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phluorin2: an enhanced, ratiometric, pH-sensitive green florescent protein

Advances in Bioscience and Biotechnology 2011年第3期2卷 132-137页

作者： Matthew John Mahon Endocrine Unit Massachusetts General Hospital and Department of Medicine Harvard Medical School.

Green florescent protein (GFP) variants that are sen-sitive to changes in pH are invaluable reagents for the analysis of protein dynamics associated with both endo- and exocytotic vesicular trafficking. Ratiomet-ric phluorin is a GFP variant that displays a bimodal excitation spectrum with peaks at 395 and 475 nm and an emission maximum at 509 nm. Upon acidi-fication, phluorin excitation at 395 nm decreases with a corresponding increase in the excitation at 475 nm. GFP2, a GFP variant that contains mammalian-ized codons and the folding enhancing mutation F64L, displays ~8-fold higher florescence compared to phluorin upon excitation at 395 nm. Using GFP2 as a template, an enhanced ratiometric phluorin (phluorin2) construct was developed to contain fully mammalianized codons, the F64L mutation and ten of the thirteen phluorin-specific mutations. As a result, phluorin2 displays markedly higher flores-cence when compared to phluorin while maintaining the ratiometric pH-sensitivity. Unlike native phluorin, phluorin2 expressed in the ligand-binding domain of the parathyroid hormone 1 receptor is readily detectable by confocal microscopy and dis-plays a marked increase in florescence upon ligand-induced endocytosis to intracellular vesicles. Thus, phluorin2 displays enhanced florescence while sustaining ratiometric pH-sensitivity, representing a significant improvement for this methodological ap-proach.

关键词： GFP phluorin pH Sensing Endocytosis

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pH敏感型荧光蛋白及其在植物细胞生物学中的应用

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植物学报 2015年第3期50卷 394-404页

作者：薛轶群宋凯范路生万迎朗林金星中国科学院植物研究所北京100093 北京林业大学生物科学与技术学院北京100083

pH敏感型荧光蛋白,即phluorin,是荧光强度及光谱特征随环境pH值的变化而改变的一类荧光蛋白。人们通过对密码子使用偏好和特定剪切位点的修饰,已使phluorin及其衍生物成功地在动物、植物和真菌细胞中正常表达,为测量细胞内微环境pH值的... 详细信息

pH敏感型荧光蛋白,即phluorin,是荧光强度及光谱特征随环境pH值的变化而改变的一类荧光蛋白。人们通过对密码子使用偏好和特定剪切位点的修饰,已使phluorin及其衍生物成功地在动物、植物和真菌细胞中正常表达,为测量细胞内微环境pH值的变化,并研究活细胞内依赖或导致pH变化的生理过程提供了有力工具。该文总结了目前已报道的pH敏感型荧光蛋白的种类及特性,并对其在细胞生物学,特别是植物细胞生物学中的应用进行了详细介绍。随着报告基因技术及检测方法的不断改进,phluorin将在植物科学领域发挥更大的作用。

关键词：胞吞胞吐 pH值活体测量分子标记 phluorin

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