检索结果-南通市图书馆

单核细胞增生性李斯特菌prfa缺失株及其亲本株胞外蛋白的比较蛋白质组学

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2013年第4期53卷 390-396页

作者：殷月兰白春光王国梁贾艳艳渠瑾付红高云飞焦新安扬州大学江苏省人兽共患病学重点实验室扬州225009

【目的】prfa蛋白对单核细胞增生性李斯特菌致病过程中毒力基因的表达起着重要调控作用,本文从蛋白质水平上初步探讨了prfa的调控功能。【方法】对LM4及LM4Δprfa的胞外蛋白采用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技... 详细信息

【目的】prfa蛋白对单核细胞增生性李斯特菌致病过程中毒力基因的表达起着重要调控作用,本文从蛋白质水平上初步探讨了prfa的调控功能。【方法】对LM4及LM4Δprfa的胞外蛋白采用双向凝胶电泳结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术,进行比较蛋白质组学研究。【结果】发现差异表达的有31个蛋白点,质谱鉴定成功19个点,对应12种蛋白,其中已知的毒力相关蛋白有:InlC、ActA、LLO,此外还发现丙氨酸丙氨酰羧肽酶、GW重复表面蛋白、假定转录调节因子、天冬氨酸半醛脱氢酶和一些假定蛋白。采用实时荧光定量PCR方法对蛋白质组学方法获得的结果进行了验证,结果显示hly、actA、inlC的基因表达量显著下降,丙氨酰氨羧肽酶、GW重复表面蛋白的mRNA转录水平降低。【结论】prfa蛋白对毒力岛LIPI-I和毒力岛LIPI-II中毒力基因的表达具有重要的调控作用,新发现的转录调控因子和假定蛋白的功能有待于进一步深入研究。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌 prfa 分泌蛋白

依赖prfa转录调控的单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlC启动子结构特点的初步研究(英文)

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学报 2007年第1期47卷 22-28页

作者：罗勤周青春邓灵福高强刘德立华中师范大学生命科学学院武汉430079

为了研究单核细胞增生李斯特菌毒力基因启动子的结构特点与转录调控因子prfa蛋白之间的关系,应用PCR定点突变和重组PCR技术缺失了该菌毒力基因inlC启动子上可能与prfa蛋白结合以及诱发转录起始相关的碱基序列,构建了一系列突变启动子与l... 详细信息

为了研究单核细胞增生李斯特菌毒力基因启动子的结构特点与转录调控因子prfa蛋白之间的关系,应用PCR定点突变和重组PCR技术缺失了该菌毒力基因inlC启动子上可能与prfa蛋白结合以及诱发转录起始相关的碱基序列,构建了一系列突变启动子与lacZ报告基因融合表达质粒,使lacZ基因的表达置于inlC突变启动子下,并分别电转化单核细胞增生李斯特菌野生株P14、prfa蛋白高表达突变株P14a和prfa基因等位缺失突变株A42中,检测相应的β-半乳糖苷酶活性。结果表明:位于inlC启动子转录起始点下游22bp处的一段17bp的类似prfa蛋白结合序列TTAACAGCGTTTGTTAA并没有增强和抑制prfa转录调控活性的功能;甚至将其改造成“完美的”prfa蛋白结合序列TTAACATTTGTTAA后,也不影响inlC依赖于prfa的转录活性地表达;但是,如果缺失inlC启动子上原始的prfa蛋白结合序列,则使inlC依赖于prfa的转录活性完全丧失;另外,单核细胞增生李斯特菌毒力基因inlC和plcA依赖于prfa的转录活性的表达也与启动子上prfa蛋白结合区(prfa-box)距离-10区的碱基个数有关:最适为22或23bp,长于23bp或短于22bp的突变启动子的依赖prfa的转录活性大大降低,甚至没有活性。说明除prfa蛋白结合序列外,受prfa调控的毒力基因启动子上还可能存在其它尚未阐明的结构和序列影响prfa蛋白的结合以及启动转录表达。

关键词：单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocywgenes) inlC启动子 prfa prfa蛋白结合区(prfa-box) 转录调控

