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rolb/C基因对颠茄托品烷生物碱合成能力的影响

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rolB/C基因对颠茄托品烷生物碱合成能力的影响

作者：路星星贵州大学

学位级别：硕士

rol基因被作为提高植物次生代谢的靶基因被广泛研究,其中rolb和rolC基因作为rol基因家族中的强效靶基因,在不同植物中促进效果也各有差异,因此,不同的植物存在不同的主效rol基因,而且不同rol基因之间也存在一定的相互影响。本研究以颠茄... 详细信息

rol基因被作为提高植物次生代谢的靶基因被广泛研究,其中rolb和rolC基因作为rol基因家族中的强效靶基因,在不同植物中促进效果也各有差异,因此,不同的植物存在不同的主效rol基因,而且不同rol基因之间也存在一定的相互影响。本研究以颠茄(Atropa belladonna L.)为实验材料,构建超表达rolb基因和共表达rolb和rolC基因的植物表达载体,通过遗传转化获得转基因颠茄,再结合实验室前期获得的超表达rolC基因的p BI121-rolC颠茄,通过分析3种转基因颠茄的园艺性状、托品烷生物碱(tropane alkaloids,TAs)含量、TAs合成途径基因表达量以及HO和NO含量,以此探究rolb和rolC基因对颠茄TAs含量的影响以及rolb和rolC基因之间的相互影响,为探究rol基因调控次生代谢产物的合成机制奠定基础,也为进一步研究促进颠茄托品烷类生物碱的合成代谢工程提供一种新方法。研究结果如下:(1)超表达rolb、rolC基因植株的建立和分子检测:本研究构建了超表达rolb基因的植物表达载体p BI121-rolb和共表达rolb和rolC基因的植物表达载体p1305NKB+121C,并通过农杆菌侵染颠茄子叶及下胚轴,获得了超表达rolb基因的p BI121-rolb颠茄和共表达rolb和rolC基因的p1305NKB+121C颠茄,再结合实验室前期获得的超表达rolC基因的p BI121-rolC颠茄作为后续研究材料。(2)rol基因对颠茄园艺性状的影响:p BI121-rolb颠茄呈现叶片呈深绿色、叶片面积增加、花型增大且偏向坛形花冠、雌蕊高度降低、花粉可育但活力下降、根系发达、茂密等表型;p BI121-rolC颠茄呈现顶端优势下降、开花时间提前、花朵数量增多、花形变小、花粉不可育、腋芽茂盛、节间缩短、叶片呈浅绿色且为狭长叶、根系发达等表型;P1305NKB+121C颠茄表型更偏向p BI121-rolC颠茄,但花形、叶片、株高更小,分支数、叶片数更多,根系提前衰老,其余表型与p BI121-rolC颠茄一致。园艺性状分析结果表明,外源引入rolb和rolC基因均会造成颠茄植株地上部分和地下部分发育变异。(3)rol基因对颠茄中TAs含量的影响:p BI121-rolb颠茄茎中东莨菪碱、山莨菪碱和莨菪碱含量分别提高了1.44～1.86倍、1.49～2.87倍和4.49～4.77倍,而叶中的生物碱含量与野生型颠茄相比无显著差异。p BI121-rolb颠茄叶中东莨菪碱、山莨菪碱和莨菪碱含量分别提高了1.54～2.70倍、1.90～2.93倍和1.44～1.73倍,而在茎中仅有C-1株系TAs含量显著高于对照,其含量分别提高了3.65、4.66和6.35倍。而p1305NKB+121C颠茄叶中TAs含量与野生型颠茄无显著差异,茎中除BC-2株系外,其余株系与野生型也无显著性差异。BC-2株系的东莨菪碱、山莨菪碱和莨菪碱含量分别提高了2.5倍、3.39倍和5.04倍。分析结果表明,rolb和rolC基因均会增加颠茄中TAs含量。rolb基因主要促进了颠茄茎中TAs的积累,而rolC基因主要促进了颠茄叶中TAs的积累,且rolC基因的促进作用整体大于rolb基因,但rolb和rolC基因同时作用对颠茄TAs含量提高不显著。因此,rolC基因为颠茄的主效基因,且rolb基因的引入在一定程度上削弱了rolC基因对颠茄TAs含量的促进作用。(4)TAs合成途径基因表达量分析:在p BI121-rolb颠茄和p BI121-rolC颠茄根系中TAs合成途径基因UGTⅠ和H6H表达量显著上调,TRⅡ表达量显著下调。在p BI121-rolb颠茄中UGTⅠ和H6H表达量分别上调14.30和11.80倍,而TRⅡ表达量下调5.71倍。在p BI121-rolC颠茄中UGTⅠ和H6H分别上调55.63和11.53倍,而TRⅡ表达量下调7.35倍。在p1305NKB+121C颠茄各株系中UGTⅠ、H6H和TRⅡ表达量均不一致。分析结果表明,rolb和rolC基因主要是通过上调UGTⅠ和H6H表达水平和下调TRⅡ表达水平从而提高颠茄TAs含量。(5)颠茄中HO和NO含量分析:本研究为了探究rol基因调控TAs积累的机制,检测了3种转基因颠茄中的HO和NO含量。发现rolb基因和rolC基因的引入并不会导致颠茄中HO和NO含量发生显著变化。因此,分析结果表明,rolb基因和rolC基因并未通过HO和NO作为信号分子以此提高颠茄中的TAs含量。综上所述,单独引入或共同引入rolb和rolC基因均会造成颠茄地上和地下部分发育变异,但单独引入rolb和rolC基因可上调UGTⅠ和H6H基因表达水平以及下调TRⅡ基因表达水平,从而提高颠茄TAs含量。虽然rolb和rolC基因均能够提高颠茄中TAs含量,但rolC基因对颠茄

