。3.采用细胞周期同步化和免疫荧光技术,观察Tmub1过表达对BRL-3A细胞有丝分裂过程的影响,并使用Western Blotting检测有丝分裂进程中cyclins(细胞周期素蛋白)的表达量。4.使用免疫沉淀、Western Blotting、RT-q PCR检测Tmub1表达对securin的表达及其泛素化水平的影响。5.构建Tmub1的UBL结构域突变体和截断体质粒载体,检测UBL结构域突变或缺失后的Tmub1对securin泛素化水平的影响。6.实验数据均采用SPSS 19.0统计软件进行分析,使用Graph Pad Prism 6.0软件绘制统计图;计量资料结果以均数±标准差表示,采用t检验进行两组间均数比较,单因素方差分析与LSD法进行多组间均数比较。Psecurin的m RNA和蛋白表达趋势不一致,其m RNA水平在手术12h后逐渐增加,在术后48h达到高峰后逐渐降低,而其蛋白水平在术后逐渐降低,术后48h最低,至术后7d恢复较高水平;Tmub1表达水平和securin m RNA水平在时间上呈正向相关,和securin蛋白水平在时间上呈负向相关。2.增强Tmub1表达可使BRL-3A细胞增殖能力降

关键词：肝再生细胞增殖细胞周期泛素化 Tmub1 securin

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securin对神经胶质瘤细胞系U251迁移、侵袭以及上皮-间充质转化的影响

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临床与病理杂志 2023年第5期43卷 849-856页

作者：王薇窦佳李超刘淑娟闫海成内蒙古医科大学附属医院肿瘤内科呼和浩特010010 内蒙古医科大学附属医院神经外科呼和浩特010010

目的:探讨securin对神经胶质瘤迁移、侵袭以及上皮-间充质转化的影响。方法:利用在线基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)2.0和Human Protein Atlas数据库分析securin基因和蛋白在神经胶质瘤中... 详细信息

目的:探讨securin对神经胶质瘤迁移、侵袭以及上皮-间充质转化的影响。方法:利用在线基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)2.0和Human Protein Atlas数据库分析securin基因和蛋白在神经胶质瘤中的表达情况。在胶质瘤U251细胞中转染干扰securin表达的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA;si-securin)序列,蛋白质印迹法和real-time RT-PCR分别检测U251细胞中蛋白和securin信使RNA(messenger RNA,mRNA)表达水平。Transwell实验检测转染si-securin对U251细胞迁移和侵袭影响。Real-time RT-PCR检测转染si-securin对U251细胞中snail、E-cadherin、N-cadherin、vimentin、基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase,MMP)-2、MMP-9 mRNA表达的影响。结果:在线数据库GEPIA分析发现:与正常人对照组(normal组)相比,神经胶质瘤患者中securin蛋白和mRNA的表达水平均显著上调(均Psecurin组U251细胞中securin蛋白和mRNA表达水平均显著下调(均Psecurin组U251细胞迁移和侵袭数均显著减少(均Psecurin组U251细胞中snail、N-cadherin、vimentin、MMP-2、MMP-9蛋白和mRNA相对表达水平均显著降低(均Psecurin表达可抑制神经胶质瘤细胞系U251的迁移、侵袭以及上皮-间充质转化。

关键词：神经胶质瘤 securin 迁移侵袭上皮-间充质转化

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securin的功能及在肿瘤中的研究进展

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国际肿瘤学杂志 2012年第3期39卷 176-179页

作者：郭宏艳金惠琴张云霏张煦甘肃省第二人民医院病理科兰州730000 兰州大学基础医学院病理研究所

securin是垂体肿瘤转化基因编码的具有多种功能的蛋白，在有丝分裂中期向后期的过渡中负责调控姐妹染色单体的分离。securin表达异常在多种内分泌腺体及腺体相关癌症被发现，如脑垂体瘤、甲状腺癌、卵巢癌、结肠癌等。securin在这些癌... 详细信息

securin是垂体肿瘤转化基因编码的具有多种功能的蛋白，在有丝分裂中期向后期的过渡中负责调控姐妹染色单体的分离。securin表达异常在多种内分泌腺体及腺体相关癌症被发现，如脑垂体瘤、甲状腺癌、卵巢癌、结肠癌等。securin在这些癌症中的作用机制与其顺时转化作用及与其他癌症相关蛋白如p21、p53等有关。

