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大鼠冠状动脉粥样硬化钙化组织与c-kit^(+)和sca-1^(+)细胞的关系研究

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中国临床解剖学杂志 2023年第4期41卷 453-458页

作者：孙攀文郭永龙贾阳阳孙昌业郭志坤新乡医学院河南省医用组织再生重点实验室河南新乡453003 新乡医学院第一附属医院心内科河南新乡453003

目的探讨大鼠冠状动脉粥样硬化钙化区域sca-1、c-kit的表达变化,为进一步研究冠状动脉粥样硬化机制奠定细胞学基础。方法30只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=22)。采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆... 详细信息

目的探讨大鼠冠状动脉粥样硬化钙化区域sca-1、c-kit的表达变化,为进一步研究冠状动脉粥样硬化机制奠定细胞学基础。方法30只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=22)。采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆固醇饲料喂养和维生素D3腹腔注射方法制备模型。模型制备成功后,通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察sca-1、c-kit在模型组与正常组的大鼠冠状动脉组织中的表达变化。利用免疫荧光双标技术证明sca-1与α-SMA的共定位表达。利用western blotting技术检测模型组与正常组的冠状动脉组织c-kit、sca-1蛋白的表达差异。结果造模12周,大鼠冠状动脉管壁明显增厚,内膜明显增生,平滑肌纤维排列显著紊乱,坏死物质沉积、脂质沉积和钙结节沉淀。免疫组化和免疫荧光结果显示sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞在动脉粥样硬化钙化区域的冠状动脉内膜、中膜、外膜中数量明显高于正常对照。病变区域的部分细胞存在sca-1与α-SMA的共表达。Western blotting结果显示动脉粥样硬化和钙化区域的c-kit、sca-1蛋白的表达量高于正常对照组。结论sca-1+细胞和c-kit^(+)细胞有向冠状动脉粥样硬化钙化区域迁移的倾向,其机制尚需研究。

关键词： sca-1 c-kit 动脉粥样硬化钙化免疫组织化学大鼠心脏

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钙转运蛋白sca-1在脂代谢中的作用初探

钙转运蛋白SCA-1在脂代谢中的作用初探

作者：朱虹云南大学

学位级别：硕士

脂质是机体内重要的能量来源,脂质的过度摄入和积累会导致肥胖症、糖尿病、动脉粥样硬化、脂肪肝等疾病的发生。脂滴是储存中性脂(如甘油三酯和胆固醇酯)的细胞器,其结构特点是由单层磷脂膜包被且膜上附着有300-500种蛋白质。脂滴蛋白... 详细信息

脂质是机体内重要的能量来源,脂质的过度摄入和积累会导致肥胖症、糖尿病、动脉粥样硬化、脂肪肝等疾病的发生。脂滴是储存中性脂(如甘油三酯和胆固醇酯)的细胞器,其结构特点是由单层磷脂膜包被且膜上附着有300-500种蛋白质。脂滴蛋白参与维持脂滴形态和功能,也间接参与了细胞内脂代谢活动。因此,脂滴蛋白的定位异常也会影响脂滴维持脂代谢稳态的作用。而目前关于脂滴蛋白定位的研究最多的是其定位所需的自身特定氨基酸序列。对于参与调控脂滴蛋白定位的蛋白质或者是信号通路还缺乏研究。实验室前期工作中发现类固醇脱氢酶LET-767功能缺失会导致脂滴常驻蛋白DHS-3定位异常。利用IP-Mass寻找与LET-767可能存在相互作用的蛋白发现其中并不包含DHS-3。由此我们猜测LET-767可能与其他蛋白相互作用调控DHS-3定位,并且该蛋白功能缺失也会造成与LET-767相似的表型。因此我们对可能与LET-767存在相互作用的蛋白进行遗传学筛选,发现钙转运蛋白sca-1功能缺失也会导致DHS-3定位异常。表现为sca-1RNAi使线虫脂肪含量明显下降,同时DHS-3表达量轻微上升,但脂滴上的DHS-3减少。实验结果显示,脂滴上减少的DHS-3大量定位在了内质网中。LET-767和sca-1的亚细胞定位分析结果表明,LET-767在内质网腔和膜中都有定位,sca-1则主要定位在内质网膜上,并且二者可能存在相互作用。sca-1功能缺失能降低硬脂酰辅酶A去饱和酶SCD的活性,但对整体脂肪酸水平和二酰基甘油酰基转移酶DGAT-2的表达没有显著影响。因此sca-1不是通过降低线虫脂肪酸合成来调控脂肪含量。进一步分析发现干扰sca-1能轻微增加甘油三酯水解酶ATGL-1的表达,并使ATGL-1在脂滴上的定位增多。因此,sca-1可能是通过促进脂肪分解途径来减少脂肪含量。综上所述,我们发现钙转运蛋白sca-1能调控脂滴蛋白DHS-3和ATGL-1的定位,并通过ATGL-1调控脂肪含量。