关键词： rolb基因 rolC基因托品烷生物碱颠茄

rolb基因导入对农垦58S内源激素水平、株型和育性的影响

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作物学报 2004年第8期30卷 831-836页

作者：杨特武骆炳山杨业华郑用琏杨书化蔡明历华中农业大学植物科学技术学院华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室湖北武汉430070

对以农杆菌介导法获得的rolb转基因农垦 5 8S的研究表明 ,rolb能明显改变水稻内源激素水平。其中 ,叶片和长日照条件下幼穗IAA水平有明显升高 ,同时长日照条件下iPAs及GA含量也有不同程度增加 ,但ABA水平无明显改变。rolb对水稻株型有... 详细信息

对以农杆菌介导法获得的rolb转基因农垦 5 8S的研究表明 ,rolb能明显改变水稻内源激素水平。其中 ,叶片和长日照条件下幼穗IAA水平有明显升高 ,同时长日照条件下iPAs及GA含量也有不同程度增加 ,但ABA水平无明显改变。rolb对水稻株型有明显影响 ,表现为株型紧凑 ,叶片直立、深绿 ,多数后代株系分蘖减少 ,叶片和颖花等器官变小 ,库容受限 ;也发现部分株型有明显改良、但其他性状变化较小的株系。rolb基因还能导致农垦 5 8S长日照条件下不育性明显逆转、光敏性减弱 ,可能与内源激素水平改变有一定关系。

关键词： rolb基因农垦58S品种内源激素株型育性光敏核不系水稻

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rolb基因对三倍体毛白杨的转化研究

西北林学院学报 2011年第2期26卷 86-90页

作者：梁海永刘兴菊苏彦苹杨敏生河北农业大学林学院河北保定071000

为了提高三倍体毛白杨的生根能力,把rolb基因转入三倍体毛白杨中,获得20个转化植株,在无激素培养基上,转化植株的生根率达到100%,而未转化植株的生根率只有15%~20%。PCR扩增证明目的基因已经插入到植物的基因组中。对部分rolb基因转化... 详细信息