关键词：肿瘤 securin

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缺氧诱导因子-2α与securin在乳腺癌组织中的表达及其患者预后的判断价值

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湖南师范大学学报（医学版） 2019年第3期16卷 44-47页

作者：谢贤鑫李欢李伟杰姜大庆中国医科大学肿瘤医院辽宁省肿瘤医院

目的 :观察缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)与securin在乳腺癌组织中的表达情况,研究探讨HIF-2α、securin表达水平与乳腺癌预后间的关系。方法 :选取2011年2月~2014年10月在我院接受手术治疗的乳腺癌患者57例作为主要研究对象,均经组织病理... 详细信息

目的 :观察缺氧诱导因子-2α(HIF-2α)与securin在乳腺癌组织中的表达情况,研究探讨HIF-2α、securin表达水平与乳腺癌预后间的关系。方法 :选取2011年2月~2014年10月在我院接受手术治疗的乳腺癌患者57例作为主要研究对象,均经组织病理确诊。采用免疫组化法检测患者乳腺癌组织中HIF-2α、securin的表达水平,记录所有患者的年龄、肿瘤直径、TNM分级、绝经情况、雌激素受体及孕酮受体等病理资料,分析HIF-2α、securin的表达水平与临床病理因素的关系,Cox模型分析生存曲线分析两者表达水平对乳腺癌生存预后的意义。结果 :乳腺癌组织中HIF-2α阳性率为31.58%,securin的高表达率为35.09;securin的高表达及HIF-2α阳性与年龄、肿瘤直径、TNM分级、绝经情况、淋巴结转移、手术时间、雌激素受体及孕酮受体间均无相关性;Spearman相关性分析结果显示HIF-2α和securin呈正相关;随访至2017年12月31日止,HIF-2α阴、阳性表达组各有2例患者死亡,securin高低表达组也各有2例患者死亡,经过Breslow、Tarone-Ware分析结果显示:HIF-2α阴阳性与乳腺癌患者生存期间差异有统计学意义;Cox模型分析生存曲线分析结果表示:HIF-2α是独立影响乳腺癌患者生存预后的因素。结论 :乳腺癌组织中,HIF-2α与securin的表达密切相关,而HIF-2α则可能可以作为判断乳腺癌患者术后生存情况的有效判断指标。

关键词：乳腺癌缺氧诱导因子-2α securin 预后判断价值

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乳腺癌患者组织securin及Macc1的表达变化及与临床病理的关系研究

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中文科技期刊数据库（文摘版）医药卫生 2024年第11期 0247-0251页

作者：张虹郭宏艳王丽聂登梅邵旭基西北民族大学附属医院甘肃兰州730000 甘肃省第二人民医院甘肃兰州730000

本研究旨在分析乳腺癌患者组织中securin和Macc1的表达水平,并探讨这些表达与临床病理特征之间的关联。方法研究对象为2016年1月至2019年12月期间在甘肃省第二人民医院接受治疗的130位乳腺癌患者。研究中检测了这些患者的肿瘤组织中Sec... 详细信息

本研究旨在分析乳腺癌患者组织中securin和Macc1的表达水平,并探讨这些表达与临床病理特征之间的关联。方法研究对象为2016年1月至2019年12月期间在甘肃省第二人民医院接受治疗的130位乳腺癌患者。研究中检测了这些患者的肿瘤组织中securin和Macc1的表达水平,并根据年龄、肿瘤直径、疾病分期、淋巴结转移状况、组织学分级以及雌孕激素受体的表达情况进行了比较。此外,利用Spearman相关性分析法研究了securin与Macc1在乳腺癌组织中的表达关系。结果在不同年龄、肿瘤直径和雌孕激素受体表达水平的患者中,securin和Macc1的表达差异没有统计学意义(P>0.05)。然而,对于疾病分期较高、存在淋巴结转移以及组织学分级较高的患者,securin和Macc1的高表达率显著高于其他组别,这些差异具有统计学意义(Psecurin的表达与Macc1的表达之间存在正相关关系(相关系数r=0.793,Psecurin和Macc1表达水平异常,并且两者之间存在显著的相关性。此外,这些表达水平在不同疾病分期、淋巴结转移状况和组织学分级的患者中表现出显著差异,说明在乳腺癌的诊断和治疗中,检测securin和Macc1的表达具有较高的临床价值。

