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作者：李萍山东大学

学位级别：硕士

第一部分IL-13通过mTOR/p70s6k1通路调控鼻上皮细胞增殖的研究研究背景和目的慢性鼻窦炎(Chronic rhinosinusitis,CRs)主要分为慢性鼻窦炎伴鼻息肉(Chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRswNp)及慢性鼻窦炎不伴鼻息肉(Chronic rhinosinusitis without nasal polyps,CRssNp)两种类型。根据内在型分型分为2型和非2型(1型和3型)炎症,相较于非2型炎症,2型炎症症状表现更重,复发率更高,目前CRswNp的发病机制研究更多关注于2型炎症。鼻息肉的发生与鼻黏膜上皮异常组织重塑有关,上皮组织重塑主要表现之一为基底细胞增殖过度。基底细胞标志物p63的过度表达与鼻息肉(Nasal polyps,Np)上皮增生有关。IL-13作为2型炎症的主要因子可以促进多种细胞的增殖,然而IL-13对鼻黏膜上皮增殖的作用尚未有明确研究。pI3k/Akt/mTOR通路对细胞生长、增殖、分化、凋亡等生理过程具有极其重要的生物学功能。p70s6核糖体蛋白激酶1(p70s6k1)是mTOR的一种直接下游底物,在细胞增殖和细胞周期进程中起着重要作用,可能通过促进G1/s期转换来发挥其生理功能。本研究旨在探讨m TOR及其下游分子p 7 0 s 6 k1在鼻息肉上皮组织的表达水平及功能,验证IL-13是否通过mTOR/p70s6k1通路增加鼻黏膜上皮细胞的增殖程度,从而增加鼻黏膜上皮的增殖程度,最终导致鼻息肉的发生。研究方法组织实验:1)本研究共纳入67例CRswNp患者,29例健康对照组织样本。2)行实时定量pCR,检测在健康对照组和Np组样本中IL-13、mTOR、p70s6k1、p63、ki67、cyclin E1和CDk2的mRNA表达量。3)行免疫印迹和免疫组化染色,对健康对照组和Np组的mTOR、p-mTOR、p70s6k1、p-p70s6k1、p63、ki67、cyclin E1和CDk2的蛋白表达量进行检测。细胞实验:1)将购买的人鼻黏膜上皮细胞系分为4组:a,对照组;b,IL-13刺激组;c,IL-13+mTOR抑制剂处理组;d,IL13+p70s6k1抑制剂处理组。48小时后收取细胞进行免疫印迹检测mTOR、p-mTOR、p70s6k1、p-p70s6k1、p63、ki67、cyclin E1和CDk2的蛋白表达量以及EdU增殖实验检测增殖能力。2)使用健康对照组的鼻甲黏膜分离出的人体鼻上皮干/祖细胞接种于气-液界面,在细胞扩增阶段进行处理,分为4组:a,对照组;b,IL-13刺激组;c,IL-13+mTOR抑制剂处理组;d,IL13+p70s6k1抑制剂处理组。5天后收取细胞进行免疫印迹检测mTOR、p-mTOR、p70s6k1、p-p70s6k1、p63、ki67、cyclin E1和CDk2的蛋白表达量,免疫荧光染色行p63和ki67共染。3)将分离培养获得的人鼻上皮干细胞接种于气-液界面进行分化培养,加入IL-13分别刺激细胞扩增期和细胞扩增+分化期,直至上皮细胞完全分化为人鼻黏膜上皮细胞,收取细胞进行免疫印迹检测mTOR、p-mTOR、p70s6k1、p-p70s6k1、p63、ki67、cyclin E1和CDk2的蛋白表达量及石蜡包埋切片免疫荧光染色行p63和ki67共染。研究结果1.Np中mTOR/p70s6k1信号通路相关分子如p-mTOR、p-p70s6k1及p63表达量较健康对照组表达量明显上调。2.增殖细胞标记物ki67,细胞周期相关因子cyclin E1、CDk2在Np中较健康对照组表达量上调。3.加入IL-13刺激后,鼻黏膜上皮细胞系及人鼻黏膜上皮干/祖细胞中mTOR/p70s6k1信号通路相关分子如p-mTOR、p-p70s6k1及p63、ki67、cyclin E1、CDk2表达量较对照组明显上调,在IL-13+mTOR抑制剂处理组和IL13+p70s6k1抑制剂处理组中,p63、ki67、cyclin E1、CDk2表达量较IL-13刺激组明显下降。3.在人鼻黏膜上皮细胞体外分化模型中加入IL-3刺激后,p-mTOR、p-p70s6k1及p63、ki67、cyclin E1、CDk2表达量较未处理组明显上调,仅增殖期刺激和全程IL-13刺激的差异无统计学意义。结论IL-13可以通过mTOR/p70s6k1信号通路促进鼻黏膜上皮细胞的增殖,导致息肉上皮的增生,从而影响CRswNp发生发展,mTOR/p70s6k1信号通路有望成为CRswNp的潜在生物治疗靶点。第二部分腺样体-鼻咽腔比值对儿童中耳功能异常的诊断预测价值研究研究背景和目的腺样体肥大是儿童常见疾病之一,可压迫咽鼓管咽口,影响中耳引流与气体交换,导致鼓室负压与渗液。可能会继发分泌性中耳炎(OME)。OME是儿童最常见的耳科疾

