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Construction, expression and characterization of the engineered antibody against tumor surface antigen, p185c-erbB-2

引用

Cell Research 2003年第1期13卷 35-48页

作者： LIAN SHENG CHENG, AI PING LIU, JIA HONG YANG, YAN QIU DONG, LIANG WEI LI, JING WANG, CHAO CHEN WANG, JING LIUSchool of Life Science, University of Science and Technology of China, Hefei 230027, China School of Life Science University of Science and Technology of China Hefei China

The c-erbB-2 proto-oncogene encodes a 185kDa protein p!85, which belongs to epidermal growth factor receptor family. Amplification of this gene has been shown to correlate with poor clinical prognosis for certain cancer patients. The monoclonal antibody A21 which directed against p185 specifically inhibits proliferation of tumor cells overexpressing p185, hence allows it to be a candidate for targeted therapy. In order to overcome several drawbacks of murine MAb, we cloned its VH and VL genes and constructed the single-chain Fv (scfv) through a peptide linker. The recombinant scfvA21 was expressed in Escherichia coli and purified by the affinity column. Subsequently it was characterized by ELISA, Western blot, cell immunohistochemistry and FACS. All these assays showed the binding activity to extracellular domain (ECD) of p!85. Based on those properties of scfvA21, we further constructed the scfv-fc.fusion molecule with a homodimer form and the recombinant product was expressed in mammalian cells. In a

关键词： p185 c-erbB-2 scfv scfv-fc.

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