为了提高三倍体毛白杨的生根能力,把rolb基因转入三倍体毛白杨中,获得20个转化植株,在无激素培养基上,转化植株的生根率达到100%,而未转化植株的生根率只有15%~20%。PCR扩增证明目的基因已经插入到植物的基因组中。对部分rolb基因转化植株进行了GUS组织化学染色检测,转化植株叶片中有GUS活性的表达。

关键词： rolb基因三倍体毛白杨转化植株

外源rolb基因对已转Ri质粒的杨树苗期生长与光合特性的影响

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核农学报 2011年第1期25卷 32-36页

作者：张晓军郝宇梁海永杨敏生河北农业大学园林与旅游学院河北保定071000 河北农业大学林学院河北保定071000

为研究多拷贝rolb基因在转基因植物中的表达,对转入多拷贝rolb基因的三倍体毛白杨1年生植株进行了苗期生长、叶绿素含量及光合特性的测定。结果表明:rolb基因多拷贝株系和转Ri质粒三倍体毛白杨的苗高、节间距和地径(其中多拷贝株系863B... 详细信息

为研究多拷贝rolb基因在转基因植物中的表达,对转入多拷贝rolb基因的三倍体毛白杨1年生植株进行了苗期生长、叶绿素含量及光合特性的测定。结果表明:rolb基因多拷贝株系和转Ri质粒三倍体毛白杨的苗高、节间距和地径(其中多拷贝株系863B的地径与未转基因三倍体毛白杨一样)均低于未转基因三倍体毛白杨;rolb基因多拷贝株系与Ri质粒转化株系的苗高、节间距和地径的差异无规律性。rolb基因多拷贝株系和Ri质粒转化株系的叶绿素a、b、和a+b含量及净光合速率均低于未转基因三倍体毛白杨,其中01B组多拷贝株系的叶绿素a、b、和a+b含量均低于其Ri质粒转化株系,而63B组多拷贝株系与其Ri质粒转化株系之间的差异无规律性。rolb基因多拷贝株系与Ri质粒转化株系净光合速率的差异无规律性。对蒸腾速率、气孔导度和胞间CO2浓度进行比较,rolb基因多拷贝株系与未转基因三倍体毛白杨和Ri质粒转化株系差异均为无规律。

关键词：三倍体杨树 rolb基因 Ri质粒苗期生长光合特性

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毛白杨转rolb基因植株生根能力的研究

北京林业大学学报 2005年第5期27卷 54-58页

作者：熊瑾梁机陈晓阳李伟李慧刘莹北京林业大学生物科学与技术学院广西大学林学院

为了提高毛白杨的生根能力,把rolb基因转入毛白杨中,获得7个转化植株.在无激素培养基上,转化植株的生根率达到80%～100%,而未转化植株的生根率只有13%～20%.转化植株对生长素表现出高度的敏感性,当IBA浓度达1.0mgL时,转化植株的生根受... 详细信息

为了提高毛白杨的生根能力,把rolb基因转入毛白杨中,获得7个转化植株.在无激素培养基上,转化植株的生根率达到80%～100%,而未转化植株的生根率只有13%～20%.转化植株对生长素表现出高度的敏感性,当IBA浓度达1.0mgL时,转化植株的生根受到抑制.移栽后,1个转化株系的高生长明显低于对照,2个转化株系的茎节数比对照增加,3个转化株系的节间长比对照降低,其他转化植株与对照无明显差异.硬枝扦插试验结果进一步证实了转化植株扦插生根能力显著提高,扦插生根率达到74.4%～92.3%,根的数量也明显增加.

