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rpos基因在肠杆菌CGMCC 5087响应环境胁迫中的功能

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微生物学通报 2021年第1期48卷 104-112页

作者：包文智李兴张海波峥嵘刘丽娟内蒙古师范大学生命科学与技术学院内蒙古呼和浩特010020 中国科学院青岛生物能源与过程研究所山东青岛266100

【背景】苯乙醇(2-Phenylethanol,2-PE)是一种具有玫瑰香气味的高级香料添加剂,被广泛应用于香水、化妆品、食品和医药等领域。目前,利用工程菌合成苯乙醇有很好的应用前景。我们分离到一株肠杆菌(Enterobacter sp.) CGMCC 5087,其可以... 详细信息

【背景】苯乙醇(2-Phenylethanol,2-PE)是一种具有玫瑰香气味的高级香料添加剂,被广泛应用于香水、化妆品、食品和医药等领域。目前,利用工程菌合成苯乙醇有很好的应用前景。我们分离到一株肠杆菌(Enterobacter sp.) CGMCC 5087,其可以通过苯丙酮酸途径合成2-PE。然而该菌的生长受到不同环境因素导致的胁迫,进而影响苯乙醇的产量。rpos作为一种稳定期σ因子和压力应答过程中的主要调节因子,在细菌抗环境胁迫生长中起重要作用。【目的】阐明肠杆菌CGMCC 5087中rpos基因在多种环境胁迫中的作用,掌握该菌在不同环境胁迫下的生物学特性。【方法】使用CRISPR基因编辑技术敲除rpos基因,通过质粒表达系统构建互补菌株,检测rpos基因缺失株Δrpos与野生型WT菌株和互补菌株Δrpos(rpos)在高渗透压、高温、低pH和氧化应激环境下的生长情况,并进行统计学分析。【结果】rpos基因的缺失显著降低了肠杆菌CGMCC 5087的生长。在5%NaCl和pH 5.0胁迫条件下,rpos基因的缺失导致肠杆菌CGMCC 5087的耐受性显著降低。在42℃高温条件下,rpos基因的缺失导致肠杆菌CGMCC 5087在对数期的耐受性显著降低,而在衰退期的耐受性增强。1 mmol/L H2O2氧化胁迫条件下,rpos基因的缺失导致肠杆菌CGMCC 5087的延滞期延长,而进入稳定期后rpos基因突变株耐受性较野生型菌株明显增强。【结论】在肠杆菌CGMCC 5087中,rpos在抵抗多种环境压力中均具有重要作用,而且在菌株不同的生长时期对于环境胁迫的应答也有所不同,为进一步了解肠杆菌CGMCC 5087的生物学特性、掌握rpos在肠杆菌CGMCC 5087合成苯乙醇过程中的作用机制提供基础。

关键词：肠杆菌CGMCC 5087 基因敲除 rpos基因环境胁迫

鳗弧菌rpos基因克隆及在大肠杆菌中的表达

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中国海洋大学学报（自然科学版） 2009年第S1期39卷 133-137页

作者：马莉陈吉祥刘瑞魏鉴腾姜荧安中国海洋大学海洋生命学院山东青岛266003

鳗弧菌是海水鱼类弧菌病的重要病原,弧菌病的发生及流行与该菌在环境中的生存密切相关。rpos因子是细菌RNA聚合酶的主要组成部分,能够调控细胞对不良环境的抵抗和适应能力。本文从鳗弧菌W-1基因组DNA扩增1 002 bp的特异性片段,序列分析... 详细信息

鳗弧菌是海水鱼类弧菌病的重要病原,弧菌病的发生及流行与该菌在环境中的生存密切相关。rpos因子是细菌RNA聚合酶的主要组成部分,能够调控细胞对不良环境的抵抗和适应能力。本文从鳗弧菌W-1基因组DNA扩增1 002 bp的特异性片段,序列分析表明含有完整的rpos基因阅读框,编码333个氨基酸残基的蛋白质。与其他鳗弧菌菌株的rpos基因序列相似性为100%,与霍乱弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、溶藻胶弧菌rpos基因的序列相似性分别为78%,77%,77%,76%,75%,与大肠杆菌的序列相似性为71%。将该基因克隆于表达质粒pET-24d(+),在大肠杆菌中表达,用镍亲和层析柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的蛋白为单一条带,蛋白分子量约42 kDa,与理论分析值相近。研究结果为探索鳗弧菌对自然环境的适应及疾病发生机制提供了依据。

