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一种具有立体选择性新酯酶的菌种筛选和基因克隆

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微生物学报 2007年第3期47卷 452-455页

作者：陈少欣史炳照上海医药工业研究院生物部上海200040

从土样分离到一株产生具有立体选择性酯水解酶的恶臭假单孢菌(Pseudomonas putida NH33)。构建*** NH33的基因组文库,并在***中进行酯酶活性筛选,得到一个含有4.7kb插入片段的阳性克隆。对这个克隆的DNA片段进行序列分析,表明它含有一个... 详细信息

从土样分离到一株产生具有立体选择性酯水解酶的恶臭假单孢菌(Pseudomonas putida NH33)。构建*** NH33的基因组文库,并在***中进行酯酶活性筛选,得到一个含有4.7kb插入片段的阳性克隆。对这个克隆的DNA片段进行序列分析,表明它含有一个1142个碱基的开放阅读框,为编码381个氨基酸的酯酶。推测的酯酶氨基酸序列与其它丝氨酸酯水解酶具有共同的保守基序GXSXG。把该蛋白在*** BL21(DE3)中进行表达,并用金属亲和层析纯化至单一条带。利用纯化的酶水解2-芳基丙酸乙酯制备2-芳基丙酸的S型异构体,产物的光学纯度eep>99%,说明此酶可8用于手性药物的合成。该酯酶是一个新酶,其基因序列已递交GenBank,登记号为AY896293。

关键词：酯酶 P. putida NH33 克隆序列

恶臭假单胞菌ND6菌株中与萘降解相关的新型水杨醛脱氢酶NahV

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科学通报 2007年第11期52卷 1257-1262页

作者：赵化冰李永君陈威蔡宝立南开大学微生物学系南开大学环境科学与工程学院天津300071

在大肠杆菌中表达了Pseudomonas putida ND6菌株中与萘降解有关的水杨醛脱氢酶同工酶NahV,并对其酶学性质进行了研究.结果表明,NahV与ND6菌株中经典的水杨醛脱氢酶NahF的氨基酸序列同源性较低,是一种新的水杨醛脱氢酶.对NahV和NahF的酶... 详细信息

在大肠杆菌中表达了Pseudomonas putida ND6菌株中与萘降解有关的水杨醛脱氢酶同工酶NahV,并对其酶学性质进行了研究.结果表明,NahV与ND6菌株中经典的水杨醛脱氢酶NahF的氨基酸序列同源性较低,是一种新的水杨醛脱氢酶.对NahV和NahF的酶动力学研究结果表明,NahF具有更高的催化效率,而NahV对水杨醛和NAD+的亲和力更强.ND6菌株的NahV和NahF都有较宽的底物范围,可以催化水杨醛、5-氯水杨醛、甲醛、间硝基苯甲醛、邻硝基苯甲醛、邻甲氧基苯甲醛、戊二醛、辛醛和乙二醛的脱氢反应,但对不同底物的催化效率不同.Fe2+,Cu2+和Zn2+对NahV有激活作用,而NahF只能被Fe2+激活.NahF具有更好的热稳定性,在50℃保温30min仍有72.8%的酶活力,而NahV则丧失了88.8%的酶活力.DNA斑点杂交结果表明,类nahF基因在本研究检测的两种来源的萘降解细菌中都存在,而类nahV基因只存在于一种来源的萘降解细菌中.

关键词： Pseudomonas putida ND6萘降解质粒 pND6-1 水杨醛脱氢酶 NahV DNA杂交

用实时定量PCR方法测定萘降解质粒pND6-1的拷贝数

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南开大学学报（自然科学版） 2010年第5期43卷 109-112页

作者：李珊珊李霞赵化冰蔡宝立南开大学微生物学系和生物活性材料教育部重点实验室天津300071 辽宁大学环境学院辽宁沈阳110036 中国人民武装警察部队医学院天津市职业与环境危害生物标志物重点实验室天津300162

Pseudomonas putida ND6是一个高效降解萘的菌株,含有101 858 bp的萘降解质粒pND6-1.用实时定量PCR方法测定了Pseudomonas putida ND6菌株中pND6-1的拷贝数为2.这是第一个测定分子大小超过100 kb的细菌大质粒拷贝数的报道.

关键词： Pseudomonas putida ND6 pND6-1 实时定量PCR 质粒拷贝数

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甲氰菊酯降解酶的海藻酸钙凝胶固定化研究

西北林学院学报 2006年第4期21卷 126-128页

作者：林淦韩萍襄樊学院化学与生物科学系湖北襄樊441053

海藻酸钙凝胶固定甲氰菊酯降解酶．实验室条件测定固定化酶对甲氰菊酯的降解特性．甲氰菊酯降解酶的固定化条件为：海藻酸钠质量浓度20g／L；酶蛋白质量浓度1．0g／L；固定化时间12h；粒径5mm；固定化酶对甲氰菊酯的降解pH稳定范围为5．... 详细信息

海藻酸钙凝胶固定甲氰菊酯降解酶．实验室条件测定固定化酶对甲氰菊酯的降解特性．甲氰菊酯降解酶的固定化条件为：海藻酸钠质量浓度20g／L；酶蛋白质量浓度1．0g／L；固定化时间12h；粒径5mm；固定化酶对甲氰菊酯的降解pH稳定范围为5．0—10.0，稳定温度范围为25—50℃，适应性范围均较游离酶有所提高。Lineweaver—Burk法测定出固定化酶对甲氰菊酯的Km=298．13nmol·mL^-1，Vmax=43．48nmol·mL^-1·min^-1。最优条件下，固定化酶活力为游离酶活力的80％，制备的固定化酶可以重复连续利用3次。

关键词：固定化酶甲氰菊酯海藻酸钙 Pseudomonas putida CP-1

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一株产海藻糖合成酶南极海洋低温细菌的鉴定

极地研究 2005年第2期17卷 127-133页

作者：俞勇李会荣陈波曾胤新中国极地研究中心国家海洋局极地科学重点实验室上海200136

从南极普里兹湾海域海水中分离到一株产海藻糖合成酶的海洋低温细菌BSw10041,革兰氏阴性,杆状,有极生鞭毛,能运动,菌落半透明。进行了常规生理生化和BIOLOG GN2细菌鉴定系统测试,结果表明菌株BSw10041与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida... 详细信息

从南极普里兹湾海域海水中分离到一株产海藻糖合成酶的海洋低温细菌BSw10041,革兰氏阴性,杆状,有极生鞭毛,能运动,菌落半透明。进行了常规生理生化和BIOLOG GN2细菌鉴定系统测试,结果表明菌株BSw10041与恶臭假单胞菌(Pseudomonas putida)的表型特征非常相似。为了进一步确定菌株BSw10041的分类学地位,测定了其16S rDNA序列,分析了相关细菌相应序列的同源性,构建了系统发育树,结果表明BSw10041与***的亲缘关系最近。综合上述结果,菌株BSw10041可鉴定为Pseudomonas putida,定名为Pseudomonas putida BSw10041。

关键词：海藻糖合成酶低温微生物 Pseudomonas putida 南极细菌鉴定低温海洋株产 rDNA序列