单核细胞增生李斯特菌毒力基因aroA启动子上阻碍prfa转录调控元件的研究

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

中华微生物学和免疫学杂志 2008年第6期28卷 521-527页

作者：罗勤周青春华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室武汉430079

目的研究食源性致病菌单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称LM）毒力基因启动子的结构特点及其与转录调控因子prfa（positive regulatory factorA）蛋白之间的关系。方法选取picA和aroA两个毒力基冈启动子作为研究对象，... 详细信息

目的研究食源性致病菌单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，简称LM）毒力基因启动子的结构特点及其与转录调控因子prfa（positive regulatory factorA）蛋白之间的关系。方法选取picA和aroA两个毒力基冈启动子作为研究对象，picA基因启动子（PplcA）上含有一个高度保守的prfa蛋白结合序列TFAACAAATGTFAA（prfa-box）和-10区（TAAGAT），其转录表达受prfa强调控；aroA基因不受prfa调控，所利用的启动子ParoA1为非依赖于prfa的启动子，但是在紧邻ParoA1的下游区域却含有一个与PplcA相似的prfa—box（TTAAAACATGTTAA）和一个-10区（TTTAAT），该区域疑似为依赖于prfa的启动子，被命名为ParoA2。应用PCR定点突变和SOEing PCR（重叠区扩增基因拼接法）技术互换了Pplca和ParoA2上可能影响prfa蛋白结合以及诱发转录起始相关的碱基序列，构建了一系列PplcA—ParoA2杂合突变启动子，并插入到无启动子的lacZ报告基因上游，使lacZ基因的表达置于突变启动子下。获得的启动子融合表达质粒分别电转化入LM野生株P14、prfa蛋白高表达突变株P14a和prfa基因等位缺失突变株A42中，检测相应的β-半乳糖苷酶活性以确定杂合突变启动子是否具有依赖prfa的转录活性及其水平高低。结果当启动子上影响prfa转录调控的两个核心元件prfa—box与-10区的距离保持在最适的22或23个碱基时，交换印M和ParoA2上的两个相应核心元件的碱基序列并不改变启动子的转录活性。但是，当PplcA上的两个核心元件之间的碱基以及-10区下游的序列被相应ParoA2上的序列所替代后，PplcA依赖于prfa的转录活性完全丧失，反之，ParoA2上的这两段序列如果被PplcA的序列所替换，ParoA2则表现出依赖于prfa的转录活性。结论ParoA2的-10区及其下游的序列可能形成发夹结构，阻碍RNA聚合酶-prfa蛋白复合物结合到解旋的单链模板DNA上生成具有转录起始活性的开放复合物，从而抑制了ParoA2依赖于prfa的转录活性的表达。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfa 依赖于prfa的启动子转录调控

prfa led to reduced biofilm formation and contributed to altered gene expression patterns in biofilm-forming Listeria monocytogenes

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PrfA led to reduced biofilm formation and contributed to alt...

毒力基因调控蛋白prfa促进单核细胞增生李斯特菌生物被膜的形成

2013年湖北省暨武汉微生物学会会员代表大会暨学术年会

作者： Qin Luo Junli Shang Xiaoqin Feng Xinxin Guo Liang Zhang Qingchun Zhou Hubei Key Laboratory of Genetic Regulation and Integrative Biology College of Life ScienceCentral China Normal University

The foodborne pathogen Listeria monocytogenes has the ability to develop biofilm in the food-processing environment,which becomes a major concern for food ***,a key transcriptional activator that regulates most of the known listerial virulence gene expression,has been shown to promote *** biofilm *** this study,the whole genome microarray was used to identify differentially expressed genes associated with the putative interaction between biofilm formation and prfa in *** transcriptome analyses indicated that over 21.9%of the L monocytogenes EGDe genes(627 out of 2857 predicted) were altered in their expression of biofilm compared to the planktonic *** genes were classified into different functional categories which cover most of the biochemical functions encountered in bacterial cells,indicating that L. monocytogenes biofilm formation is probably controlled by a complex regulation network involved in variable genes required for the different biological pathways. Further comparison of gene expression profiles of biofilms between L. monocytogenes EGDe and its prfa deletion mutant revealed 185 genes associated with prfa and biofilm *** for 10 genes,transcription levels of 175 genes were completely opposite between Aprfa and wild type during the biofilm formation,i.e,up-regulated genes in△prfa were down-regulated in the wild-type strain,and vice versa,indicating that loss of prfa dramatically altered gene expression patterns in *** biofilm and resulted in reduced ability of the biofilm formation.

