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腺病毒介导的靶向p85和Akt1短发夹RNA对人胃腺癌细胞生长抑制作用的研究

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中华内科杂志 2009年第7期48卷 557-561页

作者：张靖付彦超康春生张庆瑜王涛张洁天津医科大学总医院消化科 300052

目的构建靶向p85和蛋白激酶B1（pKB1／Akt1）的短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体，研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果。方法构建腺病毒载体rAd5-p＋A，体外转染SGC-7901细胞后，以实时定量pCR和Westernblot分别检测p85和Akt1的m... 详细信息

目的构建靶向p85和蛋白激酶B1（pKB1／Akt1）的短发夹RNA（shRNA）腺病毒载体，研究其对人胃腺癌细胞SGC-7901生长的抑制效果。方法构建腺病毒载体rAd5-p＋A，体外转染SGC-7901细胞后，以实时定量pCR和Westernblot分别检测p85和Akt1的mRNA和蛋白质的表达。以噻唑蓝比色分析法（MTT法）和流式细胞法评价转染后胃癌细胞的增殖活性。构建裸鼠皮下荷瘤模型进-步观察rAd5-p＋A对SGC-7901细胞生长的抑制效果，并应用原位末端标记技术（TUNEL法）检测肿瘤细胞的凋亡情况。结果成功构建的rAd5-p＋A重组腺病毒载体转染SGC-7901细胞后可显著抑制p85和Aktl的mRNA表达，而p85和Aktl蛋白表达量在转染48h、72h后分别下调57．5％、63．7％和67．8％、75．6％，与空白对照组和通用腺病毒对照（rAd5-HK）组相比，差异具有统计学意义（p=0．005，p=0．003）。与空白对照组和rAd5-HK组相比，SGC-7901细胞的增殖活性在rAd5-p＋A转染后第2天明显下降（p〈0．001），且tAd5-p＋A转染组进入S期的细胞数减少了5．9％-7．1％，而进人G0／G1期的细胞增加了12．1％～13．7％。裸鼠皮下荷瘤模型治疗实验也显示，rAd5-p＋A可抑制胃癌细胞的生长，诱导细胞的凋亡。结论腺病毒介导的靶向p85和Aktl的shRNA可抑制人胃腺癌细胞的生长，这可能为胃腺癌靶向性联合基因治疗提供新的策略。

关键词：胃腺癌腺病毒载体 p85 蛋白激酶B1 短发夹RNA

Gene Transfection Mediated by Ultrasound and pluronic p85 in HepG2 Cells

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Journal of Huazhong University of Science and Technology(Medical Sciences) 2007年第6期27卷 700-702页

作者：王芬李开艳陈云超邓远洪恺 Department of Medical Ultrasound Tongji Hospital Tongji Medical College Huazhong University of Science and Technology

In order to assess whether gene transfection could be mediated by ultrasound in association with p85 and find the appropriate parameters of ultrasound irradiation, the effects of ultrasound with or without p85 on gene transfection of HepG2 cells were examined. The HepG2 cells were irra- diated by ultrasound at 1 MHz, 0.4-2.0 W/cm2 and 50% duty cycle with plasmid encoding enhanced green fluorescent protein （EGFp） as a report gene. Forty-eight h later, the expression of EGFp was detected under the fluorescence microscopy. Transfection efficacy was quantitatively assessed by flow cytometry, and cell viability was evaluated by trypan blue exclusion. The results showed that the transfection efficacy was increased with the increases in ultrasound output power and the ideal transfection efficacy was achieved in HepG2 cells irradiated by ultrasound at 0.8 W/cm2 for 30 s. The transfection efficacy in ulstrasound＋p85 group was three times higher than in single ultrasound group [（17.63±1.07）% vs （5.57±0.56）%, p〈0.05]. The cell viability was about 81% and 62% in ultrasound group and ultrasound＋p85 group respectively. It was concluded that ultrasound in combination with p85 could mediate the gene transfection of HepG2 cells, ideal transfection efficacy was achieved by ultrasound irradiation at 0.8 W/cm2 for 30 s, and p85 could somewhat increase the damage to cells caused by ultrasound.

