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口咽胃肠道环境对Der p2-rbcg行为的影响

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世界华人消化杂志 2005年第5期13卷 600-603页

作者：史皆然师长宏吴昌归张金山第四军医大学西京医院呼吸内科陕西省西安市710032 第四军医大学基础部微生物学教研室陕西省西安市710032 第四军医大学基础部组织胚胎学教研室陕西省西安市710032

目的:观察口服接种过敏原基因(Der p2)重组(r)BCG口咽胃肠道环境对Der p2-rbcg行为的影响. 方法:以野生BCG为对照,给予Balb/c小鼠口服接种三种方式(分泌、胞壁和胞内)表达Der p2的rbcg1×109CFU,连续5 d,计数不同时间粪便、口咽淋巴组织... 详细信息

目的:观察口服接种过敏原基因(Der p2)重组(r)BCG口咽胃肠道环境对Der p2-rbcg行为的影响. 方法:以野生BCG为对照,给予Balb/c小鼠口服接种三种方式(分泌、胞壁和胞内)表达Der p2的rbcg1×109CFU,连续5 d,计数不同时间粪便、口咽淋巴组织(OLT)、消化道相关淋巴组织(GALT)以及肝脏、脾脏和肺脏中BCG的细菌数;用PCR和内参照RT—PCR法测定由rbcg携带入各组织中的Der p2存在和表达状况. 结果:三种rbcg均可通过口咽和胃肠道黏膜,进入黏膜相关淋巴组织;各淋巴组织中的rbcg仍能表达其所携带的外源基因,并在各淋巴组织中表达外源蛋白. 结论:rbcg口服免疫后口咽胃肠道环境对rbcg生物学行为所产生的影响并不妨碍诱导理想的免疫应答.

关键词： Der 口咽环境 Balb/c小鼠黏膜相关淋巴组织 rbcg 口服接种胃肠道黏膜生物学行为不同时间 PCR法表达状况外源基因免疫应答外源蛋白原基因消化道细菌数免疫后

Pam3CSK4 enhances adaptive immune responses to recombinant Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guérin expressing Plasmodium falciparum C-terminus merozoite surface protein-1

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Asian Pacific Journal of Tropical Biomedicine 2019年第7期9卷 271-277页

作者： Mohamed H Abdikarim Muhammad A Abbas Munirah N Zakaria Robaiza Zakaria Rapeah Suppian Biomedicine Programme School of Health SciencesHealth CampusUniversiti Sains MalaysiaKelantanMalaysia Department of Human Physiology Faculty of Basic Medical SciencesBayero University KanoNigeria Department of Medical Microbiology and Parasitology School of Medical SciencesHealth CampusUniversiti Sains MalaysiaKelantanMalaysia

Objective: To determine the effects of toll-like receptor 2(TLR-2) agonist, Pam3 CSK4, on cellular and humoral immune response against recombinant Mycobacterium bovis bacille Calmette-Guérin(rbcg) expressing the C-terminus of merozoite surface protein-1 of Plasmodium ***: Six groups of mice(n=6 per group) received intraperitoneal phosphate buffered saline T80(PBS-T80), BCG or rbcg in the presence or absence of Pam3 CSK4. Enzymelinked immunosorbent assay was carried out to measure serum total IgG, IgG1, IgG2 a, and Ig G2 b production. Spleens were also harvested and splenocytes were co-cultured with rbcg antigen for in vitro determination of IL-4 and IFN-γ via enzyme-linked immunosorbent ***: The production of total IgG and the isotype IgG1, IgG2 a and IgG2 b was significantly higher in rbcg-immunised mice than in the BCG and PBS-T80-immunised mice, and Pam3 CSK4 further enhanced their productions. A similar pattern was also observed in IFN-γ production. Moreover, there was no significant difference in IL-4 production in all groups either in the presence or absence of Pam3 ***: We present evidence of the adjuvant effects of TLR-2 agonist in enhancing the production of total IgG, IgG1, IgG2 a, IgG2 b, as well as IFN-γ in response to rbcg. However, the presence or absence of Pam3 CSK4 had no effect on IL-4 production.

