检索结果-南通市图书馆

Heterologous expression of human cytochrome P450 2E1 in HepG2 cell line

World Journal of Gastroenterology 2003年第12期9卷 2732-2736页

作者： Jian Zhuge Ye Luo Ying-Nian Yu Department of Pathophysiology,School of Medicine,Zhejiang University,Hangzhou 310031,Zhejiang Province,China Department of Pathophysiology School of Medicine Zhejiang University Hangzhou 310031 Zhejiang Province China.

AIM: Human cytochrome P-450 2E1 (CYP2E1) takes part in the biotransformation of ethanol, acetone, many smallmolecule substrates and volatile anesthetics. CYP2E1 is involved in chemical activation of many carcinogens,procarcinogens, and toxicants. to assess the metabolic and toxicological characteristics of CYP2E1, we cloned CYP2E1 cDNA and established a HepG2 cell line stably expressing recombinant CYP ***: Human CYP2E1 cDNA was amplified with reverse transcription-polymerase chain reaction (Rt-PCR)from total RNAs extracted from human liver and cloned into pgem-t vector. the cDNA segment was identified by DNA sequencing and subcloned into a mammalian expression vector pREP9. A transgenic cell line was established by transfecting the recombinant plasmid of pREP9-CYP2E1 to HepG2 cells. the expression of CYP2E1 mRNA was validated by Rt-PCR. the enzyme activity of CYP2E1 catalyzing oxidation of 4-nitrophenol in postmitochondrial supernate (S9) fraction of the cells was determined by spectrophotometry. the metabolic activation of HepG2-CYP2E1 cells was assayed by N-nitrosodiethylamine (NDEA)cytotoxicity and micronucleus ***: the cloned CYP2E1 cDNA segment was identical to that reported by Umeno et al(GenBank access No.J02843). HepG2-CYP2E1 cells expressed CYP2E1 mRNA and had 4-nitrophenol hydroxylase activity (0.162±***-1 S9 protein), which were undetectable in parent HepG2 cells. HepG2-CYP2E1 cells increased the cytotoxicity and micronucleus rate of NDEA in comparison with those of HepG2 ***: the cDNA of human CYP2E1 can be successfully cloned, and a cell line, HepG2-CYP2E1, which can efficiently express mRNA and has CYP2E1 activity, is established. the cell line is useful for testing the cytotoxicity,mutagenicity and metabolism of xenobiotics, which may possibly be activated or metabolized by CYP2E1.

关键词： CYP2E1 生物转化 HepG2细胞 Rt-PCR 克隆 pgem-t 肝组织

来源：

维普期刊数据库评论

在线全文

维普期刊数据库

学校读者我要写书评

暂无评论

一种高效低背景t载体的构建

引用

中国生物工程杂志 2010年第12期30卷 60-65页

作者：黄文俊王瑛中国科学院植物种质创新与特色农业重点实验室中国科学院武汉植物园武汉430074

介绍一种构建高效低背景t载体的通用方法。使用含有ccdB致死基因的gateway cassette片段作为插入DNA片段以降低背景干扰,连接到pgem-t easy载体骨架上,通过内切酶XcmI酶切重组质粒即得到t载体。对重组质粒进行了酶切,PCR和测序验证,并... 详细信息

介绍一种构建高效低背景t载体的通用方法。使用含有ccdB致死基因的gateway cassette片段作为插入DNA片段以降低背景干扰,连接到pgem-t easy载体骨架上,通过内切酶XcmI酶切重组质粒即得到t载体。对重组质粒进行了酶切,PCR和测序验证,并且利用连接效率实验证实了t载体具有100%的阳性克隆率。构建的t载体不仅继承了pgem-t easy的众多优点,而且具有高效、低背景的卓越特点;另外,引入的常用限制性内切酶和LR重组反应介导的gateway技术为亚克隆提供了便利。

关键词：高效低背景 t载体 pgem-t easy Gateway

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人类多药耐药mdr1基因启动子的克隆及其转录活性的研究

引用

中国实用妇科与产科杂志 2005年第5期21卷 294-296页

作者：蔡春芳蔡俐琼李敏卢实王泽华华中科技大学同济医学院附属协和医院武汉430022

目的克隆编码多药耐药基因(mdr1)的启动子片段并探讨其在上皮性卵巢癌中的转录活性。方法2002年9月至2003年4月华中科技大学同济医学院附属协和医院以人类基因组为模板扩增人类mdr1基因的启动子片断,并将启动子分别插入到pgemt载体和荧... 详细信息

