检索结果-南通市图书馆

作者：张爱芹黑龙江八一农垦大学

学位级别：硕士

兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的一种急性、败血性传染病，又称兔出血性败血症。兔巴氏杆菌病在世界大多数国家和地区都有分布，给家兔养殖业带来了重大的经济损失，被列为重点防治的家兔传染病之一。purf是与巴氏杆菌营养代谢有... 详细信息

兔巴氏杆菌病是由多杀性巴氏杆菌引起的一种急性、败血性传染病，又称兔出血性败血症。兔巴氏杆菌病在世界大多数国家和地区都有分布，给家兔养殖业带来了重大的经济损失，被列为重点防治的家兔传染病之一。purf是与巴氏杆菌营养代谢有关的基因，编码嘌呤合成过程中谷氨酰胺磷酸核糖焦磷酸转酰胺酶，是嘌呤合成过程中的关键酶。以purf为目标基因，利用正向同源重组技术构建Δpurf突变株，并进行生化特性、生长特性、遗传稳定性、粘附和侵袭能力及对动物的致病性等生物学特性方面的研究，验证purf的致病性，明确该基因是否是多杀性巴氏杆菌的毒力基因，为阐明purf蛋白在多杀性巴氏杆菌中的致病机制奠定基础。PCR扩增C51-17株purf的上、下游同源臂，将其克隆至质粒pBC-SK相应的酶切位点，构建重组质粒pBC-purf;将卡那霉素抗性基因盒克隆至purf的上、下游同源臂之间，构建重组转移质粒pBC-Δpurf;电转化至C51-17感受态细胞中，在抗性培养基上进行筛选，然后用PCR、Western blot和测序进一步验证，并进行生物学特性研究。通过生化试验、遗传稳定性试验、生长特性试验、粘附和侵袭试验和致病性试验等研究突变株的生物学特性。结果表明：成功构建了多杀性巴氏杆菌Δpurf突变株，连续传代20代，具有良好的遗传稳定性;生化特性不变;Δpurf突变株与亲本菌株相比，对Vero细胞的粘附能力增强，但侵袭能力基本一致;体外生长曲线表明，Δpurf突变株在1-3h生长速度基本和亲本菌C51-17株一致，3h后生长速度稍快于亲本菌。Δpurf突变株对Balb/c小鼠的致病实验结果表明：腹腔注射Balb/c小鼠，Δpurf突变株在剂量为1.0×106CFU时对小鼠无致死性，而亲本菌C51-17在剂量为1.0×102CFU对小鼠是完全致死性的，表明该突变株对小鼠的致病性是减弱的。本研究利用正向筛选同源重组技术构建了多杀性巴氏杆菌Δpurf突变株，并分析突变株对小鼠的致病性，该突变株初步明确了purf是多杀性巴氏杆菌的毒力基因，这也为进一步阐明purf蛋白在多杀性巴氏杆菌中的致病机制奠定基础。

关键词：多杀性巴氏杆菌 purf Δpurf突变株致病性

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枯草芽孢杆菌嘌呤合成途径的修饰对腺苷积累的影响

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微生物学报 2014年第6期54卷 641-647页

作者：刘玥何菊华谢希贤徐庆阳张成林陈宁天津科技大学生物工程学院代谢控制发酵技术国家地方联合工程实验室天津300457

【目的】研究嘌呤操纵子中purf、purM、purN、purH和purD基因的共同过表达对枯草芽孢杆菌发酵生产腺苷的影响。【方法】利用温敏质粒pKS1,以单交换的形式增加了purf基因在基因组上的拷贝数,同时将强启动子P43插入嘌呤操纵子中,使嘌呤合... 详细信息

【目的】研究嘌呤操纵子中purf、purM、purN、purH和purD基因的共同过表达对枯草芽孢杆菌发酵生产腺苷的影响。【方法】利用温敏质粒pKS1,以单交换的形式增加了purf基因在基因组上的拷贝数,同时将强启动子P43插入嘌呤操纵子中,使嘌呤合成途径中purf基因及其下游purM、purN、purH和purD基因的表达水平得到加强,通过实时定量PCR(Realtime Quantitative PCR,RT-qPCR)测定相关基因(purf、purM、purN、purH和purD)的转录水平;通过酶活性检测分析关键酶基因扩增对PRPP转酰胺酶活性的影响;通过发酵实验考察出发菌株与工程菌株的生长、耗糖和腺苷积累情况。【结果】实时定量PCR结果表明,purf、purM、purN、purH和purD基因的表达水平均有不同程度的提高,嘌呤合成途径中关键酶PRPP转酰胺酶的活性是出发菌株的2.4倍。摇瓶发酵实验发现工程菌腺苷产量较出发菌提高17.5%,糖苷转化率增加26.1%。5 L罐发酵实验表明,虽然工程菌的菌体生长受到一定的影响,但在相同发酵周期内腺苷产量比出发菌提高了9.7%。【结论】嘌呤操纵子中purf、purM、purN、purH和purD基因转录水平的增强能够提高腺苷的产量,为通过代谢工程技术改造腺苷生产菌提供了理论依据和研究思路。