关键词：鳗弧菌 rpos基因克隆表达纯化

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假结核耶尔森氏菌rpos基因的抗胁迫功能

西北农业学报 2016年第2期25卷 291-297页

作者：关景元宋云洪李长富王瑶西北农林科技大学生命科学学院陕西杨凌712100

为探讨食源性病原微生物假结核耶尔森氏菌的抗逆机制,采用同源重组原理进行双交换以获得rpos基因突变株。分别在5mmol/L H_2O_2和pH 3.5两种胁迫下测定野生型菌株、rpos基因突变株和互补菌株的存活率,并以2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DC... 详细信息

为探讨食源性病原微生物假结核耶尔森氏菌的抗逆机制,采用同源重组原理进行双交换以获得rpos基因突变株。分别在5mmol/L H_2O_2和pH 3.5两种胁迫下测定野生型菌株、rpos基因突变株和互补菌株的存活率,并以2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH-DA)为荧光探针,测定两种胁迫下细菌胞内活性氧水平。结果显示,在5mmol/L H_2O_2和pH3.5胁迫下,假结核耶尔森氏菌rpos基因突变株存活率明显降低,这种降低能够在互补菌株中得到恢复;突变株中胞内活性氧自由基水平明显高于野生型菌株和互补菌株。说明:rpos基因具有帮助假结核耶尔森氏菌抗氧化胁迫和酸胁迫的功能,且这一功能的发挥是通过调节胞内活性氧水平实现的。

关键词：假结核耶尔森氏菌 rpos基因抗胁迫活性氧水平

肠炎沙门氏菌rpos基因缺陷株的构建及其生长特性观察

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中国病原生物学杂志 2013年第8期8卷 690-694页

作者：曾红亮曾庆梅乔向欣杨晋刘坤合肥工业大学农产品生物化工教育部工程研究中心安徽合肥230009

目的利用λ-red同源重组系统构建食源性肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)CICC21482rpos基因缺陷株SE/⊿rpos,观察其在胁迫环境中的生长特性,以探讨rpos基因的生物学作用。方法通过PCR扩增两侧为肠炎沙门氏菌rpos基因同源臂,中... 详细信息

目的利用λ-red同源重组系统构建食源性肠炎沙门氏菌(Salmonella enteritidis,SE)CICC21482rpos基因缺陷株SE/⊿rpos,观察其在胁迫环境中的生长特性,以探讨rpos基因的生物学作用。方法通过PCR扩增两侧为肠炎沙门氏菌rpos基因同源臂,中间为卡那霉素抗性基因(kmr)的打靶片段,再电击转入含质粒pkD46的肠炎沙门氏菌中,替换rpos基因,筛选阳性转化子SE/⊿rpos并用PCR法验证。结果成功构建了肠炎沙门氏菌rpos基因缺陷株。在常规LB培养基中37℃培养的缺陷株和野生株生长曲线差异无统计学意义(P>0.05);SE/⊿rpos菌株在45℃、2%NaCl和pH4.0应激条件下的生存能力较野生株弱(Prpos基因缺陷株。该基因在肠炎沙门氏菌克服高温、高渗、酸应激时被诱导表达从而发挥作用。此结果为进一步研究rpos基因在应激过程中的作用机制提供了基础资料。

关键词：肠炎沙门氏菌 λ-red重组系统 rpos基因基因敲除生长特性

肠炎沙门氏菌rpos基因缺陷株的构建及其特性研究

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肠炎沙门氏菌rpoS基因缺陷株的构建及其特性研究

作者：曾红亮合肥工业大学

学位级别：硕士

肠炎沙门氏菌（Salmonellaenteritidis，S.E.）是一种极易感染乳制品、肉类和鱼类等食品的肠道致病菌，在生长繁殖，食品加工及感染宿主等过程中，因应答各种应激环境而导致一种损伤亚致死状态菌的存在，一段时间后恢复其生物活性，留... 详细信息