关键词： Listeria monocytogenes biofilm prfa whole genome transcription analysis

来源： cnki会议评论

在线全文

cnki会议

学校读者我要写书评

暂无评论

微生物学通报 2011年第9期38卷 1450-1457页

作者：冯飞飞张强王莉冯晓琴尹晓蛟罗勤华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室湖北武汉430079

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是重要的革兰氏阳性食源性致病菌,易在食品以及各种食品加工、运输和保藏设备的接触面形成生物被膜,从而具有更强的抗逆性而难以彻底清除,因此成为食品卫生安全的重要隐患。prfa是LM毒... 详细信息

单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是重要的革兰氏阳性食源性致病菌,易在食品以及各种食品加工、运输和保藏设备的接触面形成生物被膜,从而具有更强的抗逆性而难以彻底清除,因此成为食品卫生安全的重要隐患。prfa是LM毒力基因转录表达的重要调控因子,通过比较研究LM野生株(EGD和EGDe)、prfa缺失株(EGD prfa和EGDe prfa)、无害李斯特菌(Listeria innocua,LI)、携带组成性表达prfa蛋白的重组无害李斯特菌(LI-pERL3-prfa*)以及重组单核细胞增生李斯特菌(EGDe prfa-pERL3-prfa*)生物被膜形成能力的差异,探讨LM重要的毒力调控蛋白prfa对生物被膜形成的影响。实验结果显示:LM野生株具有较强的生物被膜形成能力,而LI形成生物被膜的能力最弱;prfa的缺失能降低LM生物被膜的形成能力;组成性高量表达prfa蛋白可以回复EGDe prfa的生物被膜形成能力,但对LI没有增强作用。以上实验结果表明:prfa在LM生物被膜形成中具有重要的促进作用。

关键词：单核细胞增生李斯特菌无害李斯特菌生物被膜 prfa

prfa与SigB在单核细胞增生李斯特菌生物被膜形成中的作用

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

PrfA与SigB在单核细胞增生李斯特菌生物被膜形成中的作用

作者：冯飞飞华中师范大学

学位级别：硕士

[目的]单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes, LM）是重要的革兰氏阳性食源性致病菌,易在食品以及各种食品加工、运输和保藏设备的接触面形成生物被膜,从而具有更强的抗逆性而难以彻底清除,因此成为食品卫生安全的重要隐患。P... 详细信息