关键词：脂滴脂滴蛋白 sca-1 脂质代谢

骨髓间充质干细胞sca-~1+/CD45^+/CD31^+亚群的归巢能力

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中国组织工程研究 2015年第41期19卷 6572-6578页

作者：贺继刚李洪荣桂龙升李永武严丹王平云南省第一人民医院心脏大血管外科云南省昆明市650032

背景:自2003年,美国FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病以来,已有大量临床及基础研究报道,但报道结果却不尽相同,其中很重要的一点就是干细胞无法有效到达心肌损伤部位(即干细胞归巢)。目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞各... 详细信息

背景:自2003年,美国FDA率先批准自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死性疾病以来,已有大量临床及基础研究报道,但报道结果却不尽相同,其中很重要的一点就是干细胞无法有效到达心肌损伤部位(即干细胞归巢)。目的:探讨小鼠骨髓间充质干细胞各亚群在心肌修复中的归巢能力。方法:以小鼠心肌干细胞表面分化抗原筛查小鼠骨髓间充质干细胞,再以CD45、CD31为标准分选得到小鼠骨髓间充质干细胞4个亚群。采用Transwell小室检测各亚群组细胞的归巢能力。将各亚群细胞注入心肌梗死48 h小鼠体内,注射后48,96 h及7 d处死小鼠取其心脏完成小动物活体成像并检测其荧光强度。结果与结论:小鼠骨髓间充质干细胞sca-1+/CD45+/CD31+亚群归巢能力优于其他亚群。小动物活体成像提示干细胞注射48 h,96 h及7 d时sca-1+/CD45+/CD31+亚群平均荧光强度优于其他亚群,sca-1+/CD45+/CD31+亚群迁移率最高,说明sca-1+/CD45-/CD31-群体有向受损心肌归巢的趋势。

关键词：心肌梗塞骨髓间质干细胞细胞运动组织工程干细胞骨髓干细胞归巢骨髓间充质干细胞亚群 sca-1 CD45 CD31 小鼠心肌梗死荧光强度国家自然科学基金

Adult stem-like cells in kidney

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World Journal of Stem Cells 2015年第2期7卷 490-494页

作者： Keiichi Hishikawa Osamu Takase Masahiro Yoshikawa Taro Tsujimura Masaomi Nangaku Tsuyoshi Takato Department of Advanced Nephrology and Regenerative Medicine the University of Tokyo Department of Oral and Maxillofacial Surgery Graduate School of MedicineUniversity of Tokyo

Human pluripotent cells are promising for treatment for kidney diseases, but the protocols for derivation of kidney cell types are still controversial. Kidney tissue regeneration is well confirmed in several lower vertebrates such as fish, and the repair of nephrons after tubular damages is commonly observed after renal injury. Even in adult mammal kidney, renal progenitorcell or system is reportedly presents suggesting that adult stem-like cells in kidney can be practical clinical targets for kidney diseases. However, it is still unclear if kidney stem cells or stem-like cells exist or not. In general, stemness is defined by several factors such as self-renewal capacity, multi-lineage potency and characteristic gene expression profiles. The definite use of stemness may be obstacle to understand kidney regeneration, and here we describe the recent broad findings of kidney regeneration and the cells that contribute regeneration.

关键词： Stem cell Label-retaining cells rKS56 SPcells CD24 CD133 sca-1 Induced pluripotent stem ES cell

小鼠c-kit~＋sca-1~＋和c-kit~＋sca-1~－细胞代表不同分化阶段的造血干／祖细胞

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中华血液学杂志 1996年第5期17卷 240-242页

作者：张毅张学光王江方朱学东 K Matsushima 苏州医学院免疫研究室日本金泽大学癌研究所

为深入研究造血干细胞（ＨＳＣ）的生物学功能，根据表面标志，采用流式细胞仪分离和富集了小鼠骨髓中两类不同特征的ＨＳＣ亚群ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋和ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞。体外集落培养表明ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细... 详细信息