肠炎沙门氏菌（Salmonellaenteritidis，S.E.）是一种极易感染乳制品、肉类和鱼类等食品的肠道致病菌，在生长繁殖，食品加工及感染宿主等过程中，因应答各种应激环境而导致一种损伤亚致死状态菌的存在，一段时间后恢复其生物活性，留下极大的食品安全隐患。由于有关S.E.的压力应答机制和损伤修复机理研究较少，难以检测这种状态的菌。S.E.应答应激条件时会启动相应的调控因子调节一些基因的表达，以适应新环境。S因子就是这样一种控制着稳定期与逆境胁迫相关的多种基因表达的转录调控因子，但是其作用机制比较复杂。本研究利用λ-Red同源重组技术构建肠炎沙门氏菌rpos基因定点缺陷株，考察了野生株与缺陷株在高温、酸、高渗透压及过氧化氢等应激条件下的生存能力，同时比较两者超高压处理时的应激应答和损伤后的修复情况，初步研究了rpos基因在胁迫环境下所发挥的作用及参与应激应答的调控情况，为深入了解S因子应激应答的作用机制和S.E.的损伤修复机理奠定基础。主要研究结果如下：1）利用λ-red同源重组系统成功敲除了肠炎沙门氏菌的rpos基因，构建了rpos基因缺陷株—S.E./⊿rpos菌株;2）在LB培养基37℃培养时，野生株和S.E./⊿rpos菌株的生长情况几乎无显著性差异（P>0.05）;在45℃、pH4.0、2%NaCl和1mMH2O2应激环境下，S.E./⊿rpos菌株的生存能力明显比野生株要差，且两者具有差异显著性（Prpos基因缺失对肠炎沙门氏菌生存能力的影响不明显，但是在S.E.应对上述胁迫环境时，S因子参与了相应的应答调控并发挥着重要的作用;3）超高压处理中，压力因素是使S.E.损伤或致死的主要因素;比较野生株和S.E./⊿rpos菌株的高压应激结果表明：S因子在S.E.应答高压应激时也可能参与调控并发挥作用;采用覆盖法修复超高压损伤菌时发现：野生株修复时间为2h，而S.E./⊿rpos菌株的修复时间为5h，即野生株的修复能力强于S.E./⊿rpos菌株，说明rpos基因的缺失对S.E.的修复能力影响显著。

关键词：肠炎沙门氏菌 rpos基因基因敲除应激应答超高压

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假结核耶尔森氏菌中rpos基因的功能研究

假结核耶尔森氏菌中rpoS基因的功能研究

作者：关景元西北农林科技大学

学位级别：硕士

rpos,又叫σS因子,是rpos基因的编码产物。rpos作为稳定期的σ因子和压力应答过程中的主要调节因子,能够调控细菌体内大量基因的表达,并且这些基因主要是与抗环境胁迫相关的基因。然而,在不同细菌中rpos的功能似乎存在一定差别。例如,... 详细信息

rpos,又叫σS因子,是rpos基因的编码产物。rpos作为稳定期的σ因子和压力应答过程中的主要调节因子,能够调控细菌体内大量基因的表达,并且这些基因主要是与抗环境胁迫相关的基因。然而,在不同细菌中rpos的功能似乎存在一定差别。例如,在大肠杆菌(Escherichia coli)中,rpos对于细菌鞭毛的形成具有重要的调节作用。而在迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)中,rpos对生物膜的形成具有一定的影响。在抵御外界环境胁迫的过程中,细菌VI型分泌系统、鞭毛及生物膜等可作为细菌的压力应答机制,对细菌起到保护作用。且有报道指出,生物膜是导致病原菌突破宿主细胞防御机制并引发感染的重要原因。本研究中假结核耶尔森氏菌(Yersinia pseudotuberculosis)属于耶尔森氏菌属,是一种革兰氏阴性肠道致病菌,为人畜共患菌种。作为一种病原菌,其首先要克服的就是宿主细胞的防御机制,之后才能发挥致病功能。然而目前为止,假结核耶尔森氏菌的致病机制尚未完全阐明。基于以上研究背景,本研究构建了rpos基因突变株及互补菌株,检测了假结核耶尔森氏菌中rpos基因的生理功能,包括在多种环境胁迫中的作用,对T6SS表达的调控,对鞭毛的调节作用以及对生物膜形成的影响。研究结果显示,在细菌对环境的适应方面,rpos具有重要的调节作用。具体结果为:(1)通过构建假结核耶尔森氏菌rpos基因突变株与互补菌株,研究在1.5mM H2O2、pH4.0、0.5M NaCl和42℃胁迫条件下rpos的功能。发现在这四种胁迫条件下,rpos基因突变株的存活率较野生型菌株明显降低。说明在假结核耶尔森氏菌中,rpos在抵抗多种环境压力中均具有重要的作用。(2)利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)手段检测rpos基因突变体中9种已知的压力应答相关基因的转录水平,结果显示,除gadA基因外,其余8种基因的转录均受到rpos的正调节。该结果进一步说明rpos可能是通过调节细胞内一些压力应答相关基因的表达而在细菌抗胁迫中发挥功能的。(3)通过β-半乳糖苷酶活性测定实验,发现在rpos基因突变体中第四套VI型分泌系统(T6SS4)的启动子活性明显降低。且qRT-PCR结果显示,rpos基因缺失将导致T6SS4的关键组分clpV4,hcp4,vgrG4基因的转录水平降低。凝胶迁移阻滞实验结果进一步证实,rpos对于T6SS4的调控是直接的。(4)对细菌的泳动情况进行观察发现,rpos对细菌的运动具有正调节作用,并且β-半乳糖苷酶活性测定结果进一步说明rpos能够激活鞭毛一级调控基因flhDC的表达。(5)对线虫体表生物膜形成的情况进行统计分析,结果显示rpos对于生物膜的形成具有正调节作用。(6)通过对胞外多糖含量的测定及对多糖合成基因hmsHFRS的启动子活性进行测定发现,rpos能够控制胞外多糖的合成,进而影响假结核耶尔森氏菌生物膜的形成。