关键词：乳腺癌组织 securin Macc1 临床病理

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HIF-2α和securin作为乳腺癌术后无瘤生存率预测指标的临床研究

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肿瘤学杂志 2018年第3期24卷 208-212页

作者：吴秋杜远耀付毅田玲石晨均廖娟重庆医科大学附属永川医院

[目的]探讨缺氧诱导因子-2α（HIF-2α）与securin在乳腺癌组织中的表达及其对无瘤生存率的意义。[方法]采用免疫组化SP法检测70例乳腺癌组织中HIF-2α和securin的表达,并分析其与乳腺癌临床疾病特征的关系及相关性。对患者进行无瘤生... 详细信息

[目的]探讨缺氧诱导因子-2α（HIF-2α）与securin在乳腺癌组织中的表达及其对无瘤生存率的意义。[方法]采用免疫组化SP法检测70例乳腺癌组织中HIF-2α和securin的表达,并分析其与乳腺癌临床疾病特征的关系及相关性。对患者进行无瘤生存期的随访,Kaplan Meier生存曲线分析HIF-2α和securin对无瘤生存期的意义。[结果 ]70例乳腺癌组织中HIF-2α和securin阳性率、高表达率分别为30.0%（21/70）和34.3%（24/70）。Spearman相关分析表明,HIF-2α与securin的表达呈正相关（r=0.381,P=0.001）。securin高表达和HIF-2α阳性与乳腺癌患者绝经情况、雌激素受体、孕酮受体、Her-2、淋巴结转移、ki67、TNM分期和肿瘤大小均无关（P〉0.05）。Kaplan Meier生存曲线表明,HIF-2α阳性患者的无瘤生存期明显高于阴性患者。Cox模型多因素生存分析结果显示,HIF-2α是乳腺癌无瘤生存期的独立影响因素（P〈0.05）。[结论]HIF-2α和securin与乳腺癌的发生、发展密切相关,尤其是HIF-2α可能成为判断乳腺癌术后无瘤生存率的独立有效指标。

关键词：乳腺癌 HIF-2α securin 无瘤生存率

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Comparative analysis of chromosome segregation in human, yeasts and trypanosome

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Frontiers in Biology 2014年第6期9卷 472-480页

作者： Xianxian HAN Ziyin LI Department of Microbiology and Moleeular Genetics University of Texas Medical School Houston TX 77030 USA

Chromosome segregation is a tightly regulated process through which duplicated genetic materials are equally partitioned into daughter cells. During the past decades, tremendous efforts have been made to understand the molecular mechanism of chromosome segregation using animals and yeasts as model systems. Recently, new insights into chromosome segregation have gradually emerged using trypanosome, an early branching parasitic protozoan, as a model organism. To uncover the unique aspects of chromosome segregation in trypanosome, which potentially could serve as new drug targets for anti-trypanosome chemotherapy, it is necessary to perform a comparative analysis of the chromosome segregation machinery between trypanosome and its human host. Here, we briefly review the current knowledge about chromosome segregation in human and Trypanosoma brucei, with a focus on the regulation of cohesin and securin degradation triggered by the activation of the anaphase promoting complex/cyclosome （APC/C）. We also include yeasts in our comparative analysis since some of the original discoveries were made using budding and fission yeasts as the model organisms and, therefore, these could provide hints about the evolution of the machinery. We highlight both common and unique features in these model systems and also provide perspectives for future research in trypanosome.