为深入研究造血干细胞（ＨＳＣ）的生物学功能，根据表面标志，采用流式细胞仪分离和富集了小鼠骨髓中两类不同特征的ＨＳＣ亚群ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋和ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞。体外集落培养表明ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞对ＩＬ－３或ＧＭ－ＣＳＦ单独刺激无反应，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则可形成大小不等的细胞集落。多种造血生长因子［ＩＬ－３＋ＩＬ－６＋ＧＭ－ＣＳＦ＋Ｇ－ＣＳＦ＋Ｅｐｏ＋干细胞生长因子（ＳＣＦ）］联合可诱导ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞形成大的细胞集落，但在培养１２天时尚无ＢＦＵ－Ｅ和粒、单核、红和巨核系细胞集落（ＣＦＵ－ＧＥＭＭ）形成；而同样条件下，ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞可形成ＢＦＵ－Ｅ和ＣＦＵ－ＧＥＭＭ以及其它各类集落。体内实验表明ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞在培养８天时无脾集落（ＣＦＵ－Ｓ）形成，与ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞显著不同（Ｐ＜０．０１）。相反，ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞包含了骨髓造血重建活性细胞，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则缺乏。结果提示ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１＋细胞为早期的具重建长期造血功能的干细胞，而ｃ－ｋｉｔ＋Ｓｃａ－１－细胞则为相对分化后期的造血祖细胞。

关键词：造血干细胞抗原 c-kit sca-1 细胞分化

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乳腺干细胞培养基的建立及有效性验证

中国组织工程研究 2014年第10期18卷 1585-1590页

作者：张军红杨晶豆晓伟王春华李青赵春华中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院组织工程中心细胞生物学系北京市100051 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所病理科河北省邢台市054000 河北医科大学生理学教研室河北省石家庄市050017 河北省邢台市眼科医院河北省眼病治疗中心河北省眼科研究所耳鼻喉科河北省邢台市054000 贵阳医学院附属医院骨科贵州省贵阳市550004

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞sca-1和vimentin的表达。筛选... 详细信息

背景:干细胞培养基,尤其是乳腺干细胞培养基现阶段尚无有效的制备方法。目的:利用sca-1+乳腺细胞验证自制乳腺干细胞培养基的有效性。方法:用BM培养基培养乳腺器官样小体,6 d后以免疫荧光方法监测成纤维细胞sca-1和vimentin的表达。筛选出MaECM培养基,培养乳腺细胞6 d后,免疫磁珠筛选sca-1+和sca-1-细胞群,流式细胞术分析sca-1阳性细胞的纯度,1×104 sca-1+或sca-1-细胞种植在4只鼠双侧乳腺脂肪垫上,6-8周后取出乳腺脂肪垫,以卡红整体染色和苏木精-伊红染色分析长出乳腺的结构数量。结果与结论:乳腺器官样小体用BM培养基培养6 d后,检测到大量sca-1和vimentin阳性的成纤维细胞,说明BM培养基不适合分离sca-1+乳腺干细胞。筛选出的MaECM培养基能够抑制成纤维的生长。磁珠筛选后,流式细胞术检测sca-1+细胞在sca-1+和sca-1-细胞群的纯度分别是92%和5%。移植实验显示在8个种植sca-1+细胞的脂肪垫生长出6个乳腺结构;而在8个种植sca-1-细胞的脂肪垫中除1只鼠死亡,其余脂肪垫中均未长出乳腺结构。提示MaECM培养基适用于培养鼠乳腺干细胞。

关键词：干细胞培养乳腺干细胞成纤维细胞 sca-1 乳腺干细胞培养基国家重大科学研究计划(973)资助项目 863项目

Endodermal progenitor cells isolated from mouse pancreas

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Stem Cell Discovery 2011年第3期1卷 44-53页

作者： Lisa Samuelson Natasha Wright David Allen Gerber 不详

In this study we have isolated and identified a progenitor cell population located in murine pancreatic tissue. This cell population has specific properties that make it different from previously described candidate pancreatic progenytor cell populations. It is located in the periductal region outside the islet architecture yet the cells have features consistent with endodermal development and endocrine functions within the islet. Cells are proliferative and capable of differentiation into pancreatic lineages expressing pancreatic associated transcription factors and proteins and maintaining the ability to produce insulin.

关键词： Pancreatic Progenitor Diabetes sca-1 Murine Pancreas

大鼠冠状动脉粥样硬化钙化组织中c-Kit+细胞和sca-1+细胞的表达

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大鼠冠状动脉粥样硬化钙化组织中c-Kit+细胞和Sca-1+细胞的表达

作者：孙攀文新乡医学院

学位级别：硕士

背景动脉粥样硬化是血管内皮损伤后的一种慢性的渐进的疾病,近几年的发病趋势呈低龄化。动脉粥样硬化常伴有钙化,是动脉粥样硬化的标志之一也是其必然结果,最近的观点认为动脉粥样硬化钙化是一个主动的过程而不仅仅是钙盐结晶简单的被... 详细信息