关键词： Adjuvant rbcg Immune MSP-1 TLR-2

肾型IBVS1基因重组BCG菌株的构建及其免疫原性研究

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微生物学报 2007年第2期47卷 324-328页

作者：柏佳宁边艳青赵宝华河北师范大学生命科学学院石家庄050016

S1基因是传染性支气管炎病毒(IBV)的主要保护性抗原基因,应用RT-PCR技术特异地扩增嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的S1基因,经序列分析证实为S1基因,将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体p... 详细信息

S1基因是传染性支气管炎病毒(IBV)的主要保护性抗原基因,应用RT-PCR技术特异地扩增嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的S1基因,经序列分析证实为S1基因,将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体pRR3上,从而构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pR-α-S1,再电转化至BCG中,形成重组菌株rbcg-S1。热激后S1蛋白在耻垢分枝杆菌***2155中高效表达,并且通过ELISA和Western blot检测能够被抗IBVS1蛋白的单克隆抗体识别。将106CFU的重组菌株rbcg-S1皮下注射免疫6周龄的SPF鸡,动物保护试验结果表明重组菌株rbcg-S1对鸡具有一定的免疫保护效果,能够保护SPF鸡抵抗IBVX毒株强毒攻击。血凝抑制试验表明血凝抑制抗体滴度能够显著增加。构建的重组菌株为今后开发新型鸡传染性支气管炎基因工程弱毒疫苗奠定了基础。

关键词：鸡传染性支气管炎 S1糖蛋白基因 rbcg 保护性反应

EGFP标记柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗的构建及其在鸡体内的分布

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中国科学（C辑） 2008年第11期38卷 1084-1089页

作者：王秋悦任科研李建华张西臣宫鹏涛吉林大学农学部畜牧兽医学院吉林长春130062 吉林省兽医科学研究所吉林长春130062

鸡球虫病给禽类养殖业带来重大经济影响.本实验利用DNA重组技术将柔嫩艾美尔球虫保护性抗原基因rhomboid和增强型绿色荧光蛋白EGFP基因串连,将其克隆到BCG中,构建EGFP标记柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗pMV361-Rho/EGFP.将rbcg口服免疫6日龄... 详细信息

鸡球虫病给禽类养殖业带来重大经济影响.本实验利用DNA重组技术将柔嫩艾美尔球虫保护性抗原基因rhomboid和增强型绿色荧光蛋白EGFP基因串连,将其克隆到BCG中,构建EGFP标记柔嫩艾美耳球虫重组卡介苗pMV361-Rho/EGFP.将rbcg口服免疫6日龄雏鸡,一周后剖杀,取肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官制作冰冻切片,激光共聚焦显微镜观察各组织器官rhomboid表达情况.另分别于免疫后7,14,21,28天提取肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官总RNA,实时定量RT-PCR方法检测rhomboid目的基因转录情况,比较各时期组织器官rhomboid基因表达量.结果显示,免疫一周后,用激光共聚焦显微镜观察到在肝、脾、肺、肾、盲肠各组织器官中均有EGFP表达.实时定量RT-PCR结果显示,免疫14天后rhomboid基因表达量达到高峰,随后开始下降,至28天后消失.本研究为重组卡介苗疫苗作为抗球虫疫苗的研究奠定基础.