目的克隆编码多药耐药基因(mdr1)的启动子片段并探讨其在上皮性卵巢癌中的转录活性。方法2002年9月至2003年4月华中科技大学同济医学院附属协和医院以人类基因组为模板扩增人类mdr1基因的启动子片断,并将启动子分别插入到pgemt载体和荧光素酶报告基因载体中。将重组荧光素酶报告基因系统分别转染紫杉醇耐药(A2780/taxol)和紫杉醇敏感细胞(A2780),比较启动子在两种细胞中的活性;同时将转染后的A2780/taxol用曲古霉素A(tSA)处理,观察tSA对启动子转录活性的影响。结果mdr1启动子在耐药细胞A2780/taxol中表现出比A2780强的启动子活性,这种活性在tSA诱导后能够提高。结论成功克隆了mdr1启动子片段,在A2780/taxol细胞中mdr1启动子的功能活性的研究为下一步对多耐药性卵巢癌进行靶向基因治疗提供了重要依据。

关键词：转录活性基因启动子克隆同济医学院附属协和医院 A2780 2003年4月上皮性卵巢癌多药耐药基因 mdr1基因华中科技大学 pgem-t 靶向基因治疗耐药性卵巢癌荧光素酶人类基因组 2002年启动子活性基因载体敏感细胞

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

增强型绿色荧光蛋白在DH5α大肠杆菌中的表达

引用

食品科学 2010年第21期31卷 200-203页

作者：王晓辉中国农业大学食品科学与营养工程学院北京100083

采用PCR技术从pEGFPpA-CAN克隆载体中扩增出增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP),插入到pgem-teasy载体中,构建pGt-EGFP重组质粒,其中的SP6启动子可用来表达EGFP蛋白。携带pGt-EGFP重组载体的DH5α大肠杆菌较普通DH5α大肠杆菌菌液略带淡绿色... 详细信息

采用PCR技术从pEGFPpA-CAN克隆载体中扩增出增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP),插入到pgem-teasy载体中,构建pGt-EGFP重组质粒,其中的SP6启动子可用来表达EGFP蛋白。携带pGt-EGFP重组载体的DH5α大肠杆菌较普通DH5α大肠杆菌菌液略带淡绿色,在荧光显微镜下能够清晰观察该大肠杆菌的形态,带有绿色荧光。同时超声裂解携带pGt-EGFP重组载体的DH5α大肠杆菌,提取菌体总蛋白,SDS-PAGE显示EGFP蛋白是以可溶性蛋白形式存在的,分子质量大约为30kD,与其理论值大小一致。

关键词：增强型绿色荧光蛋白 pgem-t easy DH5α大肠杆菌

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

伤寒沙门菌耐药质粒pR_(St98) spv毒力基因的研究

引用

中华检验医学杂志 2005年第5期28卷 519-521页

作者：黄瑞焦旸祁小飞张学光苏州大学医学院微生物学教研室 215007 苏州大学生命科学院

目的　研究多重耐药伤寒沙门菌耐药质粒pRSt98是否具有沙门菌属中其他致病菌毒力质粒上的高度保守基因——spv,并对扩增的spv基因进行克隆及核酸序列测定。方法　对已确定能增强细菌毒力表型的耐药质粒pRSt98,用spv基因特异引物进行PCR... 详细信息

目的　研究多重耐药伤寒沙门菌耐药质粒pRSt98是否具有沙门菌属中其他致病菌毒力质粒上的高度保守基因——spv,并对扩增的spv基因进行克隆及核酸序列测定。方法　对已确定能增强细菌毒力表型的耐药质粒pRSt98,用spv基因特异引物进行PCR扩增和SPV探针的Southerblot分析,并将扩增到的spv基因片段装入克隆载体pgem tEASY进行测序。结果　PCR和Southernblot结果显示,伤寒沙门菌耐药质粒pRSt98上亦存在spv基因的同源序列spvR和spvB,其ORF分别为894bp和1 776bp,与鼠伤寒沙门菌毒力质粒上spv基因的同源性超过99%。结论　本研究从核酸水平首次证实伤寒沙门菌耐药质粒pRSt98具有多效性,是既编码细菌抗药性又编码细菌毒力的“嵌合型”质粒。

