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重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA与rrs基因突变特征分析

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中国人兽共患病学报 2016年第11期32卷 1001-1005页

作者：胡彦杨春逄宇卢楠刘洁沈静朱大冕冯鑫重庆医科大学病原生物学教研室重庆400016 重庆市结核病防治所结核病参比实验室重庆400050 中国疾病预防控制中心结核病预防控制中心国家结核病参比实验室北京102206

目的分析重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA、rrs基因突变特征及其与氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、卡那霉素耐药(kanamycin,Km)的关系。方法对89株耐多药结核分枝杆菌的Ofx耐药相关基因gyrA和Km耐药相关基因rrs进行序列测定,分析其基因突变特... 详细信息

目的分析重庆市耐多药结核分枝杆菌gyrA、rrs基因突变特征及其与氧氟沙星(ofloxacin,Ofx)、卡那霉素耐药(kanamycin,Km)的关系。方法对89株耐多药结核分枝杆菌的Ofx耐药相关基因gyrA和Km耐药相关基因rrs进行序列测定,分析其基因突变特征。结果 89株MDR结核分枝杆菌中有50株对Ofx耐药,其中46株(92.00%,46/50)gyrA基因发生突变,突变位点包括74、89、90、91和94位密码子;22株耐Km菌株中,19株(86.36%,19/22)发生rrs基因突变,突变类型均为A1401G。Ofx、Km耐药株的gyrA、rrs基因突变率明显高于相应敏感株的基因突变率,两者之间的差异有统计学意义(χ2=62.937,P基因90、91、94位密码子突变是重庆市耐多药结核分枝杆菌Ofx耐药的主要机制;rrs基因A1401G突变则是Km耐药的主要原因。

关键词：分枝杆菌结核耐多药突变 gyrA基因 rrs基因

结核分枝杆菌对氨基糖苷类和多肽类抗结核药物耐药性及其与rpsL、rrs基因突变关系的研究

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结核分枝杆菌对氨基糖苷类和多肽类抗结核药物耐药性及其与rpsL、...

作者：宋艳华北京市结核病胸部肿瘤研究所

学位级别：硕士

背景及目的：氨基糖苷类和多肽类抗结核药是较早用于治疗结核病的药物，由于近些年MDR-TB的流行和抗结核新药的匮乏，氨基糖苷类(KM，AM)和多肽类药物（CPM）作为注射用抗结核药物是组成治疗MDR-TB方案的核心药物之一。MTB对氨基糖苷类... 详细信息