关键词：球虫病 rbcg EGFP rhomboid基因激光共聚焦显微镜实时定量RT-PCR

柔嫩艾美耳球虫rhomboid抗原基因在卡介苗中的克隆与表达

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中国预防兽医学报 2009年第4期31卷 270-274页

作者：王秋悦任科研宫鹏涛李建华张西臣吉林大学农学部畜牧兽医学院吉林长春130062 吉林省兽医科学研究所古林长春130062

以含柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因的重组质粒为模板,应用PCR方法扩增该基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中。分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,将rhomboid目的基因克隆到大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达载体pMV261... 详细信息

以含柔嫩艾美耳球虫rhomboid基因的重组质粒为模板,应用PCR方法扩增该基因完整开放阅读框,克隆至pMD18-T载体中。分别用限制性内切酶PstⅠ/ClaⅠ和PvuⅡ/ClaⅠ进行双酶切,将rhomboid目的基因克隆到大肠杆菌-分支杆菌穿梭表达载体pMV261和整合表达载体pMV361中,获得重组质粒pRho-261和pRho-361。将重组质粒电穿孔转化卡介苗,经热诱导后对其表达产物进行SDS-PAGE和western blot分析。结果表明成功构建了两个重组质粒,其表达产物与柔嫩艾美耳球虫阳性血清具有免疫反应性,为重组卡介苗在鸡球虫病防治方面的研究奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 rhomboid基因 rbcg 球虫病疫苗

Inhibitory effects of recombinant bacillus Calmette-Guérin vaccines coexpressing tandem repeats of MUC1 and GM-CSF on the growth of breast cancer

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外科研究与新技术 2012年第1期 6-7页

作者：袁时芳 Dept Vascul Endocr Surg Xi-jing Hosp4 th Mil Med Univ

Objective To construct a recombinant bacillus Calmette-Guérin( BCG) vaccines based on different tan-dem repeats of MUC1 and GM-CSF,rbcg-MVNTR1 /4 / 8-CSF,and to observe the ability of three recombinant BCG vaccines in the inhibition of breast cancer. Methods After MUC1 variable-number tandem repeats ( MVN-TR1 /4 /8) were cloned in a stepwise manner,the E. coli-Mycobacteria shuttle expression vector pDE22-MVN-TR1 /4 /8-CSF were constructed by fusing MVNTR1 /4 /8 and GM-CSF,and then used to transform competent BCG

关键词： CSF Inhibitory effects of recombinant bacillus Calmette-Gu rin vaccines coexpressing tandem repeats of MUC1 and GM-CSF on the growth of breast cancer TR MUC rbcg GM

柔嫩艾美耳球虫Rhomboid相关基因在卡介苗中的表达

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柔嫩艾美耳球虫Rhomboid相关基因在卡介苗中的表达

ILTVgB基因重组BCG菌株的构建及其免疫原性

中国畜牧兽医学会2006学术年会

作者：王秋悦李建华张西臣宫鹏涛吉林大学畜牧兽医学院

目的:构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒Rho-261和Rho-361,并将柔嫩艾美耳球虫Rhomboid蛋白基因在分枝杆菌中进行克隆和表达。方法:利用柔嫩艾美耳球虫单克隆抗体从本室所构建的cDNA表达丈库中筛选出1个Rhomboid 蛋白家族相关基因,PCR方法... 详细信息

目的:构建大肠杆菌-分枝杆菌穿梭质粒Rho-261和Rho-361,并将柔嫩艾美耳球虫Rhomboid蛋白基因在分枝杆菌中进行克隆和表达。方法:利用柔嫩艾美耳球虫单克隆抗体从本室所构建的cDNA表达丈库中筛选出1个Rhomboid 蛋白家族相关基因,PCR方法扩增该基因的完整开放阅读框。利用DNA重组技术将其克隆到大肠杆菌-分枝杆菌质粒穿梭载体pMV261和pMV361中,重组质粒电转化卡介苗中,经热诱导后,对基因表达产物进行SDS-PAGE电泳分析及Western blotting鉴定。结果:酶切鉴定、PCR和测序分析结果表明成功构建了两个重组载体Rho-261和Rho-361,重组体经诱导表达了相对分子质量约为30KDa的蛋白,与预测分子质量相符。结论:在卡介苗中表达Rhomhoid相关基因成功,为鸡球虫病重组苗的研究奠定了基础。