背景动脉粥样硬化是血管内皮损伤后的一种慢性的渐进的疾病,近几年的发病趋势呈低龄化。动脉粥样硬化常伴有钙化,是动脉粥样硬化的标志之一也是其必然结果,最近的观点认为动脉粥样硬化钙化是一个主动的过程而不仅仅是钙盐结晶简单的被动沉积。sca-1、c-Kit作为干细胞的表面标记之一,广泛应用到心血管疾病的研究中。探索动脉粥样硬化伴钙化动脉sca-1、c-Kit的表达改变可能会对动脉粥样硬化伴钙化的治疗提供新的思路。目的探讨sca-1阳性细胞、c-Kit阳性细胞在冠状动脉粥样硬化钙化模型大鼠动脉壁中的表达与分布,为进一步研究冠状动脉粥样硬化奠定细胞学基础。方法1.32只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(n=8)和动脉粥样硬化钙化模型组(n=24)。正常对照组大鼠采用常规饲料喂养,模型组大鼠采用丙基硫氧嘧啶灌胃、高脂高胆固醇饲料喂养以及维生素D3腹腔注射的方法制备。2.从第7周开始,每周从正常组和模型组各随机选取1只大鼠,取出心脏,经OCT包埋,冰冻切片。通过油红O、茜素红、HE染色观察模型组大鼠冠状动脉的病理变化,以显示动脉粥样硬化钙化模型的制备情况。3.模型制备成功后,通过免疫组织化学和免疫荧光技术观察sca-1、c-Kit在模型组与在正常组的大鼠血管组织中的表达变化。4.通过免疫荧光染色技术观察sca-1与α-SMA的共表达。5.通过western blotting技术检测模型组与正常组的大鼠c-Kit、sca-1蛋白的表达差异。结果1.造模12周末时,模型组大鼠冠状动脉管壁明显的增厚,内膜明显的增生,平滑肌纤维排列显著紊乱,出现坏死物质沉积、脂质沉积和钙结节沉淀。提示动脉粥样硬化钙化模型制备成功。2.免疫组化结果显示sca-1细胞、c-Kit细胞在动脉粥样硬化钙化大鼠模型的冠状动脉内膜、中膜、外膜中的表达明显高于正常对照。3.免疫荧光结果显示sca-1细胞、c-Kit细胞在动脉粥样硬化钙化大鼠模型的冠状动脉表达与免疫组化结果一致,在部分细胞中存在sca-1与α-SMA的共表达。4.western blotting结果显示动脉粥样硬化钙化模型组大鼠的c-Kit、sca-1蛋白的表达量高于正常对照组。结论sca-1细胞、c-Kit细胞在冠状动脉粥样硬化钙化状态下数量增多,其机制尚需研究。

关键词： sca-1 c-Kit 动脉粥样硬化免疫组织化学大鼠

CD34及sca-1蛋白在不同月龄大鼠阴茎海绵体中的表达

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中国男科学杂志 2009年第6期23卷 24-27,33页

作者：许立军单玉喜陈岽高洁阳东荣孙传洋崔勇薛波新苏州大学附属第二医院泌尿外科苏州215004

目的检测CD34和干细胞抗原-1(sca-1)在不同月龄组SD大鼠阴茎海绵体组织中的表达,对阴茎海绵体干细胞进行初步的观察。方法随机选取2月龄、5月龄、20月龄不同窝别SD大鼠各10只分别作为幼龄组、壮龄组和老龄组,乙醚麻醉下取阴茎海绵体组织... 详细信息

目的检测CD34和干细胞抗原-1(sca-1)在不同月龄组SD大鼠阴茎海绵体组织中的表达,对阴茎海绵体干细胞进行初步的观察。方法随机选取2月龄、5月龄、20月龄不同窝别SD大鼠各10只分别作为幼龄组、壮龄组和老龄组,乙醚麻醉下取阴茎海绵体组织,分别采用免疫组织化学和RT-PCR技术对CD34和sca-1进行测定。结果阴茎海绵体组织中存在CD34和sca-1这两种干细胞抗原标志物的表达。CD34表达以血管及血窦内皮为主,并可见部分散在表达;sca-1散在表达,主要沿血窦及动脉血管分布;亦可见极少量双阳性染色细胞(CD34/sca-1),主要表达于海绵体血窦周围。CD34、sca-1、CD34/sca-1表达量于组间两两比较均有显著统计学差异(P1),且均与月龄呈明显负相关(P1)。结论SD大鼠阴茎海绵体内CD34及sca-1蛋白表达随月龄增长明显下降,并有双阳性染色细胞的存在。海绵体组织中有内源性干细胞存在的可能。

关键词： CD34 sca-1 干细胞阴茎海绵体