关键词： cohesin separase securin anaphase promoting complex spindle assembly checkpoint T^panosoma brucei

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CCT4 suppression inhibits tumor growth in hepatocellular carcinoma by interacting with Cdc20

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Chinese Medical Journal 2021年第22期134卷 2721-2729页

作者： Feng Li Chun-Sheng Liu Ping Wu An-Sheng Ling Qi Pan Xiao-Ning Li Department of Gastroenterology The First People’s Hospital of AnqingAnqingAnhui 246000China Department of Laboratory Medicine Yijishan Hospital of Wannan Medical CollegeWuhuAnhui 241001China Department of Rehabilitation Medicine The Sixth People’s Hospital of AnqingAnqingAnhui 246000China

Background:The chaperonin containing t-complex(CCT)proteins play an important role in cell cycle-related protein degradation in yeast and *** role of the chaperonin containing t-complex 4(CCT4),one subtype of CCT proteins,in the progress of hepatocellular carcinoma(HCC)was not fully ***,we aimed to explore the mechanisms of CCT4 in ***:In this study,we used the UALCAN platform to analyze the relationship between CCT4 and HCC,and the association of CCT4 with the overall survival(OS)of HCC patients was also ***4 expression in HCC tumor tissues and normal tissues was also determined by western blot(WB)*** vector was used to knock down the CCT4 expression,and quantitative polymerase chain reaction and WB were used to determine the level of CCT4 in HCC cell *** counting kit-8(CCK-8)and 5-ethynyl-20-deoxyuridine(EdU)assays were used to detect the cell proliferation,and flow cytometry(FCM)was performed to evaluate the effect of CCT4 on the apoptosis of HCC ***-immunoprecipitation(co-IP)assay and WB were used to explore the mechanisms of CCT4 regulating the growth of *** were calculated from at least three replicate experiments and expressed as mean±standard ***’s t test,paired t test,and Kaplan–Meier analysis were used to compare across different ***:We found CCT4 was upregulated in HCC tissues compared with normal tissues,and its high expression was associated with poor prognosis(P<0.001).CCT4 was significantly increased in HCC tumor tissues compared with normal tissues(0.98±0.12 vs.0.23±0.05,t=7.73,P<0.001).After being transfected with CCT4 short-hairpin RNA(shRNA),CCT4 was decreased in mRNA level and protein level in both Huh7(mRNA level:0.41±0.07 vs.1.01±0.11,t=8.09,P=0.001;protein level:0.61±0.03 vs.0.93±0.07,t=7.19,P=0.002)and Hep3b cells(mRNA level:0.55±0.11 vs.1.04±0.15,t=4.51,P=0.011;protein level:0.64±0.10 vs.0.95±0.08,t=4.32,P=0.012).CCK8 assay indicated that CCT4 knockdo

关键词： Hepatocellular carcinoma Chaperonin containing t-complex 4(CCT4) Cdc20 securin Bim

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Tmub1沉默对大鼠肝部分切除术后肝细胞增殖的影响

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第三军医大学学报 2013年第9期35卷 850-853页

作者：马德宾沈雁兵王保林陈平第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科重庆400042 中国人民解放军第546医院外科新疆马兰841700

目的探讨Tmub1蛋白在肝再生过程中的作用及其在肝再生过程中对securin蛋白的影响。方法 54只大鼠随机分为3组即Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组及正常对照组,其中Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组注射相应病毒颗粒(3×107TU),对照组... 详细信息

目的探讨Tmub1蛋白在肝再生过程中的作用及其在肝再生过程中对securin蛋白的影响。方法 54只大鼠随机分为3组即Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组及正常对照组,其中Tmub1 RNAi慢病毒组、空载慢病毒组注射相应病毒颗粒(3×107TU),对照组未行注射,2 d后行肝部分切除术(partial hepatectomy,PH),每组分为6个亚组:PH术后0、2、6、12、24、48 h,每亚组3只大鼠,术后提取原代肝细胞、留取肝脏组织标本,利用Real-time PCR和Western blot检测慢病毒干扰效果及Tmub1沉默后对securin蛋白的影响。MTT实验、流式细胞仪检测原代肝细胞的增殖情况。结果Real-time PCR和Western blot表明实验组Tmub1 mRNA和蛋白被有效抑制;Tmub1沉默后securin mRNA表达无明显变化,而G2/M期securin蛋白量明显减少。MTT实验表明Tmub1沉默可明显上调PH术后6～24 h肝细胞的增殖速率;流式细胞分析结果显示实验组处于G2/M期的肝细胞比例明显增高。结论 Tmub1蛋白在肝再生过程中对肝细胞增殖进程发挥负向调控作用,而该作用可能与其在蛋白质水平影响了securin的表达密切相关。

关键词： Tmub1 肝再生 securin 慢病毒体内转染

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