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中国中药杂志 2019年第19期44卷 4234-4240页

作者：胡燕珍李德凤张毅卫军营杨洪军中国中医科学院中药研究所北京100700 江西省中医药研究院江西南昌330046

基于基因组学策略对京尼平苷致肝毒性的相关基因进行筛选,以期揭示其发生不良反应的可能分子机制,为含栀子及京尼平苷类药物的非临床评价提供科学依据。55只SD大鼠随机分为正常对照组(17只)、给药24 h组(18只)、给药72 h组(20只),灌胃给... 详细信息

基于基因组学策略对京尼平苷致肝毒性的相关基因进行筛选,以期揭示其发生不良反应的可能分子机制,为含栀子及京尼平苷类药物的非临床评价提供科学依据。55只SD大鼠随机分为正常对照组(17只)、给药24 h组(18只)、给药72 h组(20只),灌胃给药3 d后,观察大鼠外观、行为及体质量变化;测定大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)的活性;同时,选用Affymetrix miRNA 4. 0芯片和Affymetrix Rat Gene 2. 0基因表达谱芯片,检测过量京尼平苷(300 mg·kg-1)作用于SD大鼠24,72 h后的肝组织基因表达差异情况,并利用qrt-pcr技术进行验证。常规毒理学结果显示,与对照组比较,各给药组ALT和AST的活性显著升高。基因检测结果显示,共获得324个与肝毒性相关的差异表达基因,其中上调259个,下调65个。对筛选出的9种差异基因(Bcl2,Il1b,Tpm3,MMP2,Col1α1,Ifit1,Aldob,Nr0b2,Cyp2c23)进行qrt-pcr验证,其中Bcl2,Col1α1,Aldob,Nr0b2,Cyp2c23等5种差异基因得到了验证。该研究发现了一些与京尼平苷致肝毒性相关的标志基因,为京尼平苷肝毒性分子机制通路的深入研究提供了重要线索。

关键词：京尼平苷肝毒性基因芯片技术 qrt-pcr技术

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大豆抗大豆花叶病毒基因的关联分析及抗病生理指标的测定

大豆抗大豆花叶病毒基因的关联分析及抗病生理指标的测定

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作者：杨彩妮山西农业大学

学位级别：硕士

大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV)病是我国大豆病害中最常见、最严重的一种。大豆植物感染大豆花叶病毒后不仅仅会影响大豆的生产量,还会引发大豆品质的下降。种植大豆抗病品种是最经济、环保、有效的防治手段。因此抗源筛选、... 详细信息

大豆花叶病毒(Soybean Mosaic Virus,SMV)病是我国大豆病害中最常见、最严重的一种。大豆植物感染大豆花叶病毒后不仅仅会影响大豆的生产量,还会引发大豆品质的下降。种植大豆抗病品种是最经济、环保、有效的防治手段。因此抗源筛选、抗病育种、抗性基因定位和抗病基因分析等方面广泛的研究对选育优良抗SMV大豆品种有着重大意义。本研究于2021年在山西农业大学的防虫网室对193份大豆自然群体分别接种SC15和SC7毒株,并对它们的抗感情况进行表型鉴定,筛选出抗SMV的抗病品种;结合开发的SNP标记,通过关联分析对SC15和SC7分别进行抗病基因定位;根据SNP差异信息预测抗病候选基因并通过q RT-pcr分析在SMV诱导下各基因的表达情况,以期筛选出最有可能的抗病候选基因;同时探索抗病相关的生理指标POD、SOD和CAT的酶活性在抗病过程中的作用。主要研究结果如下:1、利用SC15和SC7毒株鉴定了193份大豆自然群体。结果发现接种SC15的筛选出高抗材料4份、抗病材料10份、中抗材料27份;接种SC7的筛选出高抗材料4份、抗病材料14份、中抗材料50份;同时抗SC15和SC7共有的高抗、抗病、中抗材料有13份。群体抗病表型结合656,977个SNP标记利用GAPIT软件采用混合线性模型进行抗病关联分析,检测到10个与抗SC15株系显著相关的SNP位点,1个与抗SC7株系显著相关的SNP位点。2、参考自然群体基因组SNP标记信息,将抗病位点上下游50 kb候选区段内有SNP差异的基因作为可能的候选基因,对这些候选基因进行抗感材料的q RT-pcr分析发现,抗SC15的位点中6个有SNP差异的候选基因Glyma.02g163300、Glyma.04g191400、Glyma.14g099100、Glyma.19g027200、Glyma.19g027300、Glyma.19g0577000受SC15诱导表达显著,说明这6个基因可能参与了大豆对SC15的抗性。抗SC7的位点中有SNP差异的候选基因Glyma.15g219800受SC7诱导表达显著,说明Glyma.15g219800可能参与了大豆对SC7的抗性。3、测定过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)活性动态变化来评价抗氧化酶在大豆抗SMV中的作用,研究结果显示:抗SC15侵染过程中,POD和SOD酶活性起主要影响作用,CAT的酶活性在大豆被侵染初期参与抗病过程;在抗SC7侵染过程中,SOD酶活性对抗SMV侵染起到主要作用,所以初步认为POD、SOD及CAT酶活性变化可以作为大豆对SMV抗性的一项生理指标。

关键词：大豆大豆花叶病毒病表型鉴定候选基因 qrt-pcr技术酶活测定

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不同品种桃（Prunus persica L.）果实发育过程中品质变化和花色苷代谢及外源物质调控研究

不同品种桃（Prunus persica L.）果实发育过程中品质变化和花色...