关键词：慢性鼻窦炎伴鼻息肉增殖 mTOR p70s6k1 IL-13 腺样体肥大分泌性中耳炎腺样体-鼻咽腔比值

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p70s6k1在结直肠癌中的作用及潜在分子机制（英文）

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南京中医药大学学报 2019年第5期35卷 613-622页

作者：魏荣芳郭梦婕钱进军杨烨顾春艳南京中医药大学医学院.整合医学院

目的探讨p70s6k1在结直肠癌(CRC)中的潜在分子机制及其与蟾蜍灵的相互作用。方法运用免疫组织化学染色方法验证p70s6k1在CRC组织中的表达量变化,并探讨其与CRC患者预后的关联性;利用p70s6k1的抑制剂pF-4708671分别通过MTT、β-半乳糖苷... 详细信息

目的探讨p70s6k1在结直肠癌(CRC)中的潜在分子机制及其与蟾蜍灵的相互作用。方法运用免疫组织化学染色方法验证p70s6k1在CRC组织中的表达量变化,并探讨其与CRC患者预后的关联性;利用p70s6k1的抑制剂pF-4708671分别通过MTT、β-半乳糖苷酶染色、细胞周期及划痕实验来检测pF-4708671对细胞生长、细胞衰老、细胞周期和细胞迁移的影响;在CRC细胞中使用蟾蜍灵,观察其对细胞生长及p70s6k1表达水平的影响。结果与正常对照相比,CRC组织中p70s6k1的表达增加,并与患者预后不良相关。p70s6k1特异抑制剂pF-4708671能降低细胞生长速率、诱导细胞衰老、促进细胞周期阻滞和减弱细胞迁移能力。此外,蟾蜍灵可明显抑制CRC细胞生长,下调p70s6k1的表达。结论p70s6k1可能是蟾蜍灵的新靶点,其可作为CRC治疗的潜在靶点。

关键词： p70s6k1 结直肠癌 pF-4708671 蟾蜍灵

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基于p70s6k1靶点研究索拉非尼耐药性肝癌细胞的分子机制

基于P70S6K1靶点研究索拉非尼耐药性肝癌细胞的分子机制

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作者：刘美珍广西医科大学

学位级别：硕士

目的:为了探索p70s6k1是否参与肝细胞癌对索拉菲尼的耐药,以及探讨索拉菲尼诱导耐药后p70s6k1对肝癌细胞的分子作用机制,从而明确p70s6k1作为耐药性肝癌的潜在治疗靶标,丰富肝癌治疗手段。方法:1、收集了肝癌患者手术标本及病例资料92例... 详细信息