关键词： rolb基因毛白杨移栽硬枝扦插生根能力

根癌农杆菌介导的rolb基因转化烟草的研究

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根癌农杆菌介导的rolB基因转化烟草的研究

作者：刘莹中南林业科技大学

学位级别：硕士

本研究首先以烟草的带芽茎段为外植体进行不定芽的诱导分化、生长及生根成苗试验。在组织培养的各个阶段的培养基中,附加不同种类及不同质量浓度的激素组合,观察测量外植体在各种培养基中的生长情况,从中筛选出最优的激素配比培养基,从... 详细信息

本研究首先以烟草的带芽茎段为外植体进行不定芽的诱导分化、生长及生根成苗试验。在组织培养的各个阶段的培养基中,附加不同种类及不同质量浓度的激素组合,观察测量外植体在各种培养基中的生长情况,从中筛选出最优的激素配比培养基,从而建立了烟草的高效植株再生体系。在此基础上,将不同质量浓度梯度的卡那霉素加入叶片的愈伤组织及不定芽分化阶段的培养基中,观测卡那霉素对外植体生长的影响,以确定各阶段的最低致死质量浓度,用于烟草的遗传转化研究。然后对根癌农杆菌介导的rolb基因烟草的遗传转化的条件进行了深入探索,在对影响根癌农杆菌转化效率的多种因素比较研究后,发现选择合适的预培养天数、菌液浓度、侵染时间、共培养天数和抗生素的浓度均直接影响根癌农杆菌转化的效率。通过优化这些转化条件,建立了烟草遗传转化的系统。最后在此基础上,对转基因烟草进行PCR检测,验证rolb基因的插入情况。研究结果摘要如下：1.烟草组培再生体系的建立：消毒的最佳方法为先用75%酒精浸泡1min,再用0.1%氯化汞浸泡7min。最佳诱导不定芽的培养基为MS+6BA0.5mg/L+IBA0.1mg/L。生根培养的最佳培养基为1/2MS+NAA1.0mg/L。移栽炼苗以土壤：蛭石：珍珠岩=2：1：1作为最佳基质。2.烟草遗传转化体系的建立试验结果表明：烟草叶片预培养3d,将处于生长对数期的农杆菌菌液稀释30倍,侵染5min后,共培养3d,然后在含500mg/L羧苄青霉素、80mg/L卡那霉素的诱导分化培养基上进行筛选,长出抗性芽后再进行生根筛选,可获得高转化效率。本实验对根癌农杆菌转化条件进行了比较系统的研究,是为了建立转化效率高、稳定性好的烟草农杆菌转化技术体系。3.转基因植株的分子检测对烟草转化植株的检测主要采用PCR方法。以抗性植株的总DNA为模板,以未转化的植株为阴性对照,以质粒DNA为阳性对照,利用外源基因的特异引物进行PCR扩增。结果表明,转基因植株扩增的条带和质粒中的目的条带一致,而未转化植株没有扩增出任何条带,66.7%的抗性植株为PCR阳性植株,这就证明了rolb基因已转化并整合到烟草基因组中。最后再对转基因烟草及后代的表型形态和细胞学观察,证明外源基因已整合到烟草基因组中并能稳定遗传给下一代。

关键词：烟草 rolb基因转基因植株根癌农杆菌遗传转化遗传规律

核桃遗传转化体系的建立及rolb基因的导入

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核桃遗传转化体系的建立及rolB基因的导入

作者：李好先中国农业科学院

学位级别：硕士

核桃是一种难以生根的木本植物，且不同的品种间生根能力差异很大，这限制了苗木的工厂化生产和标准园种植，是核桃生产中迫切需要解决的关键问题，也是遗传改良的重要目标。本研究首先以“绿波”核桃的离体胚为材料进行无菌苗的培养，... 详细信息

