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黑木耳YBS-3菌株ras启动子的克隆与分析

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安徽农业科学 2011年第17期39卷 10130-10132页

作者：张霞宋瑞清邓勋东北林业大学黑龙江哈尔滨150040 黑龙江森林保护研究所黑龙江哈尔滨150040

[目的]从黑木耳(Auricuralia auricular)基因组中克隆内源ras启动子,为黑木耳利用基因工程培育优良品种提供启动子元件材料。[方法]利用PCR技术,以黑木耳菌株YBS-3基因组DNA为模版,克隆得到4条ras启动子片段。采用启动子序列分析软件Pl... 详细信息

[目的]从黑木耳(Auricuralia auricular)基因组中克隆内源ras启动子,为黑木耳利用基因工程培育优良品种提供启动子元件材料。[方法]利用PCR技术,以黑木耳菌株YBS-3基因组DNA为模版,克隆得到4条ras启动子片段。采用启动子序列分析软件Place、Promoter prediction和TFSEARCHver.1.3对其进行序列结构分析。[结果]4条启动子片段均含有核心启动子序列,除典型的基本作用元件TATAbox和CAATbox外,还有许多其他重要作用元件如GATABOX、GCGCBOX和CCAATBOX1等,同时每条片段中均至少具有1个转录起始位点,且检测到HSF、AP-1、GCN4等多个转录因子结合位点。[结论]4条目的序列在理论上具有较强的启动子活性功能。

关键词：黑木耳 ras启动子克隆序列分析

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草菇ras启动子区域的克隆及其序列分析

食用菌学报 2004年第1期11卷 1-6页

作者：刘世强杨丽卿郭丽琼林俊芳中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室海口571701

根据Kajiwaras[1]等报道的ras启动子的序列设计并合成一对特异引物,以草菇菌丝的总DNA为模板,通过PCR扩增,获得一条长约0.75kb片段。DNA序列测定结果表明,该片段长度为751bp。采用Blast软件和Promoterpredictions软件进行启动子序列结... 详细信息

根据Kajiwaras[1]等报道的ras启动子的序列设计并合成一对特异引物,以草菇菌丝的总DNA为模板,通过PCR扩增,获得一条长约0.75kb片段。DNA序列测定结果表明,该片段长度为751bp。采用Blast软件和Promoterpredictions软件进行启动子序列结构分析,结果表明,该片段中243～293bp和539～589bp两区域为ras启动子的基础启动子区。在283bp和579bp处有两个转录起始位点,在244～247bp和292～295bp之间有2个TATAbox,在36～39bp、377～380bp、434～437bp和716～719bp之间有4个CAATbox。此外,该片段中还含有9个Gbox、12个Ibox、2个Pbox以及3个重要顺式作用元件:ABRE元件、WUN motif(基元)和HSE元件。

关键词：草菇 ras启动子克隆序列分析 PCR扩增 DNA 基因工程

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PEG介导的玉米丝轴黑粉菌原生质体转化与ras、gpd启动子的克隆

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PEG介导的玉米丝轴黑粉菌原生质体转化与ras、gpd启动子的克隆

作者：宁平华中农业大学

学位级别：硕士

玉米丝黑穗病是由玉米丝轴黑粉菌(Sporisorium reilianum ***)引起的严重威胁玉米产量的系统性病害,一般在苗期侵染,穗期表现典型症状,主要危害果穗和雄穗,一旦发病,往往全株没有收成。本研究旨在构建PEG介导的玉米丝轴黑粉菌原生质体... 详细信息

玉米丝黑穗病是由玉米丝轴黑粉菌(Sporisorium reilianum ***)引起的严重威胁玉米产量的系统性病害,一般在苗期侵染,穗期表现典型症状,主要危害果穗和雄穗,一旦发病,往往全株没有收成。本研究旨在构建PEG介导的玉米丝轴黑粉菌原生质体转化体系,并尝试克隆该菌基因组中ras、gpd基因的启动子,为发展出高效的玉米丝轴黑粉菌遗传转化体系和阐明其致病机制等方面奠定基础。主要结果如下:1、对玉米丝轴黑粉菌原生质体形成和再生条件进行探究,供试菌株为本实验室分离的丝轴黑粉菌菌株SR1,研究了不同菌龄、不同单酶以及不同浓度的单酶组合成混合酶液后的酶解效率,探讨了渗透压稳定剂、酶解温度、酶解时间等影响原生质体形成和再生的条件,得到了制备玉米丝轴黑粉菌原生质体的最优条件:SR1活化3d后以1/20的接种量继续培养约24h,离心收集担孢子用无菌水洗涤一次,加入含0.5%裂解酶、5%崩溃酶和5%蜗牛酶三种酶混合液(酶液以1.0M/L山梨醇配制)酶解,置于28℃、转速为100r/m的摇床上温育10min,原生质体产量可达1.35×10～8个/mL,得率可达到99.4%,再生率达35.6%。2、质粒DNA经PEG介导转化玉米丝轴黑粉菌原生质体,转化效率约10个转化子/μgDNA。筛选出稳定表达潮霉素B抗性的转化菌株,继代培养9代后仍有潮霉素抗性。PCR验证表明,外源DNA已经插入到丝轴黑粉菌基因组上,随丝轴黑粉菌转代而稳定遗传。3、克隆玉米丝轴黑粉菌ras与gpd启动子,以玉米丝轴黑粉菌基因组DNA为模板,根据以往报道的ras与gpd启动子相关序列设计引物,利用PCR方法克隆了ras、gpd1和gpd2三个启动子片段。DNA测序后经Blastn分析表明,ras序列与网上公布的香菇ras启动子序列有98%的同源性,gpd与草菇gpd基因启动子序列的同源性达99%。采用Promoter 2.0 Prediction软件分析发现ras、gpd2为启动子的可能性很大,分值达0.652、0.565。这些片段都含有多个启动子核心序列和TATA-box,CAAT-box等顺式作用元件。

关键词：玉米丝轴黑粉菌原生质体制备 PEG介导的转化 ras启动子 gpd启动子

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香菇ras和gpd启动子的克隆与功能鉴定

食用菌学报 2005年第3期12卷 15-20页

作者：于晓玲林俊芳郭丽琼王树昌中国热带农业科学院热带作物生物技术国家重点实验室热带生物技术研究所海口571101

以香菇基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆了香菇1个ras启动子Lras,2个gpd启动子Lgpd1和Lgpd2。这3个启动子的大小分别为715bp、1056bp和611bp,与已报道的ras和gpd启动子的同源性很强。对这3个启动子的分析结果表明,它们都含有丰富的启动... 详细信息

以香菇基因组DNA为模板,利用PCR技术克隆了香菇1个ras启动子Lras,2个gpd启动子Lgpd1和Lgpd2。这3个启动子的大小分别为715bp、1056bp和611bp,与已报道的ras和gpd启动子的同源性很强。对这3个启动子的分析结果表明,它们都含有丰富的启动子顺式作用元件。将这些启动子片段分别与GUS基因连接构建了表达载体,并将这些表达载体导入草菇菌丝体中,检测其活性,最终显示3个片段都有启动GUS基因表达的能力,其中Lgpd1启动子活性最强,Lras启动子次之,Lgpd2最弱。

关键词：香菇 ras启动子 gpd启动子原生质体转化 GUS基因

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