[目的]单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes, LM）是重要的革兰氏阳性食源性致病菌,易在食品以及各种食品加工、运输和保藏设备的接触面形成生物被膜,从而具有更强的抗逆性而难以彻底清除,因此成为食品卫生安全的重要隐患。prfa是LM在侵染宿主细胞时毒力基因转录表达的最重要的调控因子,而SigB是LM抵御外界不良环境时主要的压力应答因子,由于尚未有文献直接把prfa和SigB--这个LM中调控绝大多数毒力基因在宿主细胞内转录表达的重要的蛋白因子和压力应答因子,与LM在宿主外的一种重要存在形式--生物被膜联系起来,所以我们的研究将为深入研究LM致病机理提供新的视点。 [方法]本文的实验方法可以主要分为三部分。一、对LM野生株（EGD）、基因缺失菌株（EGDeΔprfa, EGDeAsigB、EGDΔprfaΔsigB）和无害李斯特菌（LI）在BHI培养基比较了各菌株生物被膜形成能力的差别。二、对prfa的研究本文主要通过两组对比实验即：1)在常用BHI培养基中,比较研究LM野生株（EGD和EGDe）、prfa缺失株（EGDΔprfa和EGDeΔprfa）、无害李斯特菌（Listeria innocua, LI）、携带组成性表达prfa蛋白的重组无害李斯特菌（LI-pERL3-prfa*）以及重组单核细胞增生李斯特菌（EGDeΔprfa-pERL3-prfa*）,在生物被膜形成能力方面差异;2)比较研究LM野生株EGDe、prfa缺失株EGDeΔprfa、以及携带组成性表达prfa蛋白的重组单核细胞增生李斯特菌EGDeAprfa-pERL3-prfa*在不同碳源的培养基中,BHI（Brain Heart Infusion,复杂多糖作为碳源）和基础培养基（Minimal Essential Medium简称MM培养基,可添加PTS糖或非PTS糖作为碳源,本文采用的PTS糖为葡萄糖,非PTS糖为甘油）中生物被膜形成的差异,探讨LM重要的毒力调控蛋白prfa在不同的糖成分作为碳源的培养基中对生物被膜形成的影响;三、比较了三种菌株LM野生株EGD、sigB缺失株EGDeAsigB和无害李斯特菌（Listeria innocua, LI）分别在BHI培养基和BHI培养基添加0.3%胆汁酸盐的培养基中,生物被膜形成能力的差异。 [结果]1)LM野生株具有较强的生物被膜形成能力,而LI形成生物被膜的能力最弱;prfa和SigB的缺失均能降低LM生物被膜的形成能力;2)在营养丰富的常用BHI培养基中,组成性高量表达prfa蛋白可以回复EGDeAprfa的生物被膜形成能力,但对LI没有增强作用。在不同糖类作为碳源的培养基中,各菌株在MM培养基中的被膜形成能力要显著性高于在BHI培养基中相应菌株的被膜形成能力;但无论在何种培养基中LM野生株（EGD或EGDe）均具有较强的生物被膜形成能力,prfa的缺失均能降低LM生物被膜的形成能力;只是在BHI培养基中组成性高量表达prfa蛋白可以回复EGDeAprfa的生物被膜形成能力;而在MM培养基中高量表达prfa蛋白不能回复EGDeΔprfa的生物被膜形成能力,并且在以葡萄糖为唯一碳源的MM培养中,高表达prfa菌株的生物被膜形成能力甚至比EGDeΔprfa还要低;3)EGD、EGDeAsigB和LI三种菌株无论在填不添加0.3%的胆汁酸盐的BHI培养基中均表现出：LI的被膜形成能力最差（几乎没有交联结构的出现）低于EGDeAsigB低于EGD的被膜形成能力,区别在于：在添加0.3%胆汁酸盐后,EGD的被膜形成能力较BHI中要提高一些,而EGDeAsigB却较BHI中被膜形成能力要降低一些,LI几乎不受影响。 [结论]1)LM在营养极端贫乏的MM培养基（无论添加PTS糖还是非PTS糖）中生物被膜的形成能力要远远高于在营养十分丰富的BHI培养基。但无论在哪种培养基中,prfa均在LM生物被膜形成中具有重要的促进作用,缺失该基因均可降低LM的生物被膜的形成能力,但这种促进作用与培养基的成分（我们认为主要是糖成分不同）、prfa数量与活性均有密切的关系。2)0.3%的胆汁酸盐可以在一定程度上促进LM的被膜形成,却不能促进EGDeAsigB的被膜形成,反而使其被膜形成的能力略有下降,表明：LM中对外界不良环境的抵抗能力一定程度上依赖于SigB因子,所以不利于细菌生存的外界条件可以在一定条件下通过调节SigB因子,而调控相关基因的表达,进而通过促进被膜的形成在一定程度上协助LM对抗不良环境。

关键词：单核细胞增生李斯特菌无害李斯特菌生物被膜 prfa SigB 培养基胆汁酸盐

单核细胞增生性李斯特菌prfa基因缺失株的构建及其蛋白质组学特性研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

单核细胞增生性李斯特菌prfA基因缺失株的构建及其蛋白质组学特性...

作者：白春光扬州大学

学位级别：硕士

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是重要的人畜共患李斯特菌病的病原菌,在食品公共卫生领域受到广泛关注,该菌的致病性与调控因子prfa (positive regulatory factor A)蛋白作用下毒力基因的表达有着密切的关系。Prf... 详细信息