背景及目的：氨基糖苷类和多肽类抗结核药是较早用于治疗结核病的药物，由于近些年MDR-TB的流行和抗结核新药的匮乏，氨基糖苷类(KM，AM)和多肽类药物（CPM）作为注射用抗结核药物是组成治疗MDR-TB方案的核心药物之一。MTB对氨基糖苷类和多肽类抗结核药物之间存在交叉耐药性，使用不当可能导致治疗无效并且增加药物的不良反应，了解临床分离株对这些药物的耐药性，有利于临床制定合理的化疗方案，而了解这些药物的耐药和交叉耐药的分子机制有助于为耐药的快速诊断提供依据。本研究的目的是通过对临床MTB菌株对SM、KM、AM、CPM的药物敏感性测定，了解其耐药程度和交叉耐药水平，并且进一步探讨耐药及交叉耐药与rrs、rpsL基因突变的关系。方法：（1）对768株来自于住院结核病患者的MTB菌株的SM、KM、AM、CPM的改良罗氏药敏结果进行统计，分析四种药物的耐药率、交叉耐药率及与初复治的相关性。（2）采用微量平板AlamarBlue检测(MABA)法，检测117株MTB临床分离菌株的SM、KM、AM和CPM的MIC值。（3）对其中64株MTB临床分离株的rrs和rpsL基因进行序列测定，评定rrs和rpsL基因突变与SM、KM、AM、和CPM耐药及交叉耐药的关系。结果：（1）768例临床菌株SM、KM、AM、CPM的耐药率分别35.3%、16.8%、15.2%、7.8%，KM和AM的耐药率比较没有统计学差异（χ2=0.697，P值为0.404），KM和AM的耐药率与CPM耐药率比较有统计学差异（χ2=28.725、20.747，P值均小于0.001）。初治组和复治组SM的耐药率分别为20.2%和60.9%。MDR-TB组SM耐药率（81.3%）高于KM、AM、CPM的耐药率（7.8%、7.8%、3.1%）;XDR-TB组CPM的耐药率（46.7%）低于SM、KM、AM（91.3%、96.7%、82.6%）的耐药率（。2）MABA测定117株临床分离株中，83株耐SM，其中63株（75.9%）为高度耐药，18株（21.7%）低度耐药，2株（2.4%）中度耐药;耐KM和AM耐药株中分别有78.3%和94.7%高度耐药（MIC都大于128μg/ml），分别有21.7%和5.3%低耐度耐药，没有发现对耐KM或AM中度耐药的菌株;CPM耐药株中所有菌株的MIC值都在5-20μg/ml，没有发现高度耐药株;18株菌同时耐KM和AM，且对KM和AM均高度耐药，分别占KM耐药株和AM耐药株的78.3%和94.7%，两者比较无统计学差异（χ2=1.157，P值0.282>0.05），5株菌对KM低度耐药（MIC=8μg/ml），但对AM敏感（MIC≦1μg/ml）。13株菌同时耐AM和CPM，分别占AM耐药株和CPM耐药株的68.4%和92.9%（P值=0.195>0.05），这13株菌均高度耐KM、AM。（3）64株MTB临床分离株进行rrs和rpsL基因序列测定。52株SM耐药株中，42株（80.8%）都有rpsL突变，8株（15.4%）有rrs514A→C突变，2株（3.8%）没有上述突变。rpsL基因有密码子43或88突变两种，其中具有rpsLLys43Arg突变的32株菌MIC值均≧128μg/ml;9株具有rpsL263A→G（Lys88Arg）和1株263A→T（Lys88Met）突变，MIC值在4-64μg/ml;9株具有rrsA514C突变株，其中8株MIC在4-8μg/ml，只有1株MIC为2μg/ml，属于SM敏感菌株。18株rrsA1401G突变株对KM、AM均高度耐药;18株耐SM、KM、AM三药的MTB菌株的基因型改变是rrsA1401G合并rpsL突变，或者rrsA1401G合并rrsA514C突变。结论：（1）通过对住院患者临床病例分析示四种抗结核注射剂中KM和AM的耐药率相近，SM的耐药率最高，CPM耐药率低于KM和AM。多数初治结核病患者仍然对SM敏感，复治结核患者和MDR-TB患者中SM有极高的耐药率，但多数病例仍然对KM、AM、CPM敏感。在XDR-TB中CPM的耐药率明显低于其他三药。（2）耐SM/KM/AM的临床分离株均绝大多数为高水平耐药（MIC≧128μg/ml），耐CPM的临床分离株以低度耐药为主;AM和KM存在高比例的交叉耐药，对KM高度耐药的菌株也对AM高度耐药，对KM低度耐药的菌株对AM敏感;CPM耐药株基本上都对KM和AM高度耐药株，但是KM、AM高度耐药菌株有部分对CPM仍然敏感。（3）MTB的rpsLLys43Arg突变与SM高度耐药相关，rpsLLys88Arg/Met突变与SM中低度耐药相关，rrs514A→C突变可能与SM低水平耐药相关联。对SM、KM、AM三药均耐药MTB菌株的基因型

关键词：结核分枝杆菌氨基糖苷类药物耐药交叉耐药链霉素卡那霉素阿米卡星卷曲霉素 rrs基因 rpsL基因

116株结核分枝杆菌链霉素耐药菌株rspL和rrs基因突变特征研究

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中国防痨杂志 2010年第10期32卷 636-638页

作者：谢彤李桂莲巨韩芳赵德福赵慧穆成王撷秀天津市结核病控制中心天津300011

链霉素为氨基糖苷类抗生素,主要作用于16s RNA,干扰蛋白质的翻译,抑制蛋白质合成。已经证实链霉素耐药相关的基因主要为编码核糖体蛋白S12的rpsL基因和编码16sRNA的rrs基因。在一些地区研究发现链霉素耐药株的传播与MTB北京基因型密切... 详细信息