关键词：假结核耶尔森氏菌 rpos基因细菌VI型分泌系统生物膜鞭毛

鳗弧菌rpos基因的表达、突变及其特性研究

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鳗弧菌rpoS基因的表达、突变及其特性研究

作者：马莉中国海洋大学

学位级别：硕士

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是一种弯曲杆状、具有极生鞭毛的革兰氏阴性菌。广泛存在于沿岸海水、沉积物和海洋动物中,能引起世界范围内的40多种海水、淡水鱼及其他养殖动物发生弧菌病。鳗弧菌也是我国海水养殖动物的重要条件致病菌,鳗... 详细信息

鳗弧菌(Vibrio anguillarum)是一种弯曲杆状、具有极生鞭毛的革兰氏阴性菌。广泛存在于沿岸海水、沉积物和海洋动物中,能引起世界范围内的40多种海水、淡水鱼及其他养殖动物发生弧菌病。鳗弧菌也是我国海水养殖动物的重要条件致病菌,鳗弧菌大面积的感染给养殖业带来了巨大的经济损失。已发现多种鳗弧菌的毒力因子,如铁载体、外膜蛋白、溶血素、脂多糖、细胞毒素等跟致病性有关,但鳗弧菌的致病机理目前还不是完全清楚。在自然环境下,细菌要面临高温、饥饿、高渗透压、氧胁迫等不良的环境压力。细菌的应激反应过程比较复杂,涉及多种基因的调控。rpos基因编码rpos蛋白,又称为σS或σ38,它是RNA聚合酶的一种σ因子。当进入稳定生长期的细菌受到环境压力时,依赖于DNA的RNA聚合酶亚基σS是一个主要的调控子,能够增强细胞对外界不良环境的抗逆性和适应能力。当rpos基因突变后,大肠杆菌对各种胁迫因子如饥饿、H2O2、高渗透压及低pH等的敏感性增强,研究表明在稳定期的大肠杆菌中,rpos直接或间接调控接近200个蛋白。从鳗弧菌W-1基因组DNA克隆了1002 bp的特异性片段,含有完整的rpos基因阅读框,编码333个氨基酸残基的蛋白质。与国外已发表的鳗弧菌rpos基因的序列相似性为100%,与霍乱弧菌、副溶血弧菌、哈维氏弧菌、创伤弧菌、溶藻胶弧菌的氨基酸序列相似性分别为78%,77%,77%,76%,75%,与大肠杆菌的氨基酸序列相似性为71%。将该基因克隆于表达质粒pET-24d(+)并在大肠杆菌中表达,用镍亲和层析柱纯化表达蛋白,SDS-PAGE分析表明纯化的蛋白为单一条带,蛋白分子量约42 kDa。用PCR扩增鳗弧菌rpos基因开放阅读框中的120～537大小为468 bp的部分同源片段,扩增片段经纯化后克隆入pUCm-T质粒,再将目的基因片段酶切分离后连接到自杀质粒pNQ705,转化大肠杆菌SY327,在含氯霉素的LB平板上筛选阳性克隆,再将重组质粒转入供体菌大肠杆菌S17-1。构建接合供体菌S17-1/pR3。该菌与野生型鳗弧菌W-1发生接合,经过同源重组,自杀质粒插入鳗弧菌rpos基因而使其失活,用含有氯霉素的TCBS培养基筛选得到鳗弧菌rpos基因突变株。研究了鳗弧菌rpos基因突变株的性质及对高渗透压、过氧化氢、热激、紫外辐射等环境应激的抵抗力。结果发现鳗弧菌rpos基因突变株对氧化应激和高温的耐受性明显降低。5 mM H2O2作用1 h后,野生菌株的存活率为0.01%,而突变菌株的存活率为0.001%,与野生菌株相比降低了10倍(p0.05)。高渗透压下4 h后野生菌株的存活率为0.025%,而突变菌株的存活率为0.0032%,比野生菌株相比降低了7.8倍(p>0.05)。将野生和突变株分别在低温寡营养条件下培养40天,野生株的可培细胞数从5.00×107 mL-1较低到5.30×104 mL-1,突变株的可培养细胞数由5.73×106 mL-1降低到2.20×104 mL-1,二者之间差异不明显(p>0.05)。研究了鳗弧菌rpos基因突变株胞外酶活力的变化,结果发现突变株的胞外总蛋白酶含量和过氧化氢酶活力分别是野生株的75.15% (prpos基因突变株对斑马鱼的致病性,结果发现野生菌株和突变菌株半数致死量(LD50)分别是8.66×104CFU/mL和2.55×106 CFU/mL,表明rpos因子在鳗弧菌致病性方面发挥重要的作用。