目的:为了探索p70s6k1是否参与肝细胞癌对索拉菲尼的耐药,以及探讨索拉菲尼诱导耐药后p70s6k1对肝癌细胞的分子作用机制,从而明确p70s6k1作为耐药性肝癌的潜在治疗靶标,丰富肝癌治疗手段。方法:1、收集了肝癌患者手术标本及病例资料92例,分析其临床生化检验指标以及选取其中20例经10%福尔马林固定、取材、包埋、制片后,经常规HE染色后选取典型蜡块,应用免疫组织化学染色检测耐药性肝细胞内源性p70s6k1,TOpO II,Tp53,ki-67蛋白表达的变化,另外进一步利用RT-pCR检测耐药性肝细胞内源性p70s6k1mRNAs水平在肝癌及癌旁组织种的表达。2、构建索拉菲尼耐药HepG2细胞株,采用荧光定量pCR检测索拉菲尼耐药HepG2细胞内p70s6k1mRNAs水平在肝癌及癌旁组织种的表达。进而进一步运用CCk8细胞增殖法和免疫荧光染色法探讨细胞生长与增殖状况,进而评价耐药性对细胞存活的影响。3、应用shRNA技术构建索拉菲尼耐药HepG2细胞株p70s6k1敲低模型,通过转染后克隆实验进一步验证p70s6k1对耐药性肝癌细胞增殖作用。然后通过免疫荧光检测p70s6k1敲低及对照组中耐药蛋白pGp及靶标蛋白p70s6k1、mTOR、MDM2的表达特性,以此寻找p70s6k1在索拉菲尼耐药肝癌细胞发挥作用所涉及的作用机制。结果:1、与非癌组织样品比较,索拉菲尼耐药性肝癌标本细胞内p70s6k1,特异性耐药蛋白TOpO II和增殖蛋白ki-67蛋白表达明显上调,而Tp53水平减少。其中细胞内p70s6k1定位/定量蛋白表达与定量p70s6k1 mRNA上调结果相一致。2、CCk-8结果和免疫荧光染色显示,pCNA细胞增殖蛋白在耐药性肝癌细胞中表达增加,且呈一定时间依赖关系。此外,与对照比较,索拉菲尼耐药的肝癌细胞内pGp耐药蛋白显著增加,具有时间依赖性;荧光定量pCR结果显示,索拉菲尼耐药的肝癌细胞内有p70s6k1mRNA含量明显上调。3、转染后克隆实验数据发现,shRNA特异性敲低p70s6k1后耐药性肝癌细胞菌群数明显减少及细胞生长受阻;同时,耐药性肝癌细胞敲低p70s6k1后,内源性pCNA蛋白表达明显减少;此外,免疫荧光染色分析显示,敲低p70s6k1后耐药性肝癌细胞内pGp,mTOR,MDM2等蛋白表达显著下调。结论:1、p70s6k1在索拉菲尼耐药肝癌组织及细胞中是高表达的;2、敲低p70s6k1可以增加肝癌细胞对索拉菲尼的敏感性;3、揭示p70s6k1通过激活mTOR/MDM2通路负调控Tp53,进而诱导索拉菲尼耐药的分子机制。

关键词： p70s6k1 索拉菲尼耐药性肝癌 mTOR/MDM2 Tp53

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LncRNA CCAT2/miR-145/p70s6k1分子轴调控口腔鳞癌细胞侵袭转移

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中国现代医生 2020年第30期58卷 53-57,F0003页

作者：陆伟王永武淦岷段青云浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院口腔科浙江杭州310006

目的研究长链非编码RNA CCAT2(CCAT2)、microRNA-145(miR-145)和p70s6k1在口腔鳞细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OsCC)组织中的表达水平,并探讨CCAT2/miR-145/p70s6k1分子轴对OsCC细胞侵袭迁移的影响。方法收集2018年1月~2019年6月在我院进行手术治疗的52对OsCC组织和癌旁正常组织,通过实时荧光定量pCR检测CCAT2、miR-145和p70s6k1的相对表达水平。敲低OsCC细胞中CCAT2和p70s6k1的表达,并通过Transwell实验检测OsCC细胞侵袭迁移的改变。结果CCAT2和p70s6k1在OsCC组织中表达显著高于癌旁正常组织(psCC组织中表达显著低于癌旁正常组织(psCC细胞中CCAT2和p70s6k1的表达。敲低CCAT2抑制OsCC细胞体外迁移和侵袭,抑制miR-145和促进p70s6k1的表达,而miR-145-inhibitor上调敲低CCAT2的OsCC细胞中p70s6k1的表达。此外,敲低p70s6k1抑制OsCC细胞体外迁移和侵袭。结论LncRNA CCAT2/miR-145/p70s6k1可以调控OsCC细胞侵袭迁移,在OsCC体内转移中发挥作用,是治疗OsCC的潜在靶点。

关键词：长链非编码RNA CCAT2 miR-145 p70s6k1 口腔鳞癌

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Akt/mTOR信号通路中p70s6k1、4E-Bps在促进肿瘤发生作用中的研究进展