关键词：质粒pRSt98 毒力基因 Southern spv基因 pgem-t 鼠伤寒沙门菌毒力质粒 blot PCR扩增细菌抗药性保守基因沙门菌属多重耐药序列测定毒力表型特异引物克隆载体基因片段同源序列核酸水平细菌毒力致病菌 SPV 同源性

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

Osx cDNA反义表达载体的构建

引用

天津医药 2005年第5期33卷 263-265页

作者：郑纺王宝利郭刚天津市内分泌研究所 300070

目的:构建反义Osterix(Osx)cDNA表达载体。方法:快速提取人全血基因组DNA。以DNA为模板,经过两步PCR扩增获得Osx编码序列,与pgemR-tEasy连接获得重组克隆载体。将Osx编码序列反向克隆入真核表达载体pcDNA3,进行序列测定。结果:经序列分... 详细信息

目的:构建反义Osterix(Osx)cDNA表达载体。方法:快速提取人全血基因组DNA。以DNA为模板,经过两步PCR扩增获得Osx编码序列,与pgemR-tEasy连接获得重组克隆载体。将Osx编码序列反向克隆入真核表达载体pcDNA3,进行序列测定。结果:经序列分析证实,Osx扩增序列完全正确,且反向插入到pcDNA3载体。结论:成功构建了Osx反义表达载体,为研究Osx对成骨细胞分化的影响奠定了基础。

关键词：反义表达载体 Osx 全血基因组DNA pcDNA3 pgem-t 真核表达载体成骨细胞分化编码序列 PCR扩增快速提取克隆载体序列测定序列分析扩增序列克隆人

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

猪瘟病毒E2基因pgemE2重组质粒仍具有α互补作用

引用

武汉大学学报（自然科学版） 1999年第6期45卷 879-882页

作者：王宁傅烈振张楚瑜朱燕武汉大学生命科学院武汉430072

在利用pgem-t载体克隆猪瘟病毒石门株E2 基因中发现,E2 基因以与lacZ相同方向插入时,重组质粒仍具有α互补作用,呈典型的蓝色菌落,而以与lacZ基因相反方向插入时,重组质粒无α互补作用,呈白色菌落. 经E2 蛋白检测、序列分析、重组质粒... 详细信息

在利用pgem-t载体克隆猪瘟病毒石门株E2 基因中发现,E2 基因以与lacZ相同方向插入时,重组质粒仍具有α互补作用,呈典型的蓝色菌落,而以与lacZ基因相反方向插入时,重组质粒无α互补作用,呈白色菌落. 经E2 蛋白检测、序列分析、重组质粒缺失和插入等研究,结果表明pgemE2 的α互补作用产生机制不同于目前人们已知的机制. 它由外源E2 基因内部起始合成新的α肽,从而赋于其α互补作用. 此结果表明利用α互补作用并不能筛选到全部克隆.

关键词：猪瘟病毒石门株 pgem-t α互补作用重组质粒

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备

人表皮生长因子（hEGF）在大肠杆菌中的表达及其多克隆抗体的制备

引用

作者：李美娜东北师范大学

学位级别：硕士

人表皮生长因子是由53个氨基酸组成的小分子量单链多肽类细胞因子,它对酸和热稳定。它的显著生物学效应是能够促进内外表皮细胞的生长,在临床上可用于治疗烧伤、创伤、角膜的移植、胃酸、十二指肠溃疡等;还可用于化妆品。由于其具有特... 详细信息