核桃是一种难以生根的木本植物，且不同的品种间生根能力差异很大，这限制了苗木的工厂化生产和标准园种植，是核桃生产中迫切需要解决的关键问题，也是遗传改良的重要目标。本研究首先以“绿波”核桃的离体胚为材料进行无菌苗的培养，再以核桃茎段和叶片为外植体进行不定芽的诱导分化、生长发育及生根成苗试验。在不同的培养阶段采用不同的处理方法以及添加不同种类的不同质量浓度的植物生长调节剂组合，观察统计外植体材料在各个生长阶段和各种不同的培养基中的生长发育情况，筛选出最佳的处理方法和最优的激素配比，从而建立核桃的植株再生体系。在此基础上，在不定芽分化的培养基中添加不同浓度的卡那霉素和头孢噻肟霉素，观察抗生素对外植体生长的影响，以确定其最低致死质量浓度。然后构建植物表达载体，探讨农杆菌介导的rolb基因核桃的遗传转化条件，比较研究各种影响因素，选择合适的预培养时间、侵染时间、共培养时间和抗生素的浓度，建立核桃的遗传转化体系。最后，对筛选得到的转基因植株进行荧光蛋白检测和PCR检测，以验证rolb（root-inducing plasmid TL-DNA of locusB）基因的导入结果。研究结果和创新点如下： 1.核桃离体胚培养：经过75%酒精30s+0.1%HgCl2（加0.1%吐温-80）5min消毒处理后，离体胚培养的萌发率最高（68.49%），在DKW基本培养基上获得最高的萌发率（84.56%）;在离体胚培养的第10天-第15天之间萌发率最高，之后不再增加。 2.核桃茎段芽分化的最佳培养基组合是DKW+6-BA0.5mg/L+IBA0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂6.5g/L，再生率为2.96。 3.核桃无菌苗生根培养：采用“两步生根法”，在诱导生根阶段的黑暗处理6-8天之间最好，黑暗处理6天时生根率为65.31%;在生根发育阶段蔗糖含量和氮浓度分别为40g/L、1416mg/L，生根率分别53.26%和45.14%。 4.核桃叶片愈伤组织的培养：暗培养时间对叶片愈伤组织的形成影响较大，暗培养2周时叶片愈伤率可达100%，暗培养时间的增加（3周）会抑制叶片愈伤组织的形成;低浓度（2.0mg/L-4.0mg/L）TDZ促进叶片愈伤的形成，高浓度（8.0mg/L-12.0mg/L）的TDZ抑制叶片愈伤的形成，使愈伤组织的结构也变得更加疏松，同时也抑制了叶片和愈伤组织的褐化;生长素2,4-D、IBA和NAA对叶片愈伤组织的形成有积极的促进作用，但表现情况不同：低浓度（1.0mg/L）2,4-D促进叶片愈伤组织的形成，高浓度（2.0mg/L）抑制愈伤组织的形成;低浓度（0.01mg/L-0.5mg/L）的IBA有利于叶片愈伤组织的形成，高浓度（1.0mg/L）IBA不利于愈伤组织的形成;NAA在本试验浓度范围内（0.1mg/L-0.5mg/L）一直促进愈伤组织的形成。 5. rolb基因植物表达载体的构建：通过NCBI GenBank查找发根农杆菌Ri质粒上的rolb基因cDNA序列，合成并修饰目的基因片段，限制性内切酶EcoRⅠ和BmaHⅠ进行双酶切质粒DNA，与带有标记基因YFP的表达载体PEZR(K)-LNY相连接，转化大肠杆菌感受态细胞，获得含有启动子CaMv35S的重组质粒。经过对重组质粒进行PCR和EcoRⅠ和BmaHⅠ双酶切鉴定，均获得825bp的目的片段，证明rolb基因的植物表达载体构建成功。 6.利用农杆菌介导法转化核桃，结果表明：预培养10和15天后进行侵染，转化率达到3%和1.33%;用kan筛选不定芽，当kan质量浓度为0mg/L时，不定芽的诱导率达到90%，当kan质量浓度为100mg/L时，仅有极少数的不定芽的产生，且茎段逐渐黄化;当kan质量浓度为200mg/L和400mg/L时，外植体全部黄化死亡。因此，可用于转基因植株的筛选。以kan质量浓度为100mg/L作为常用的选择水平。 7.转基因植株的鉴定：转化植株经过100mg/L kan和500mg/L cef筛选后，利用激光共聚焦显微镜对转化植株的活体叶片进行照射观察，可以看到细胞内有绿色荧光蛋白表达;经过进一步PCR扩增检测后，结果显示3株转化株系扩增出的特异性条带和阳性对照一致，说明外源基因已经整合到核桃基因组中。