关键词：柔嫩艾美耳球虫 Rhomboid基因穿梭载体 rbcg

来源： cnki会议评论

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中国兽医学报 2009年第4期29卷 413-417页

作者：宋杰苏钢裴艳涛赵宝华河北师范大学生命科学学院河北石家庄050016 邢台学院生物化学系河北邢台054000

gB基因是传染性喉气管炎病毒(ILTV)的主要保护性抗原基因,本试验以ILTV基因组为模板,利用PCR特异扩增出gB基因,将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体pRR3上,从而构建了大肠杆菌-分枝杆... 详细信息

gB基因是传染性喉气管炎病毒(ILTV)的主要保护性抗原基因,本试验以ILTV基因组为模板,利用PCR特异扩增出gB基因,将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体pRR3上,从而构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pR-α-gB,再电转化至BCG中,形成重组菌株rbcg-gB。热激后gB蛋白在耻垢分枝杆菌***2155中高效表达,并且通过ELISA和Western blotting检测能够被抗ILTVgB蛋白的单克隆抗体识别。将106CFU的重组菌株rbcg-gB皮下注射免疫3周龄的SPF鸡,分别测定了淋巴细胞指数(SI)、吞噬细胞的吞噬能力以及血清中IL-2和IFN-γ的水平,结果表明重组菌株rbcg-gB作为载体疫苗具有较强的免疫反应。动物保护试验结果表明,重组菌株rbcg-gB对鸡具有一定的免疫保护效果,能够保护SPF鸡抵抗ILTV强毒株的攻击,血凝抑制试验表明血凝抑制抗体滴度能够显著增加。

关键词：鸡传染性喉气管炎病毒 gB糖蛋白基因 rbcg 免疫原性

弓形虫Rhomboid-IL-2基因重组卡介苗的构建及其对犬的免疫效果

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中国病原生物学杂志 2016年第8期11卷 710-714页

作者：罗文武宫鹏涛李建华杨举李赫张西臣吉林大学动物医学学院吉林长春130062

目的构建弓形虫Rhomboid以及犬白介素2基因重组卡介苗,并观察其对免疫犬的免疫效果。方法将鉴定正确的弓形虫Rhombiod基因和犬IL-2基因一起克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体和整合表达载体中,构建重组质粒pMV261(361)-IL2-Rho。... 详细信息

目的构建弓形虫Rhomboid以及犬白介素2基因重组卡介苗,并观察其对免疫犬的免疫效果。方法将鉴定正确的弓形虫Rhombiod基因和犬IL-2基因一起克隆到大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭表达载体和整合表达载体中,构建重组质粒pMV261(361)-IL2-Rho。将重组质粒转入卡介苗中,对表达产物进行SDS-PAGE电泳分析及Western blot鉴定。分别用重组卡介苗pMV261(361)-IL2-Rho和pMV261(361)-Rho经皮下免疫犬,检测免疫犬体液及细胞免疫水平变化并观察其存活时间。结果成功构建pMV261(361)-IL2-Rho重组质粒,弓形虫Rhomboid基因在重组卡介苗中稳定表达46ku的目的蛋白,Western blot显示该蛋白能被弓形虫感染鼠血清识别。动物实验表明,rbcgpMV261(361)-IL2-Rho能诱导产生较强的体液免疫和Th1型细胞免疫应答反应,rbcgpMV361-IL2-Rho免疫组感染弓形虫后的存活时间组为(14.40±4.50)d,rbcgpMV261-IL2-Rho免疫组感染弓形虫后的存活时间组为(13.00±4.75)d,较BCG对照组存活时间(8.20±5.45)d有所延长。结论 rbcgpMV261(361)-IL2-Rho蛋白具有免疫原性。该重组卡介苗对犬弓形虫感染有一定保护效果。

关键词：弓形虫 Rhomboid基因白介素2 rbcg