关键词： ultrasound p85 gene transfection HepG2

小檗碱对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型pI-3K p85蛋白表达的影响

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世界华人消化杂志 2008年第19期16卷 2102-2106页

作者：易屏陆付耳陈广徐丽君董慧王开富华中科技大学同济医学院附属同济医院中医科湖北省武汉市430030 华中科技大学同济医学院附属同济医院中西医结合研究所湖北省武汉市430030

目的:研究小檗碱对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型pI-3K p85蛋白表达的影响,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制.方法:分别以0.5mmol/L软脂酸与25mmol/L葡萄糖加0.6nmmol/L胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,予以小檗碱进行干预,同时... 详细信息

目的:研究小檗碱对3T3-L1胰岛素抵抗细胞模型pI-3K p85蛋白表达的影响,探讨小檗碱改善胰岛素抵抗的分子机制.方法:分别以0.5mmol/L软脂酸与25mmol/L葡萄糖加0.6nmmol/L胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞产生胰岛素抵抗,予以小檗碱进行干预,同时以阿司匹林作为阳性对照,以2-脱氧-[3H]-D-葡萄糖摄入法观察葡萄糖的转运率,用Western blot检测pI-3K p85蛋白的表达.结果:0.5mmol/L软脂酸作用24h或25mmol/L葡萄糖加0.6nmmol/L胰岛素作用18h分别使3T3-L1脂肪细胞胰岛素刺激的葡萄糖转运抑制67%和60%,Western blot显示pI-3K p85蛋白表达减少,与正常对照组比较有统计学意义(ppI-3K p85蛋白表达增加,与模型组比较有明显差异(ppI-3K p85蛋白的表达与小檗碱的剂量和作用时间呈依赖关系.结论:小檗碱可明显改善游离脂肪酸和高糖诱导的胰岛素抵抗,其分子机制可能与小檗碱提高pI-3K p85蛋白的表达有关.

关键词：小檗碱胰岛素抵抗 pI-3K p85 游离脂肪酸高糖

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p85在小鼠大脑皮层发育中的功能研究

P85在小鼠大脑皮层发育中的功能研究

作者：成欣然西北农林科技大学

学位级别：硕士

哺乳动物的大脑皮层是由数十亿个形态功能不同的神经元及胶质细胞组成的一个高度组织化的结构,是形成高级认知、调节运动能力的重要器官。大脑皮层发育的过程首先要经历神经祖细胞的增殖分化,这一过程决定不同类型神经元的数量,然后投... 详细信息

哺乳动物的大脑皮层是由数十亿个形态功能不同的神经元及胶质细胞组成的一个高度组织化的结构,是形成高级认知、调节运动能力的重要器官。大脑皮层发育的过程首先要经历神经祖细胞的增殖分化,这一过程决定不同类型神经元的数量,然后投射神经元会沿胶质细胞的放射纤维向软脑膜最表层的方向迁移,经过“由内向外”的迁移模式,逐渐形成大脑皮层的六层水平结构,神经元最终在特定的位置获得层特异性,并形成精确的突触连接和神经网络。这一系列生物过程的精确协调和正确连接是保证大脑皮层功能正常的必要条件。随着基因组测序分析、转录组分析等科学技术的发展,越来越多控制大脑皮层发育或导致神经性疾病的因子被发现,pI3K参与的信号通路pI3K/AKT/mTOR就是其中一条。研究证明,该条信号通路的过度激活与半侧巨脑症有着密切的联系。根据pI3K的亚基结构和不同功能,研究者将其分为三大类,其中Class I pI3Ks结构功能最为复杂:包括一个催化亚基和一个调节亚基。在生物体内,这类pI3K可以被受体络氨酸激酶、G蛋白偶联受体以及某些致癌基因,如Ras激活,而后利用ptdIns(4,5)p2生成pIp3,进一步产生ptdIns(3,4)p,这一过程会调动细胞生长、进入和退出细胞周期、细胞迁移以及细胞存活等一系列生命活动。而它的调节亚基p85可以通过不同的作用途径对pIp3的生成量进行调节,所以在本实验选择结构域最完整的p85β,研究其对大脑皮层的发育的功能。本实验构建了p85的超表达载体,利用子宫内电击转染技术将该基因导入晚出生的神经元或神经祖细胞中,再结合BrdU标记、免疫荧光染色和激光共聚焦成像技术,观察分析p85在小鼠大脑皮层发育过程中的功能,主要得到以下结果:1.成功构建p85超表达载体,并在pC12细胞系中验证该载体可以正常表达荧光蛋白,用于以后的子宫内电击转染;2.超表达p85抑制晚出生的神经元放射状迁移,并改变迁移中神经元的形态。原代神经元培养发现,超表达p85改变神经元形态;在体内超表达p85的神经元出现明显的迁移障碍,并且突起分支数量显著增多,但是顶突起的生长受到影响;3.超表达p85影响神经元最终层定位,却不影响神经元命运决定。超表达p85的神经元在小鼠出生后第7天仍不能迁移到对照组中神经元到达的位置,但是停留在大脑皮层深层的神经元依然可以被神经元的特异性标记物标记,说明这些神经元的命运决定不受影响;4.超表达p85延长神经祖细胞细胞周期,并减弱其增殖能力。利用BrdU标记,在不同时期标记处于不同细胞周期阶段的细胞,发现超表达p85的神经祖细胞的细胞周期持续时间与对照组细胞相比较长,并且在相同时间内增殖的细胞数量减少;5.超表达p85抑制神经元方向的细胞分化。用新生神经元标记物Brn2标记E18.5天时大脑皮层内的神经元,发现超表达p85的神经元中新生神经元数量比例明显少于对照组中神经元数量比例。综上所述,p85在小鼠大脑皮层发育中参与调节了神经细胞增殖分化、神经元迁移等多个过程。