关键词：鳗弧菌 rpos基因突变环境应激致病性

水产病原非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫下的生理响应及rpos基因环境胁迫下的表达分析

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水产病原非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫下的生理响应及rpoS基因环...

作者：陈启运扬州大学

学位级别：硕士

非O1/O139群霍乱弧菌（non-O1/O139 Vibrio cholerae）广泛存在于各种水环境中,尤其是内陆水域和近海养殖水域,是多种水产动物的重要致病菌。与许多细菌类似,非O1/O139群霍乱弧菌常常会经历饥饿和其它一些逆境的胁迫,但其可通过改变其... 详细信息

非O1/O139群霍乱弧菌（non-O1/O139 Vibrio cholerae）广泛存在于各种水环境中,尤其是内陆水域和近海养殖水域,是多种水产动物的重要致病菌。与许多细菌类似,非O1/O139群霍乱弧菌常常会经历饥饿和其它一些逆境的胁迫,但其可通过改变其自身的生理、形态以及调整基因表达来适应环境变化,并在不良环境下抵抗压力长期存活,从而导致水产养殖动物的弧菌病持续反复暴发。rpos已经被证实是许多弧菌一般胁迫反应的主要调控因子,rpos基因是细菌在胁迫条件下存活的相关基因。本文通过对非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫下生理生化特性、基因表达变化及重要抗胁迫基因rpos的研究,探索非O1/O139群霍乱弧菌对不良环境的适应性及其机制。主要研究结果如下:1.通过对非O1/O139群霍乱弧菌GXFL1-4进行为期6个月的饥饿胁迫,开展其胁迫后存活能力、运动力、形态变化、胞外酶活性、毒力和代谢相关基因以及致病性等生理生化表型的测定。结果表明,非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫后的可培养细菌数总体上呈下降趋势,胁迫6个月后,细菌菌落数下降至4.63±0.10Log CFU/mL,且动力下降,但仍然具有可培养性;通过扫描电镜观察了细菌形态变化,发现非O1/O139群霍乱弧菌GXFL1-4由短杆状变化为类球形,同时菌体表面变得粗糙且皱缩;毒力因子检测结果表明,细菌饥饿胁迫前后均能产生出酪蛋白酶、明胶酶、脂酶、卵磷脂酶、淀粉酶和β-溶血素活性;毒力及代谢相关基因的检测结果表明,菌株饥饿胁迫前后均携带金属蛋白酶（mp）、外膜蛋白（ompU）、溶血素（hlyA）、葡萄糖异构酶（galE）、DNA结合反应器（phoB）和荚膜多糖生物合成的糖基转移酶（vpsL）等共15个基因;人工感染实验表明,非O1/O139群霍乱弧菌GXFL1-4野生株与胁迫株对罗氏沼虾幼体的半数致死量（LD50）分别为 7.589×106CFU/mL 和 1.881×107 CFU/mL,表明非 O1/O139群霍乱弧菌胁迫后仍具有较强的致病性。2.为了揭示非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫下持久存活的机制,筛选抗胁迫相关基因及生化代谢和信号转导途径,本文对非O1/O139群霍乱弧菌GXFL1-4野生株与饥饿胁迫6个月的菌株进行转录组测序,共获得了 371个差异表达基因,包括191个上调基因,180个下调基因。