关键词：核桃植株再生叶片培养 rolb基因农杆菌介导法

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转rolb基因毛白杨植株性状变异的研究

转rolB基因毛白杨植株性状变异的研究

作者：熊瑾北京林业大学

学位级别：硕士

毛白杨（Populus tomentosa）是我国特有的珍贵乡土树种,具有生长快、寿命长、树干通直、材质好等特点,是优良的工业用材树种和防护林树种。但毛白杨的插穗生根困难,扦插成活率低,成为毛白杨新品种不能大规模进入产业化,不易发展毛白杨... 详细信息

毛白杨（Populus tomentosa）是我国特有的珍贵乡土树种,具有生长快、寿命长、树干通直、材质好等特点,是优良的工业用材树种和防护林树种。但毛白杨的插穗生根困难,扦插成活率低,成为毛白杨新品种不能大规模进入产业化,不易发展毛白杨无性系林业的重要原因。为提高毛白杨的扦插生根能力,本课题组将rolb基因导入毛白杨,以获得具有较强生根能力的转基因植株。本文以转入rolb基因的毛白杨为材料,通过组培苗生根试验,硬枝扦插试验,植株内源激素测定和生长指标测定来研究转rolb基因毛白杨植株的生根能力以及生长变异情况。主要研究结果如下:1.对转rolb基因毛白杨植株进行扩繁,并进行PCR检测,筛选出大量的阳性克隆。2.在无外源激素培养基上,转基因植株的生根率达到80%00%,而未转化植株的生根率只有13%0%。转化植株对生长素表现出高度的敏感性,当IBA浓度达1.0mg/L时,转化植株的生根受到抑制。rolb的表达,使转基因植株的生根能力增强,同时对外源激素表现出高度的敏感性。3.硬枝扦插试验中,转基因植株的扦插在无外源激素处理的情况下,生根率显著高于对照,其上半段枝条的扦插生根率达到75.8%,下半段枝条达到87.5%。而未转基因对照植株的上半段枝条的扦插生根率为56.7%,下半段为36.7%。同时转基因植株的下半段枝条的生根能力大于上半段枝条,而对照正好相反。证明rolb基因的表达是近根的部位强于远离根的部位。同时,外源激素处理插条的试验表明,转基因植株的插条对外源激素表现出高度的敏感性,在外源激素达到2000 mg/kg时,转基因植株插条的生根受到抑制。4.转rolb基因毛白杨植株的内源激素测定结果表明,转基因植株在扦插不同时期,插条的激素变化规律与对照相同。转基因植株与对照激素含量的差异出现在扦插后期,此时转基因植株插条的IAA含量显著高于对照,而ABA含量显著低于对照,IAA/ABA的比值显著高于对照。初步推断,转rolb基因毛白杨植株插条生根能力的增加,可能与rolb基因表达调控植物内源激素水平有关系。而转基因植株的组培苗的IAA含量和ABA含量与对照都没有显著差异。5.在对转rolb基因毛白杨植株的大田生长观测中发现,移栽大田当年的转基因毛白杨植株的高生长明显低于对照,表现出了明显的矮化现象。另外转基因植株表现

关键词：毛白杨 rolb基因转基因植株硬枝扦插生根能力变异

rolb、rolC基因对转Ri质粒三倍体毛白杨的转化

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rolB、rolC基因对转Ri质粒三倍体毛白杨的转化

作者：苏彦苹河北农业大学

学位级别：硕士

Ri质粒上含有诱根基因即rol基因，将Ri质粒或单个或几个rol基因组合导入植物体内均能提高植物的生根能力，但是某些植物在转入rol基因后往往会使植株表现出一些不良的变异，如出现了植株矮化、叶面皱缩、节间缩短、分支能力增强等性状... 详细信息