关键词： p85 大脑皮层神经元迁移神经祖细胞增殖分化

包埋紫杉醇的pluronic p85/聚乳酸纳米粒子制备及体外释放行为考察

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中国实验方剂学杂志 2014年第1期20卷 1-4页

作者：李资玲熊向源龚妍春李玉萍江西科技师范大学生命科学学院南昌330013

目的:制备包埋紫杉醇的pluronic p85/聚乳酸(pLA-p85-pLA)纳米粒子并考察其形态及体外释放行为。方法:采用本体聚合法合成pLA-p85-pLA嵌段共聚物,透析法制备pLA-p85-pLA纳米粒子,UV测定包封率及载药量,HpLC测定紫杉醇的体外释放行为,MT... 详细信息

目的:制备包埋紫杉醇的pluronic p85/聚乳酸(pLA-p85-pLA)纳米粒子并考察其形态及体外释放行为。方法:采用本体聚合法合成pLA-p85-pLA嵌段共聚物,透析法制备pLA-p85-pLA纳米粒子,UV测定包封率及载药量,HpLC测定紫杉醇的体外释放行为,MTT测定纳米粒子的生物相容性。HpLC条件为流动相乙腈-pBS(50∶50),检测波长227 nm。结果:包埋紫杉醇的pLA-p85-pLA纳米粒子粒径140 nm,包封率56%,载药量9.4%,体外释放在前20 h呈快速释放形式,接着在长达近4 d的时间内呈现缓慢释放,且仅约12%被包埋的紫杉醇释放出来,包埋紫杉醇的pLA-p85-pLA纳米粒子处理的OVCAR-3细胞存活率(41%)明显低于空白紫杉醇(70%)。结论:pLA-p85-pLA嵌段共聚物是良好的药物载体,可用于包埋疏水性强的抗癌药物。

关键词：紫杉醇 pluronic p85 纳米粒子体外释放行为高效液相色谱细胞存活率细胞毒性试验

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针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌pI3K p85的影响

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新中医 2010年第10期42卷 112-114页

作者：张梁李梅易玮许能贵孙健广州中医药大学广东广州510405 广东省中医院针灸科广东广州510120

目的:观察针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶(pI3K)之亚基p85的影响。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组和针刺组各8只,以高糖高脂高盐饮食复制胰岛素抵抗动物模型,采用葡萄糖氧化酶法、ELISA、实时荧光定量pCR、we... 详细信息

目的:观察针刺对胰岛素抵抗模型大鼠骨骼肌磷脂酰肌醇3激酶(pI3K)之亚基p85的影响。方法:将24只SD大鼠随机分为空白组、模型组和针刺组各8只,以高糖高脂高盐饮食复制胰岛素抵抗动物模型,采用葡萄糖氧化酶法、ELISA、实时荧光定量pCR、western-blotting等方法,检测比较各组大鼠空腹血糖(FBG)、血浆胰岛素(FINS)、胰岛素敏感性指数(ISI)、血清C-肽(C-p)和骨骼肌pI3K p85α mRNA及蛋白的表达。结果:模型组大鼠的FBG、FINS、C-p、pI3K p85α mRNA、pI3Kp85蛋白表达均较空白组显著升高(ppp、pI3K p85α mRNA、pI3K p85蛋白表达均较模型组有不同程度的降低(ppppI3K p85蛋白的过度表达,使pI3K的活性升高,这可能是针刺改善胰岛素抵抗的作用机理之一。

关键词：胰岛素抵抗针灸疗法针刺骨骼肌pI3K p85 动物实验大鼠

美军制式手枪选型的参验产品之一——鲁格p85手枪

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现代兵器 1999年第8期 14-16页

作者：高玉国

80年代末,曾经在美国国会大堂被吵得沸沸扬扬的美军新手枪选型会不得不再次开张,进行第二轮竞选。这次选型只有三家公司参加,包括第一轮中选并被看好的伯莱塔公司、第一轮败北但不服气的史密斯-韦森公司和首次参加竞争的鲁格公司。在美... 详细信息

80年代末,曾经在美国国会大堂被吵得沸沸扬扬的美军新手枪选型会不得不再次开张,进行第二轮竞选。这次选型只有三家公司参加,包括第一轮中选并被看好的伯莱塔公司、第一轮败北但不服气的史密斯-韦森公司和首次参加竞争的鲁格公司。在美国民用枪械市场,鲁

关键词：套筒座机匣 p85 弹匣手枪扳机护圈参验参伍之验美军选型

平喘宁调节pI3K-Akt/pKB信号通路p85、mTOR、ASK1蛋白干预哮喘大鼠气道重塑机制的研究

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平喘宁调节PI3K-Akt/PKB信号通路P85、mTOR、ASK1蛋白干预哮喘大...