其中flgO、flgI、flgB等鞭毛组装相关基因表达水平显著下降,与细菌细胞能动性相关;rpos、rpoD、rpoN、rpoE等基因与细菌抗逆境胁迫相关显著上调表达;差异基因GO富集分析发现,涉及抗饥饿胁迫的显著富集的条目有信号传导、离子跨膜运输等。差异基因KEGG富集分析发现,双组分系统、鞭毛组装、细菌趋化性、柠檬酸循环等通路与细菌抗逆生存相关。研究结果表明,非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫6个月后,通过调节细菌生存、鞭毛组装、物质代谢与能量交换等相关基因的表达抵抗饥饿胁迫。3.为了进一步确定rpos基因对非O1/O139群霍乱弧菌逆境生存的影响,通过qRT-PCR测定了 rpos基因在温度、盐度、营养、酸、碱环境胁迫下的表达变化。结果显示,在为期28天的饥饿胁迫下,rpos基因表达量显著上调;非O1/O139群霍乱弧菌在不同梯度的酸碱条件下胁迫30min后,rpos基因在酸性条件下表达显著上调,而在碱性条件下受到抑制;在盐胁迫中,发现非O1/O139群霍乱弧菌积极响应不同盐度的胁迫,poS基因在高渗条件下表达显著上调;此外,针对不同的温度胁迫,rpos基因在高温条件下显著上调。以上结果表明,rpos基因在参与非O1/O139群霍乱弧菌高温、高渗、饥饿、酸性环境生存中发挥了重要的作用。本论文研究了水产病原非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫下的生理响应及基因表达变化,揭示了其通过调整自身细胞形态以及rpos等抗胁迫基因的表达以抵抗饥饿胁迫,并持久存活造成水产动物疾病的反复爆发,研究结果为有效控制非O1/O139群霍乱弧菌的传播与感染提供理论基础。

关键词：非O1/O139群霍乱弧菌饥饿胁迫转录组分析 rpos基因

伤寒沙门菌rpos基因缺陷变异株的生物学特性研究

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中华临床感染病杂志 2010年第3期3卷 170-172,175页

作者：杜鸿周慧琴朱雪明苏州大学附属第二医院检验科 215004

目的研究rpos基因在应激环境下的生物学作用,为临床预防和治疗伤寒沙门菌感染提供可能的靶基因.方法利用原核生物基因同源重组技术制备伤寒沙门菌rpos基因缺陷变异株.绘制生长曲线,对比rpos基因缺陷变异株与野生株在等渗条件和酸应激... 详细信息

目的研究rpos基因在应激环境下的生物学作用,为临床预防和治疗伤寒沙门菌感染提供可能的靶基因.方法利用原核生物基因同源重组技术制备伤寒沙门菌rpos基因缺陷变异株.绘制生长曲线,对比rpos基因缺陷变异株与野生株在等渗条件和酸应激（pH 4.2）、高渗应激（NaCl 300 mmoL/L）、胆汁应激（脱氧胆酸钠终浓度为1.5 mmoL/L）及氧应激（1 mmol/L H2O2）条件下的生长能力,采用t检验进行统计学分析.结果成功制备伤寒沙门菌rpos基因缺陷变异株.与野生株相比,rpos基因缺陷变异株在酸应激、高渗应激和氧应激条件下的生存能力明显降低（4 h时的t值分别为12.864、3.594和12.979,14 h时的t值分别为6.497、3.039和10.440,P值均〈0.05或〈0.01）.结论 rpos基因在伤寒沙门菌克服酸、高渗和氧应激时发挥着重要的作用,可以作为临床预防和治疗沙门菌感染的靶基因.

关键词：沙门菌,伤寒 rpos基因生长曲线靶基因