Ri质粒上含有诱根基因即rol基因，将Ri质粒或单个或几个rol基因组合导入植物体内均能提高植物的生根能力，但是某些植物在转入rol基因后往往会使植株表现出一些不良的变异，如出现了植株矮化、叶面皱缩、节间缩短、分支能力增强等性状，对植物的生长发育产生很大的影响。为减少rol基因对植物造成的不良变异，本文以刘兴菊研究的转Ri质粒30148菌株的三倍体毛白杨3个无性系为研究对象，通过对叶片再生体系和遗传转化条件的优化，建立了高效离体再生系统和遗传转化体系，并将rolb、rolC诱根基因导入转Ri质粒的三倍体毛白杨，对部分转化再生植株进行了形态鉴定、PCR检测和GUS组织化学染色检测，并对转化植株形态及生长变异和叶片解剖结构进行了初步研究，主要研究内容及结果如下： 1．进行了叶片外殖体高效再生系统的研究，筛选出转Ri质粒的三倍体毛白杨叶片诱导不定芽的适宜培养基为：MS+6-BA1.0mg．L+NAA0.05mg．L，诱导不定根的适宜培养基为：MS+NAA0.1mg．L。并以此种诱导不定芽的适宜培养基，研究了暗培养对诱导叶片不定芽的影响，结果表明，暗培养5d对不定芽诱导是有利的。 2．通过卡那霉素(Km)敏感性试验，确定了诱导叶片外殖体不定芽的Km临界耐受浓度为30mg．L。同时研究了头孢噻肟钠(CTX)对诱导转Ri质粒的三倍体毛白杨叶片不定芽的影响和对农杆菌的抑菌效果，结果表明，CTX适宜的抑菌浓度为400mg．L。 3．对影响农杆菌转化效率的几个主要因素进行研究发现，转Ri质粒的三倍体毛白杨叶片外殖体适宜的侵菌时间是8min，侵染后共培养2d可获得较好的转化效果。 4．分别将含质粒pCMB-B∶GUS和pPCV002-CaMVC的农杆菌与转Ri质粒的三倍体毛白杨叶片共培养，通过在50mg．LKm的培养基上筛选后，获得了Km抗性植株，对部分抗性植株进行了PCR检测，证明rolb、rolC基因已整合到转Ri质粒三倍体毛白杨的基因组中，对部分PCR检测呈阳性的pCMB-B∶GUS转基因无性系进行组织化学染色分析表明，GUS基因主要在根尖、茎及叶脉维管束组织中特异表达。 5．进行了转基因植株形态及生长变异的研究，发现与转Ri质粒三倍体毛白杨相比，大部分转rolb基因无性系植株矮化，叶面积增加，茎分支能力增强，节间距缩短，生根率及根数量降低，高生长量减少;大部分转rolC基因无性系叶面由原来的皱缩变为平展，茎分支能力增强，节间距缩短明显，生根率、根数量及高生长量增加。 6．对转基因植株叶片解剖结构及组织厚度进行了观察，结果表明，转基因无性系叶片解剖结构变化不明显。大部分转rolb基因无性系叶片厚度、叶肉厚度与其转Ri质粒无性系对照相比差异显著，栅栏组织和海绵组织厚度差异不显著，50％的转rolb基因无性系的表皮厚度与其转Ri质粒无性系对照相比差异显著。大部份转rolC基因无性系叶片厚度、叶肉厚度与其转Ri质粒无性系对照相比差异不显著。转Ri质粒不同无性系在转rolC基因后，栅栏组织厚度变异程度不同，75％的转rolC基因无性系海绵组织厚度与其转Ri质粒无性系对照有显著差异。转rolC基因无性系的表皮厚度与其转Ri质粒无性系对照无显著差异。

关键词：转Ri质粒三倍体毛白杨 rolb基因 rolC基因遗传转化生长变异