链霉素为氨基糖苷类抗生素,主要作用于16s RNA,干扰蛋白质的翻译,抑制蛋白质合成。已经证实链霉素耐药相关的基因主要为编码核糖体蛋白S12的rpsL基因和编码16sRNA的rrs基因。在一些地区研究发现链霉素耐药株的传播与MTB北京基因型密切相关。本研究旨在阐明天津地区链霉素耐药MTB菌株rpsL和rrs基因突变位点以及突变率是否与北京家族基因型相关。[第一段]

关键词： rrs基因耐药菌株链霉素结核分枝杆菌突变特征 16sRNA 氨基糖苷类抗生素 rpsL基因

结核分枝杆菌链霉素耐药临床分离株rrs基因突变与其耐药水平相关性研究

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武汉轻工大学学报 2014年第3期33卷 27-31页

作者：陈高瞻芦莲雷航马峻孙战强孙庆文余晓丽张舒林武汉轻工大学生物与制药工程学院湖北武汉430023 武汉市医疗救治中心检验科湖北武汉430032 复旦大学遗传工程国家重点实验室上海200433 上海交通大学基础医学院病原生物学教研室上海200025

研究武汉地区耐链霉素(SM)结核分枝杆菌的耐药分子机制,进一步研究阐明rrs基因突变与结核分枝杆菌耐链霉素的关系;同时探究武汉地区结核分枝杆菌"北京基因型"菌株的流行趋势,为进一步研究武汉地区耐链霉素菌株rrs基因突变与"北京基因型... 详细信息

研究武汉地区耐链霉素(SM)结核分枝杆菌的耐药分子机制,进一步研究阐明rrs基因突变与结核分枝杆菌耐链霉素的关系;同时探究武汉地区结核分枝杆菌"北京基因型"菌株的流行趋势,为进一步研究武汉地区耐链霉素菌株rrs基因突变与"北京基因型"的相关性奠定基础。84株结核分枝杆菌中,44株对链霉素耐药,20株耐其它药物,20株对链霉素敏感,采用PCR直接测序法分析链霉素菌株rrs基因突变情况;采用RD105缺失法鉴定84株临床分离菌株中"北京基因型"菌株。结果显示44株SM耐药菌株中,16(36.4%)株检测到rrs基因突变,其中9株1401位点A→G,6株514位点A→C突变,1株1487位点G→A突变;20株耐其它药菌株中1401位点A→G和514位点A→C突变各1株,20株敏感菌株中发现1株1029位点C→T点突变;84株临床分离菌株中有77(91.8%)株"北京基因型"菌株,7株非"北京基因型"菌株。研究表明链霉素耐药菌株rrs基因主要突变位点在514和1401位点,武汉地区"北京基因型"菌株为当地流行的结核分枝杆菌,且SM耐药菌株中突变菌株93.8%(15/16)为"北京基因型","北京基因型"菌株研究及其鉴定是有其科学价值的,值得我们重视。

关键词：结核分枝杆菌链霉素耐药 rrs基因北京基因型

宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs突变研究

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中国预防医学杂志 2016年第10期17卷 744-749页

作者：车洋杨天池平国华林律宁波市疾病预防控制中心浙江宁波315010

目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征,为宁波地区耐多药结核病的有效防控提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素菌株40株和链霉素... 详细信息

目的阐明宁波地区耐多药结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsL和rrs的分子突变特征,为宁波地区耐多药结核病的有效防控提供科学依据。方法从宁波市疾病预防控制中心收集67例耐多药结核分枝杆菌临床分离株,包括耐链霉素菌株40株和链霉素敏感菌株27株。采用PCR直接测序法分析rpsL和rrs基因的分子突变特征。对链霉素耐药与基因突变率关系之间的差异采用χ2检验,Prrs基因突变,分别为A1401G(7.50%,3/40);A514C(7.50%,3/40)。27株链霉素敏感菌株中有4株(14.81%)发生rpsL突变,突变位点集中在第104位和第119位密码子,1株链霉素敏感菌株的rrs基因检测到A1401G突变。耐多药结核分枝杆菌中链霉素耐药株rpsL基因突变率高于链霉素敏感株,两者之间差异有统计学意义(χ2=25.387,P基因突变类型存在地域差异。