关键词：枯草芽孢杆菌腺苷 PRPP转酰胺酶启动子 purf 嘌呤合成途径

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枯草芽孢杆菌尿苷生产菌的遗传修饰

枯草芽孢杆菌尿苷生产菌的遗传修饰

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作者：王晨天津大学

学位级别：硕士

尿苷作为合成多种天然核苷结构类似物的原料,在临床和制药工业中有一定的应用需求。枯草芽孢杆菌发酵生产尿苷是一种有潜力的尿苷生产方法。本文在前人工作基础上,对枯草芽孢杆菌合成尿苷的相关代谢工程问题进行了研究。在尿苷生产菌TD... 详细信息

尿苷作为合成多种天然核苷结构类似物的原料,在临床和制药工业中有一定的应用需求。枯草芽孢杆菌发酵生产尿苷是一种有潜力的尿苷生产方法。本文在前人工作基础上,对枯草芽孢杆菌合成尿苷的相关代谢工程问题进行了研究。在尿苷生产菌TD314中,组成型表达天冬氨酸酶(ansB),导致衍生菌株TD318的尿苷产量提高59%,达到14.62 g/L。进一步过表达ansB基因,衍生菌株TD320的尿苷产量只有轻微提高,为15.13 g/L。结果表明,在一定程度上强化延胡索酸氨化生成天冬氨酸的代谢反应,有利于尿苷合成。温和上调丙酮酸羧化酶(pycA)的表达水平,导致发酵液酸化和尿苷产量下降,酸化程度与丙酮酸羧化酶上调幅度正相关。增大丙酮酸羧化反应,导致EMP途径代谢通量增加,磷酸戊糖途径代谢通量下降,是导致尿苷产量下降的主要原因。在TD320菌株中用P启动子额外表达6-磷酸葡糖酸内酯酶(ykgB),衍生菌株TD325的尿苷产量轻微提高,达到有限增大PP途径代谢通量的目的。在pur操纵子弱化菌株基础上,通过弱化谷氨酰胺磷酸核糖二磷酸氨基转移酶(pur F)的SD序列和起始密码子,进一步降低de novo IMP合成途径的代谢通量。衍生菌株TD327,表现为发酵前期尿苷产量增加和发酵液碱化。发酵液碱化的原因可能是氨同化量减少,溢出量增多的结果。修饰胞外碱性蛋白酶编码基因aprE的表达元件,解除AbrB的抑制作用,使AprE在指数期表达。衍生菌株TD328发酵前24 h的尿苷产量提高50%,高达4.41 g/L。但中后期发酵液碱化。结果表明,指数期表达胞外蛋白酶具有促进培养基中粗蛋白分解利用的作用;同时导致氨的同化量减少,造成发酵液碱化。在PucR蛋白激活脲酶操纵子(ure operon)的背景下,删除ure operon的P2启动子及Cod Y结合元件或弱化P3启动子都可以降低尿素分解,使发酵液不再碱化但发酵前24 h尿苷产量下降,其中TD335的尿苷产量最高,达17.85g/L。结果说明,尿苷合成速率被氨的供给所限制。组成型过表达谷氨酸合成酶(gltAB),强化氨的同化反应,导致发酵液碱化现象消失,尿苷产量下降,且尿苷产量下降幅度与gltAB过表达水平正相关。推测氨同化反应的强化导致细胞代谢紊乱,导致尿苷产量下降。

关键词：尿苷合成天冬氨酸酶 purf ykgB aprE ure operon gltAB

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聚氨酯真空隔热板

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真空与低温 2000年第1期6卷 30-33页

作者：朱贤石芳录王娟阎格兰州物理研究所兰州730000

介绍了环保、节能型聚氨酯真空隔热板研制的关键技术。分析讨论了真空板芯材的泡孔尺寸、开孔率及真空度等因素对真空隔热板性能的影响并给出了试验结果。

关键词：聚氨酯真空隔热板表观导热系数 purf 隔热材料

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