作者：屈彬安徽中医药大学

学位级别：硕士

目的:本实验通过研究平喘宁对寒哮大鼠肺组织中pI3K-Akt/pKB信号传导通路中的相关蛋白的干预来探讨哮喘气道重塑的相关作用机制。采用免疫组化、RT-q pCR等方法检测寒哮大鼠肺组织中的p85、m TOR、ASK1、Caspase8、TSC1的表达量以及平... 详细信息

目的:本实验通过研究平喘宁对寒哮大鼠肺组织中pI3K-Akt/pKB信号传导通路中的相关蛋白的干预来探讨哮喘气道重塑的相关作用机制。采用免疫组化、RT-q pCR等方法检测寒哮大鼠肺组织中的p85、m TOR、ASK1、Caspase8、TSC1的表达量以及平喘宁对其表达量的影响,探讨平喘宁对延缓和改善寒哮大鼠的气道重塑的相关机制。方法:1.选用105只周龄在6-8周,体重在180-230g之间的SpF级健康的雄性SD大鼠。大鼠采购于安徽医科大学实验动物中心,运用随机方法将大鼠分成15只每组的共计7个组别,分别是正常组、模型组、平喘宁高剂量组、平喘宁中剂量组、平喘宁低剂量组、桂龙咳喘宁组以及地塞米松组。2.大鼠先进行1周适应性饲养后,在第1d、第8d对每只大鼠腹腔注射1ml的悬液(此悬液由生理盐水及10%的卵蛋白构成)令其致敏,其中正常组以1ml的生理盐水替代此悬液进行腹腔注射。3.自第15d开始对除正常组外的其余6组大鼠进行1周的连续雾化过敏,制备寒哮模型,具体操作如下:使用装有1%卵蛋白悬液的超声雾化机对大鼠进行超声雾化30min,并且每天对大鼠予以相同时间的寒冷刺激。然后自22d开始对大鼠进行灌胃给药(药量依据大鼠和人的体表面积换算得出),维持4周,其中正常组和模型组予以同等方法得出的生理盐水进行灌服。4.连续灌胃给药28d后,予以卵蛋白对大鼠进行最后一次激发,并在激发后的2h内,解剖大鼠,取出肺组织,将大鼠左肺置于福尔马林中固定,右肺置于-80℃冰箱中冻存。采用HE染色法观测实验大鼠肺组织的病理改变,采用免疫组化法检测肺组织中p85、m TOR的表达;采用RT-q pCR检测ASK1、TSC1、Caspase8的表达量。结果:HE染色后,相比于正常组,模型组大鼠支气管结构发生改变,可见多种炎性细胞浸润、粘液栓及脱落的支气管上皮细胞,气管平滑肌增生明显,黏膜褶皱增多,管腔出现狭窄。其余5个药物组大鼠气道重塑相较于模型组均有不同程度的改善。RT-q pCR检测:相较于正常组,其余六组的ASK1、Caspase8的表达量均升高(ppppase8的表达量较地塞米松组与桂龙咳喘宁组下降明显(ppppppp85的表达量均有不同程度的下降(pp85表达的下调最为显著(pp85的表达均有所升高(pp85的表达的上调大于地塞米松组与桂龙咳喘宁组(pp85表达的上调又高于平喘宁低剂量组(ppppppI3K-Akt/pKB信号传导通路中的p85、m TOR、ASK1、TSC1及Caspase8调节进而减缓寒哮大鼠的气道炎症反应,减低气道的高反应性,并能够缓解气道重塑达到哮喘治疗的效果。

关键词：平喘宁 p85 mTOR ASK1 TSC1 Caspase8 哮喘气道重塑

让未来感融入生活特斯拉Model S p85

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汽车与运动 2015年第8期 102-107页

作者：吕思达赵进

4.4s的0~100km/h加速时间,450km以上的续航里程,这辆带着未来的特斯拉还会给我们带来什么新鲜体验呢？在几天的时间里。

关键词：特斯拉 Model S p85 科技感汽油车新鲜事儿纯电动车中控低速行驶加速时间制动踏板