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes, Lm)是重要的人畜共患李斯特菌病的病原菌,在食品公共卫生领域受到广泛关注,该菌的致病性与调控因子prfa (positive regulatory factor A)蛋白作用下毒力基因的表达有着密切的关系。prfa是李斯特菌最重要的毒力调控因子之一,能调节LIPI-ⅠLIPI-Ⅱ上毒力基因的表达,从而对李斯特菌黏附及侵袭宿主细胞、逃离机体免疫应答起到调控作用。虽然目前对prfa的调控作用有了一定的了解,但是其在Lm致病中的作用尚未完全阐明。本研究通过同源重组技术构建单核细胞增生性李斯特菌的prfa基因缺失株,并在此基础上对突变株的生物学特性和蛋白质组学特性进行鉴定,以期完善prfa的调控机制,为Lm的致病机理研究提供科学依据。1、单核细胞增生性李斯特菌prfa基因缺失株的构建采用PCR方法从单核细胞增生性李斯特菌LM4基因组中扩增出prfa基因的同源臂片段prs和plcA。采用SOEing PCR方法将prs、plcA基因连接起来,将连接片段prs/plcA与pMD18-T载体相连并测序。测序正确的质粒经双酶切回收后插入穿梭载体pKSV7中,构建成重组穿梭质粒pKSV7-prs/plcA.将质粒电转化到LM4中,在温度和氯霉素抗性双重选择压力下传8代进行同源重组,然后在无选择压力下传10代将质粒丢失,最终获得prfa基因缺失的菌株LM4Δprfa。在LM4Δprfa的回复突变实验中,(?)将prfa基因扩增出来并连接到表达载体pERL3质粒中,转化到DH10β中进行测序。将测序正确的质粒电转到LM4的prfa基因缺失株中,获得LM4Aprfa的回复突变株。2、单核细胞增生性李斯特菌prfa的生物学功能的研究在获得LM4Δprfa的基础上,对prfa的生物学特性进行研究。突变株与其亲本株的生长曲线、生理生化特性、对药物的药敏性无显著差异,表明prfa对生长代谢的影响作用不显著。溶血实验中LM4的溶血效价为24,LM4Δprfa的溶血效价为0,突变株丧失溶血能力,而prfa回复突变株的溶血活性得以完全恢复,表明prfa对hly基因具有调控作用。肌醇磷脂酶与卵磷脂酶实验中LM4的周围均出现透明圈,而LM4Δprfa没有出现此现象,说明突变株细菌失去了磷脂酶活性。生物膜形成实验中,LM4的OD590值为0.8478,LM4Δprfa的OD590值为0.6772,prfa缺失株与其亲本株之间生物膜形成能力差异显著(pprfa的缺失可影响生物膜的形成。在细胞侵袭实验中,LM4的侵袭率为1.68%,LM4Δprfa为0.38%,显示突变株的侵袭力显著下降(pprfa缺失株及其亲本株分泌蛋白的比较蛋白质组学研究本研究采用二维凝胶电泳(2-DE)结合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱鉴定技术(MALDI-TOF-MS),从蛋白质水平上研究prfa的调控功能。实验采用基础培养基培养LM4及LM4Δprfa,离心菌液并用三氯乙酸(TCA)对离心后的培养上清进行沉淀,从而获得分泌蛋白。二维凝胶电泳图谱的差异表达分析显示有31个点,质谱鉴定成功19个点,对应12种蛋白。结果发现已知的毒力相关蛋白有InlC、ActA、LLO,此外还新发现了一些受prfa调控的蛋白,包括丙氨酸丙氨酰羧肽酶、GW重复表面蛋白。结合实时荧光定量PCR方法对蛋白质组学方法进行验证,结果显示hly、actA、inlC的基因表达量显著下降,丙氨酰氨羧肽酶、GW重复表面蛋白的合成也有降低,这些蛋白与prfa之间的关系还要进一步研究。本研究成功构建了单核细胞增生性李斯特菌prfa缺失株LM4Δprfa,并对缺失株和亲本株的生物学特性进行了系统研究,有力证明了prfa对LIPI-Ⅰ, LIPI-Ⅱ上毒力基因的调控作用,并用比较蛋白质组学方法对prfa的调控作用进行了探索。

关键词：单核细胞增生性李斯特菌 prfa 突变株生物学特性蛋白质组学

GFP用于单核细胞增生李斯特菌prfa调控毒力基因actA转录表达的研究

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

生物技术通报 2009年第12期25卷 139-143页

作者：冯莹颖张晓莉张强罗勤蒋苹钱悦冯爱平华中师范大学生命科学学院遗传调控与整合生物学湖北省重点实验室武汉430079 华中科技大学附属协和医院皮肤科武汉430022

prfa是单核细胞增生李斯特菌(LM)中迄今为止发现的惟一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子。为了研究prfa转录调控毒力基因表达的分子机制,将无启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因与毒力基因actA的启动子融合,连接到穿梭载体pLSV16... 详细信息