关键词：耐多药结核链霉素 rpsL基因 rrs基因

MTB对阿米卡星和卡那霉素耐药相关rrs与eis基因突变的研究

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中国防痨杂志 2018年第10期40卷 1141-1144页

作者：李可维赵薇刘思洁杨修军中莉刘昕齐鹏吉林省疾病预防控制中心微生物检验所长春130062 吉林省结核病防治科学研究院结核实验室长春130062 吉林大学公共卫生学院流行病与卫生统计学教研室长春130062

本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014-2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验，并对rrs和eis缸基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am，单耐Km者有2株；其中26株MTB的rrs基因... 详细信息

本研究搜集了吉林省全部9个地级市结核病医疗机构2014-2017年内1357株结核分枝杆菌分离株。采用比例法进行Am和Km的药物敏感性试验，并对rrs和eis缸基因进行PCR和测序分析。发现28株同时耐Km和Am，单耐Km者有2株；其中26株MTB的rrs基因均发生突变，基因突变率为92．86％；6株菌存在g妇基因突变，突变率为21．43％。60株对照株未发现基因突变。吉林省MTB对Am和Kin存在较高的交叉耐药现象；rrs基因的突变可以作为两者交叉耐药的分子标志，为建立耐Am和（或）Km结核病快速检测技术提供分子基础。

关键词：分枝杆菌,结核多药耐药相关蛋白质类丁胺卡那霉素卡那霉素 DNA突变分析 rrs基因 eis基因

应用pcr-sscp技术检测结核分枝杆菌耐链霉素相关基因rpsL和rrs突变

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中华临床感染病杂志 2011年第5期4卷 -页

作者：李召东魏慧张艳范大鹏杜蓬孙爱华 310003 杭州市红十字会医院检验科浙江医学高等专科学校

目的应用聚合酶链反应-单链构象多态性(pcr-sscp)技术,建立快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsl和rrs突变的新方法.方法采用常规药敏试验检测112株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素的耐药性,建立pcr-sscp法检测耐药相关基因rps... 详细信息

目的应用聚合酶链反应-单链构象多态性(pcr-sscp)技术,建立快速检测结核分枝杆菌链霉素耐药相关基因rpsl和rrs突变的新方法.方法采用常规药敏试验检测112株结核分枝杆菌临床分离株对链霉素的耐药性,建立pcr-sscp法检测耐药相关基因rpsl和rrs的突变.采用pcr直接测序技术(pcr-ds)确定rpsl和rrs基因突变情况并与pcr-sscp法检测结果进行比较.结果 112株结核分枝杆菌临床分离株均携带rpsl和rrs基因,52株(46.4％)对链霉素敏感,其中有1株敏感菌株rrs基因pcr-sscp条带异常,pcr-sscp方法的特异性为98.1％ (51/52).60株(53.6％)结核分枝杆菌对链霉素耐药,用pcr-sscp方法分别检出46株(76.6％) rpsl基因和11株(18.3％)rrs基因条带异常,1株同时出现rpsl和rrs基因条带异常,pcr-sscp检测的灵敏度为93.3％ (56/60).结论 pcr-sscp方法检测结核分枝杆菌耐药相关基因rpsl和rrs突变的特异性和敏感性高,临床上值得推广应用.abstract：objective to establish a novel rapid detection method based on pcr-single-strand-conformational polymorphism (pcr-sscp) to determine mutation of streptomycin-resistance associated rpsl and rrs genes in isolates of mycobacterium tuberculosis (mtb).methods streptomycin-resistance of 112 mtb isolates was detected using the routine drug susceptibility test,and a special pcr-sscp assay was *** mutations of rpsl and rrs genes in streptomycin-resistant mtb isolates were detected by pcr-sscp and pcr direct sequencing (pcr-ds) ; the results from two techniques were *** all isolates had both rpsl and rrs ***-two isolates (46.4％) were streptomycin susceptible,in which only 1 isolate showed abnormal pcr-sscp fragments from rrs gene,and the specificity of pcr-sscp was 98.1％ (51/52).sixty isolates (53.6％) were streptomycin-resistant,in which 46 (76.6％) and 11 ( 18.3％ ) isolates presented the abnormal pcr-sscp fragments of rpsl and rrs gene,*** streptomycin-resistant isolate showed abnormal pcr-sscp fragments from both rpsl and rrs *** sensitivity of pcr-sscp was 93.3％ (56/60).conclusion the pcr-sscp that established in this study is a specific and sensitive method for rapid detection of the streptomycin-resistance associated mutations in rpsl and rrs genes of mtb.