人表皮生长因子是由53个氨基酸组成的小分子量单链多肽类细胞因子,它对酸和热稳定。它的显著生物学效应是能够促进内外表皮细胞的生长,在临床上可用于治疗烧伤、创伤、角膜的移植、胃酸、十二指肠溃疡等;还可用于化妆品。由于其具有特殊的生物学效应使其有很大的潜在经济效益。1960年Cohen首次从小鼠颌下腺中发现了表皮生长因子,之后的40几年又陆续在人体和哺乳动物中发现了与表皮生长因子结构与性质相近的生长因子,转化生长因子α(tGFα)、牛痘病毒生长因子(VGF)、休普氏纤维瘤生长因子(SFGF)、粘液瘤生长因子(MGF)、两性调节蛋白(ampiregulin)、双向调节素(AR)、表皮调节素(Epl)、结合肝素的EGF样生长因子(HB-EGF)、痘苗病毒生长因子(VVGF)等,大小都在50～80个氨基酸之间,在一级结构上有20%～90%的同源性,它们都含有六个半胱氨酸,形成3对二硫键和表皮细胞生长因子受体结合且具有相似的生物活性,构成了表皮生长因子家族。本实验运用PCR技术人工合成了人表皮生长因子hEGF的成熟肽DNA序列。将其克隆到pgem-t载体上,测序正确后将其克隆至pGEX-2t融合表达载体上构建了重组质粒pGEX-2t-hEGF。经测序后正确的重组子转化入BL21(DE3.0)表达宿主菌中,加入终浓度为1.0 mM的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactoside,IPtG)诱导表达GSt-hEGF融合蛋白,融合蛋白表达量占菌体总蛋白30%以上。经SDS-PAGE电泳,经KC1染色后将分离纯化的原核表达的GSt-hEGF的目的条带切下。用液氮研磨成粉末,将含10～20μg融合蛋白的凝胶粉末与弗氏佐剂混匀后,免疫BALB/c小鼠。制备了GSt-hEGF融合蛋白的多克隆抗体,抗体以1:10000稀释时能够明显检测出细菌总蛋白中的GSt-hEGF融合蛋白和纯化的EGF-PEA-scFv融合蛋白。

关键词：人表皮生长因子 pgem-t pGEX-2t GSt-hEGF 原核表达多克隆抗体

来源：

同方学位论文库评论

在线全文

同方学位论文库

学校读者我要写书评

暂无评论

人细胞间黏附分子1cDNA的克隆及表达载体的构建

引用

中国医师杂志 2005年第5期7卷 617-619页

作者：何艳苏先狮蒋永芳陈军中南大学湘雅二医院肝病研究中心湖南长沙410011

目的构建人细胞间黏附分子-1真核表达重组体pcDNA3.1hisB-ICAM-1。方法设计、合成ICAM-1基因序列特异性引物,从肝癌组织中提取总RNA,以此为模板经Rt-PCR扩增人ICAM-1的cDNA片段;然后将其克隆到pgem-tEasyVector,构建中介重组体(pgem-ICA... 详细信息

目的构建人细胞间黏附分子-1真核表达重组体pcDNA3.1hisB-ICAM-1。方法设计、合成ICAM-1基因序列特异性引物,从肝癌组织中提取总RNA,以此为模板经Rt-PCR扩增人ICAM-1的cDNA片段;然后将其克隆到pgem-tEasyVector,构建中介重组体(pgem-ICAM-1),再克隆,构建真核表达重组体pcDNA3.1HisB-ICAM-1,经菌落PCR和限制性酶切有目的片段出现,进行DNA序列分析。结果Rt-PCR扩增得到人成熟ICAM-1的cDNA片段大小为1622bp,中介重组体(pgem-ICAM-1),酶切后与真核表达载体连接,根据酶切鉴定和DNA序列分析得到真核表达重组体pcDNA3.1HisB-ICAM-1;结论成功构建了真核表达重组体pcDNA3.1HisB-ICAM-1。

关键词：克隆真核表达重组体 DNA序列分析 pcDNA3 细胞间黏附分子-1 cDNA片段 ICAM-1 序列特异性引物 pgem-t 真核表达载体限制性酶切总RNA 肝癌组织酶切鉴定 1基因 PCR 中介

来源：

维普期刊数据库

同方期刊数据库评论

在线全文

学校读者我要写书评

暂无评论

欢迎您,

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：

通借通还

欢迎您,

建议与咨询 留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

时间限定

文献类型

馆藏选择

核心期刊

语言

文献类型

帮助

文字说明：

检索规则说明：

检索范例：

分类表

所选分类

限定检索结果

文献类型

馆藏范围

日期分布

学科分类号

主题

机构

作者

语言

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

在线全文

请选择保存的检索档案： 新增检索档案 确定 取消

请选择收藏分类： 新增自定义分类 确定 取消

通借通还

建议与咨询留下您的常用邮箱和电话号码，以便我们向您反馈解决方案和替代方法

请选择保存的检索档案：

请选择收藏分类：