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XPO5基因MicroRNA结合位点单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌预后的关系

XPO5基因MicroRNA结合位点单核苷酸多态性与晚期非小细胞肺癌预后...

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作者：李翠乔河北医科大学

学位级别：硕士

目的：肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，严重影响人类生命及健康。非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的80%以上，大约三分之一的非小细胞肺癌患者在诊断时已是晚期或局部晚期阶段。MicroRNA(miRNA)是一类小型的非编码RNA，由大约22个核苷... 详细信息

目的：肺癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，严重影响人类生命及健康。非小细胞肺癌(NSCLC)占所有肺癌的80%以上，大约三分之一的非小细胞肺癌患者在诊断时已是晚期或局部晚期阶段。MicroRNA(miRNA)是一类小型的非编码RNA，由大约22个核苷酸组成，作为监管机构调控mRNA转录后表达。越来越多的证据表明，microRNA在一个广泛的生物过程中发挥重要作用，如胚胎发育、细胞分化、增殖、凋亡、癌症发展和胰岛素分泌。单核苷酸多态性(Single nucleotide polymorphism,SNP)主要是指染色体基因组水平上单个核苷酸变异引起的DNA序列的多态性。近年来研究发现MicroRNA的合成过程及其靶基因结合位点的SNP可影响MicroRNA调控功能的发挥，并产生显著的遗传学效应。XPO5在miRNA形成过程中起重要的作用，XPO5基因与miRNA的核输出相关,降低XPO5的表达可使miRNA的表达水平整体下降。目前对XPO5基因与肺癌的研究较少，本研究对XPO5基因MicroRNA的SNP与晚期非小细胞肺癌预后及化疗疗效的关系进行了研究，为肺癌的预后评价提供了新思路。方法：采集2004年12月至2011年12月期间就诊于河北医科大学第四医院呼吸内科的106例非小细胞肺癌患者标本，所有患者经组织病理和/或细胞病理确诊为非小细胞肺癌，临床资料齐全，包括年龄、性别、病理类型、TNM分期、吸烟与否、治疗情况、生存时间等。均于放、化疗治疗前空腹采集患者静脉血液，取血标本约5ml至于枸橼酸纳试管中，已取标本2周内采用蛋白酶K-氯化钠盐析法提取DNA，鉴定合格的DNA置于-20℃冰箱保存备用。根据NCBI SNP数据库设计上下游引物，采用聚合酶链反应（polymerase chain reaction）扩增目的片段，凝胶电泳法确定目的片段扩增成功，证实扩增成功后送往上海捷瑞生物工程技术服务有限公司，使用连接酶反应(ligase detection reaction，LDR)技术，对SNP位点进行检测，对XPO5基因MicroRNA结合位点rs11077单核苷酸多态性进行基因分型。对照组70例为在本院体检中心进行健康体检的人员，经过胸部X线、腹部超声等检查除外肿瘤及与非小细胞肺癌存在相关的疾病，且与病例组无血缘关系，无遗传性疾病病史和肿瘤家族史。统计方法：对肺癌组与对照组的SNP分布频率及肺癌组不同临床特征、不同基因型的化疗疗效总有效率分析采用X2检验。采用Kaplan-Meier法估计各组间生存率并绘制生存曲线，用Log-Rank法对各组生存曲线的分布异同进行检验，比较生存率有无差别。采用Cox回归模型进行多因素分析，确定影响预后的独立危险因素。所有数据统计分析均采用SPSS18.0版软件包进行，结果以P＜0.05被认为有统计学意义。结果： 1XPO5基因rs11077位点测序结果：rs11077位点基因型分别为CC, AC和AA，不同基因型出现的频率在正常对照组分别为：1，12和57;与正常人相比较，非小细胞肺癌患者不同基因型出现频率分别为0，16和90。C等位基因出现频率较小。目前没有明显统计学意义证明106例非小细胞肺癌患者与70例正常人之间的肺癌发病风险与rs11077SNP有关（P=0.685）。 2所有非小细胞肺癌患者中，单因素分析：不同基因型：AA与AC基因型，AA型两年生存率为15.6%，AC型两年生存率37.5%，P值=0.001，两种基因型对预后影响差别有统计学意义。不同性别：男性两年生存率15.9%，女性两年生存率24.3%，P=0.475;不同年龄：≤60岁两年生存率22.5%，＞60岁两年生存率19.3%，P=0.518;不同吸烟情况：吸烟组两年生存率21.7%，不吸烟组两年生存率16.7%，P=0.313;不同病理类型：鳞癌组两年生存率18.2%，腺癌组两年生存率19.2%，P=0.757;不同化疗方案：GP方案组两年生存率15.4%，TP方案组两年生存率20.0%，NP方案组两年生存率24.1%，P=0.561。不同性别、年龄、吸烟情况、病理类型及不同化疗方案均对预后影响差别无明显统计学意义。 3多因素分析：不同基因型：AA基因型与AC基因型：P=0.002，RR=0.367，95%CI=0.192--0.699;AC基因型的死亡风险为AA基因型死亡风险的0.367倍。不同性别：男性与女性患者，P=0.073，RR=0.168，95%CI=0.365--1.046;不同年龄：≤60岁组与＞60岁组， P=0.775，RR=1.061，95%CI=0.706--1.595;不同TNM分期：III期组与IV期组患者：P=0.348，RR=0.786，95%CI=0.475--1.300;不同吸烟情

关键词：非小细胞肺癌 miR-SNP 预后 XPO5 rs11077 化疗疗效

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