关键词：分枝杆菌结核聚合酶链反应-单链构象多态性 rpsL基因 rrs基因链霉素抗药性突变

复合PCR-膜芯片技术对结核分枝杆菌链霉素耐药性的快速检测

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中国抗生素杂志 2004年第5期29卷 303-306页

作者：梁建琴吴雪琼曹立雪李洪敏张俊仙解放军第三零九医院结核病研究中心北京100091

目的　应用复合聚合酶链反应 (复合 PCR) -膜芯片技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 ( SM)的耐药性。方法　设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐 SM基因 rps L和 rrs的寡核苷酸探针制作膜芯片 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的 rps L和 ... 详细信息

目的　应用复合聚合酶链反应 (复合 PCR) -膜芯片技术快速检测结核分枝杆菌对链霉素 ( SM)的耐药性。方法　设计与合成用于检测结核分枝杆菌耐 SM基因 rps L和 rrs的寡核苷酸探针制作膜芯片 ,与结核分枝杆菌分离株生物素标记的 rps L和 rrs基因复合 PCR产物进行反向斑点杂交 ,并与 PCR-单链构象多态性 ( PCR- SSCP)和 PCR-直接测序 ( PCR- DS)结果比较。结果　 5 2株结核分枝杆菌临床分离株中 ,9株敏感株rps L和 rrs基因的 SSCP图谱、膜芯片杂交结果与标准株完全相同 ;4 3株耐 SM菌株中 ,33株存在 rps L 基因4 3位密码子 AAG→ AGG突变 ,5株有 rrs基因 5 13位 A→C突变 ,1株有 rrs基因 5 13位 A→ T突变 ,突变率为 90 .7%。结论　膜芯片技术检测结核分枝杆菌耐 SM基因型灵敏度高、特异性强、简便、快速。

关键词：结核分枝杆菌链霉素 rpsL基因 rrs基因药物耐受性聚合酶链反应膜芯片

贵州地区2017—2020年结核分枝杆菌卷曲霉素耐药与相关基因突变关系

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中国感染控制杂志 2023年第1期22卷 7-13页

作者：李秋阳曾强林陈小菊陈玲成都大学附属医院呼吸与危重症医学科四川成都610081 遵义医科大学附属医院呼吸与危重症医学科结核病区贵州遵义563000

目的检测结核分枝杆菌(***)对卷曲霉素(CM)耐药相关基因突变情况,探究基因型与表型的关联,为临床使用CM提供指导。方法收集2017—2020年某院痰抗酸染色阳性的肺结核病患者痰标本,培养获得临床分离***,药物敏感试验(DST)明确菌株耐药表型... 详细信息

目的检测结核分枝杆菌(***)对卷曲霉素(CM)耐药相关基因突变情况,探究基因型与表型的关联,为临床使用CM提供指导。方法收集2017—2020年某院痰抗酸染色阳性的肺结核病患者痰标本,培养获得临床分离***,药物敏感试验(DST)明确菌株耐药表型;提取DNA送全基因组测序(WGS),检测CM耐药相关基因tly A、rrs、rps L、eis、Rv0194及Rv1258C的突变情况,探索CM与利福平(RIF)表型耐药相关性。结果共培养123株***,WGS检出6个CM耐药相关基因共23个非同义突变位点;DST结果显示52例RIF耐药,4例CM、RIF均耐药。CM耐药菌株检出rrs基因A1401G、rps L基因A128G以及Rv0194基因C3293T和T221C非同义突变位点;CM与RIF耐药相关性分析显示,差异有统计学意义(Prrs基因A1401G、rps L基因A128G和Rv0194基因C3293T突变有关,CM存在与RIF交叉耐药可能,在制定抗结核治疗方案时可作参考。

关键词：卷曲霉素耐药结核病基因突变全基因组测序 rrs基因 rps L基因