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作者：尚娟娥福建农林大学

学位级别：硕士

福建省桃种质资源丰富,品种类型多,果实色泽多样。花色苷是果实色泽的主要成分之一,且是果皮呈现红色的主要色素,其种类和数量决定果实的不同颜色。本研究以‘黑桃’‘白凤’和‘韦端蜜红’3个桃品种为试验材料,研究果实发育过程中品质... 详细信息

福建省桃种质资源丰富,品种类型多,果实色泽多样。花色苷是果实色泽的主要成分之一,且是果皮呈现红色的主要色素,其种类和数量决定果实的不同颜色。本研究以‘黑桃’‘白凤’和‘韦端蜜红’3个桃品种为试验材料,研究果实发育过程中品质及花色苷代谢变化、3种不同浓度外源物质处理对桃果实品质、果皮花色苷代谢的影响及q RT-pcr技术定量桃果皮花色苷相关基因变化,主要研究结果如下:1.‘黑桃’‘白凤’和‘韦端蜜红’桃自盛花后55 d天起,随着果实的生长发育,果实单果重、纵横径、可溶性固形物（TSS）、可溶性糖、可滴定酸、花色苷、总酚、类黄酮及果胶等含量变化显著。2.对3个品种果实发育过程中花色苷含量测定表明,‘黑桃’花色苷含量在盛花后75 d（果实成熟期）积累最多,‘白凤’在盛花后105 d（果实成熟期）积累量最多,‘韦端蜜红’在盛花后115d（果实成熟期）积累量最多。其中‘黑桃’色泽最红,其花色苷含量是‘白凤’的8.50倍,是‘韦端蜜红’的4.76倍。3.高压液相色谱（HPLC）分析表明,桃果实发育过程中及果实成熟时桃果皮中的主要色素为矢车菊色素和天竺葵色素,而果肉中仅有矢车菊色素。4.对‘黑桃’‘白凤’和‘韦端蜜红’桃果实转色期前后果皮苯丙氨酸解氨酶（PAL）和类黄酮葡萄糖基转移酶（UFGT）活性研究表明,PAL随着果皮花色苷含量的积累呈现下降的趋势,而UFGT随着花色苷含量的积累呈现上升趋势。5.用3种外源物质（L-谷氨酸、油菜素内酯和蔗糖）喷施‘白凤’和‘韦端蜜红’桃植株,结果表明,不同浓度的3种外源物质处理使‘白凤’和‘韦端蜜红’桃果实的平均单果重、纵横径、果实硬度、TSS及可溶性糖含量显著提高。6.与喷施清水（CK）相比,喷施不同浓度3种外源物质处理后2个桃品种果皮色泽参数L*、b*和C*值均呈现下降趋势,a*值呈现上升趋势。800 mg/L L-谷氨酸（L3）、0.6 mg/L油菜素内酯（Y3）及150 mmol/L蔗糖（Z3）处理桃果皮花色苷含量显著增加,其中0.6 mg/L油菜素内酯（Y3）处理最明显。7.不同浓度3种外源物质处理对成熟期‘白凤’和‘韦端蜜红’桃果皮总酚含量无明显影响,但对‘韦端蜜红’桃果皮类黄酮含量影响显著。其中0.6 mg/L油菜素内酯（Y3）处理类黄酮含量增幅最大。8.q RT-pcr技术分析表明,不同浓度3种外源物质处理对‘白凤’和‘韦端蜜红’桃果皮花色苷相关基因的影响不同。800 mg/L L-谷氨酸（L3）处理和150mmol/L蔗糖（Z3）处理对基因表达上调的促进作用显著。对于‘白凤’桃果皮,L3处理促进PAL、UFGT、CHS、F3H、F3’H和ANS等6个基因表达上调,Z3处理促进PAL、UFGT、CHS、F3H等4个基因表达上调;对于‘韦端蜜红’桃果皮,L3处理促进PAL、UFGT、CHS、F3H、DFR、ANS和GST1等7个基因表达上调,Z3处理促进PAL、UFGT、DFR、ANS和GST1等5个基因表达上调,可见800 mg/L L-谷氨酸（L3）处理对果皮花色苷相关基因的影响大。

关键词：桃(Prunus persica L) 花色苷外源物质处理 qrt-pcr技术

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