检索结果-南通市图书馆

一株Sanguibacter sp.C4产几丁质酶基因的克隆与表达(英文)

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Acta Genetica Sinica 2006年第11期33卷 1037-1046页

作者：陶勇金虹龙章富张丽丁秀琼陶科刘世贵四川大学生命学院教育部生物资源与生态环境重点实验室成都610064 成都医学院成都610081

Chi58是***4产生的一种胞外几丁质酶。通过chiA的特异性PCR引物探测到菌株C4中存在几丁质酶,并将扩增到的几丁质酶基因片段(chiA-F)克隆、测序后,提交GenBank数据库进行同源性搜索。对从GenBank中获得的高同源性序列进行比对,并根据保... 详细信息

Chi58是***4产生的一种胞外几丁质酶。通过chiA的特异性PCR引物探测到菌株C4中存在几丁质酶,并将扩增到的几丁质酶基因片段(chiA-F)克隆、测序后,提交GenBank数据库进行同源性搜索。对从GenBank中获得的高同源性序列进行比对,并根据保守区域设计2对PCR引物进行嵌套PCR,扩增出Chi58基因的开放阅读框(ORF)。测序结果表明该酶的ORF由1692个核苷酸组成,编码563个氨基酸,在N端有23个氨基酸的信号肽,其成熟蛋白的分子量应为58.544kDa。对其推导氨基酸的序列分析表明Chi58与沙雷氏菌的几丁质酶(chiA)有高度同源性(88.9%～99.6%),其结构主要包括信号肽序列、PKD结构域和18家族糖苷水解酶结构域。将该基因克隆到pet32a(+)载体构建重组质粒pChi58,转入大肠杆菌BL-21(DE3)进行融合表达。经IPTG诱导后,可见分子量约81.1kDa的融合蛋白的表达。

关键词：几丁质酶克隆表达 pet32a Chi58 融合蛋白

抗甲胎蛋白单链抗体在大肠杆菌中表达条件的优化及活性鉴定

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中国药科大学学报 2012年第5期43卷 460-465页

作者：吕海丽姬晓南冯丽亚张瑜高向东中国药科大学生命科学与技术学院南京210009

将抗甲胎蛋白单链抗体(scFv-AFP)基因克隆至载体pet32a,转入大肠杆菌*** BL21(DE3),在不同的诱导剂浓度、诱导温度和时间下诱导pet32a-scFv-AFP表达,SDS-PAGE分析表明37℃培养4 h时加入0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5 ... 详细信息

将抗甲胎蛋白单链抗体(scFv-AFP)基因克隆至载体pet32a,转入大肠杆菌*** BL21(DE3),在不同的诱导剂浓度、诱导温度和时间下诱导pet32a-scFv-AFP表达,SDS-PAGE分析表明37℃培养4 h时加入0.4 mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导5 h为最适表达条件,目的蛋白表达量约为总蛋白的50%,其产物以包涵体形式存在。利用稀释法和透析法对包涵体复性,复性率为37.38%,活性蛋白产量达到200 mg/L。竞争抑制ELISA法初步鉴定活性,当scFv-AFP与亲本单抗浓度比为16∶1,竞争ELISA抑制率达到54.13%,说明scFv-AFP具有较好的抗原结合特异性。该研究为scFv-AFP的获得与抗体的进一步应用改造奠定了基础。

关键词：甲胎蛋白单链抗体表达 E.coliBL21(DE3) pet32a

猪瘟病毒E2糖蛋白主要抗原域的原核表达及纯化

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现代农业科技 2007年第1期 109-110,120页

作者：李丛丛吴艳红何成强李云龙山东师范大学生命科学学院动物抗性实验室山东济南250014

本实验利用PCR方法从pUC18-E2上扩增出E2基因的主要抗原域片段,长为601bp,将该PCR产物克隆到原核表达载体pet32a上,得到pet32a-e2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞I,PTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达,... 详细信息

本实验利用PCR方法从pUC18-E2上扩增出E2基因的主要抗原域片段,长为601bp,将该PCR产物克隆到原核表达载体pet32a上,得到pet32a-e2重组质粒,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞I,PTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达,目的蛋白以包涵体形式表达,其分子量42KD左右;Ni亲和层析柱纯化融合蛋白,并通过Western blot检测。pet32a-e2重组子的构建及蛋白表达与纯化为进一步制备多克隆抗体或单克隆抗体打下了基础。

关键词：猪瘟病毒 E2 pet32a 原核表达蛋白她化

单核细胞增生性李斯特菌srtA基因的克隆与原核表达

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石河子大学学报（自然科学版） 2015年第2期33卷 196-200页

作者：吴学林曹树珠马勋石河子大学动物科技学院预防兽医学重点实验室石河子832003

为了探究从新疆发病绵羊中临床分离的单核细胞增多性李斯特菌(简称LM90SB2)srt A基因的特异性及其在原核表达质粒p ET32a中的表达,本研究利用PCR技术扩增LM90SB2的srt A基因,测序后并进行序列比对分析,将其克隆到原核表达质粒p ET32a中... 详细信息

为了探究从新疆发病绵羊中临床分离的单核细胞增多性李斯特菌(简称LM90SB2)srt A基因的特异性及其在原核表达质粒p ET32a中的表达,本研究利用PCR技术扩增LM90SB2的srt A基因,测序后并进行序列比对分析,将其克隆到原核表达质粒p ET32a中构成重组表达质粒p ET32a-srt A。重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导使其表达,SDS-PAGE电泳检测,同时采用Western-blotting对表达产物进行了鉴定。结果表明:Srt A蛋白在BL21(DE3)中大量表达,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测分析其为1个分子量为47 ku的融合蛋白,与预期的大小相符合,成功的构建了重组质粒p ET32a-srt A,并使其在BL21(DE3)中获得了高效的表达。本研究为下一步研究其对李斯特菌致病性的影响及制备单克隆抗体奠定了基础。

关键词：单增李斯特菌 pet32a srtA基因原核表达

单核细胞增生性李斯特菌srtA基因的克隆与原核表达

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单核细胞增生性李斯特菌srtA基因的克隆与原核表达