prfa是单核细胞增生李斯特菌(LM)中迄今为止发现的惟一个调控绝大多数毒力基因转录表达的蛋白因子。为了研究prfa转录调控毒力基因表达的分子机制,将无启动子的绿色荧光蛋白(GFP)基因与毒力基因actA的启动子融合,连接到穿梭载体pLSV16质粒上,构建成表达融合载体pLSV16-PactA-gfp,然后将其电转化入LM野生株P14、prfa高表达突变株P14a和prfa基因等位缺失突变株A42中表达。利用荧光显微镜和荧光酶标仪检测上述3株细菌中绿色荧光蛋白的不同表达强度,从而评价actA基因依赖于prfa的转录活性强弱。结果显示,绿色荧光蛋白在P14a中发出的荧光强度最高,P14次之,A42最弱,两两比较均有显著差异(Pprfa的活性成正相关,其转录表达依赖于prfa的调控;该试验同时也显示GFP能方便、有效地用于研究prfa调控LM不同毒力基因的转录表达水平。

关键词：单核细胞增生李斯特菌 prfa actA毒力基因绿色荧光蛋白报告基因转录调控

碳源及prfa对单核细胞增生李斯特菌生物被膜形成的影响

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

碳源及PrfA对单核细胞增生李斯特菌生物被膜形成的影响

作者：冯晓琴华中师范大学

学位级别：硕士

食源性致病菌单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,以下简称Lm)能够在食品加工环境中形成生物被膜,这已经成为人们普遍关注的食品安全性问题。prfa蛋白是Lm毒力基因转录表达非常重要的调控因子。在本实验中,通过分析比较Lm野... 详细信息

食源性致病菌单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,以下简称Lm)能够在食品加工环境中形成生物被膜,这已经成为人们普遍关注的食品安全性问题。prfa蛋白是Lm毒力基因转录表达非常重要的调控因子。在本实验中,通过分析比较Lm野生型菌株EGDe、prfa缺失突变株EGDe Δprfa、突变型prfa蛋白(即prfa*,组成型高表达prfa蛋白)的过量表达的菌株(EGDeΔprfa+pprfa*、 EGDe+pprfa*)和携带野生型prfa蛋白过量表达的菌株(EGDeAprfa+pprfa、 EGDe+pprfa)在营养丰富的BHI培养基及以葡萄糖、纤维二糖或甘油作为唯一碳源的基础培养基(Minimal Essential Medium,简称MEM)中生物被膜形成的差异,探讨了不同碳源及prfa对Lm生物被膜形成的影响。另外,本文还利用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术比较分析了Lm野生型菌株EGDe在5Ommol/L葡萄糖为碳源的基础培养基以及BHI培养基中浮游状态和生物被膜状态时总蛋白的差异表达。实验结果显示：1)野生型菌株和突变菌株,在MEM中形成生物被膜的能力要远远高于在BHI培养基中;2)在不同碳源的基础培养基中,缺失prfa后能降低Lm的生物被膜形成能力,表明prfa能促进Lm生物被膜的形成,但这种作用可能与培养基中碳源的种类、prfa蛋白的数量以及其活性状态都有着密切的关系;3)在营养丰富的BHI培养基中高表达prfa蛋白的Lm可以回复EGDeΔprfa的生物被膜形成能力;然而在MEM中,高表达prfa蛋白的菌株不能回复EGDeΔprfa生物被膜形成能力,而过量表达prfa*蛋白不但不能回复EGDeAprfa的生物被膜形成能力,相反却大大降低了Lm生物被膜形成能力;4)用MALDI-TOF/TOF成功鉴定出47种差异表达蛋白,其中19种蛋白在生物被膜中表达上调,28种蛋白表达下调。通过COG (Cluster of Orthologous Groups of proteins)对这47种蛋白的功能进行注释和分类,发现大约30种蛋白的功能与糖的新陈代谢相关。其中,与戊糖磷酸途径和糖酵解相关的蛋白在生物被膜中主要为上调表达,但是三羧酸循环中主要的酶CitC在生物被膜中为下调表达。以上结果暗示Lm生物被膜的形成与碳分解代谢抑制效应相关。但是联系碳代谢抑制效应、prfa活性以及Lm生物被膜的形成三者之间的分子基础仍需进一步实验阐明。

关键词：单核细胞增生李斯特菌(L.monocytogenes) 生物被膜 prfa 碳代谢蛋白组学