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现代肿瘤医学 2016年第5期24卷 847-850页

作者：杨柳李昕中国医科大学七年制临床三系辽宁沈阳110013 中国医科大学公共卫生学院辽宁沈阳110013

当受细胞外生长因子等刺激作用后,可激活pI3k/Akt/m TOR信号通路,参与控制细胞的生长、增殖、生存、凋亡。Akt/m TOR信号通路在肿瘤的发生发展过程中起着很重要的促进作用。Akt/m TOR信号通路在肿瘤细胞中能够通过p70s6k1和4E-Bps的作... 详细信息

当受细胞外生长因子等刺激作用后,可激活pI3k/Akt/m TOR信号通路,参与控制细胞的生长、增殖、生存、凋亡。Akt/m TOR信号通路在肿瘤的发生发展过程中起着很重要的促进作用。Akt/m TOR信号通路在肿瘤细胞中能够通过p70s6k1和4E-Bps的作用抑制细胞的凋亡,促进核糖体以及蛋白质的合成、促进肿瘤细胞的侵袭和转移、促进细胞周期进展、促进肿瘤血管的生成,进而促进肿瘤的发生发展。本文就Akt/m TOR信号通路通过p70s6k1和4E-Bps促进肿瘤发生的机制进行综述。

关键词： Akt/m TOR p70s6k1 4E-Bps 蛋白质肿瘤

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phosphorylation of protein kinase Akt by Mtorc2 in peripheral Blood Mononuclear Cells of patients with Cancer and Diabetes

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Journal of Endocrinology Research 2019年第1期1卷 8-12页

作者： Vatseba T.s sokolova L.k pushkarev V.V kovzun O.I pushkarev V.M Guda B.B Tronko M.D sI“V.p.komisarenko Institute of endocrinology and metabolism of NAMs of Ukraine” KyivVyshgorodska st6904114Ukraine

Akt/mTOR/p70s6k1 signaling pathway plays an important role in the pathogenesis of cancer and diabetes.Macrophages and lymphocytes are involved in the pathogenesis of diabetes,diabetic atherosclerosis,formation of insulin resistance as well as immune response to cancer and tumor maintenance.The aim of the study was to determine the Akt activation by mTORC2 in peripheral blood mononuclear cell(pBMC)of patients with type 2 diabetes and cancer.The following groups were studied:control group,patients with type 2 diabetes,cancer patients and patients with both cancer and diabetes.The amounts of phospho-Akt(р-s473)and phospho-p70s6k1(p-T389)were determined using ELIsA kits.The amount of phosphorylated Akt significantly increases in pBMC of patients with cancer.There was no effect in pBMC from patients with type 2 diabetes and significant decrease in the amount of phospho-Akt in pBMC of the patients group both with cancer and diabetes.p70s6k1 activation was observed in pBMC of the groups 2 and 3 patients.Thus,chronic diseases such as type 2 diabetes and cancer can affect the signaling mechanisms in blood cells.The state of Akt phosphorylation in leukocytes can indicate the activity of mTORC1 and its substrates,which may be important for the evaluation of the pathological process and the efficacy of the drugs.

关键词： Akt,mTORC2 p70s6k1 peripheral blood mononuclear cell Cancer Diabetes

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前列腺癌新生血管生成与ROs和pI3k/AkT信号通路相关蛋白的关系

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临床与实验病理学杂志 2015年第5期31卷 552-555页

作者：郭忠英傅广波刘海燕孙苏安南京医科大学附属淮安第一医院病理科淮安223300 南京医科大学附属淮安第一医院泌尿外科淮安223300

目的检测前列腺癌(prostatic cancer,pCa)和癌旁组织中活性氧(reactive oxygen species,ROs)的表达、pI3k/AkT信号通路中相关基因蛋白p70s6k1、VEGF的表达及微血管密度(micro-vascular density,MVD)值,分析ROs与p70s6k1、VEGF蛋白之间的相关性,以及ROs、p70s6k1、VEGF蛋白表达与pCa血管生成的关系。方法采用免疫荧光法检测pCa和癌旁组织内的ROs水平;免疫组化sp法检测pI3k/AkT通路相关基因蛋白p70s6k1、VEGF表达及MVD计数情况。结果 pCa组织中ROs的表达水平明显高于癌旁组织,差异有统计学意义(ppCa组织中p70s6k1、VEGF蛋白表达及MVD值高于癌旁组织,差异有统计学意义(ppCa组织中ROs、p70s6k1、VEGF三者表达间均呈正相关,且ROs、p70s6k1及VEGF表达均与MVD值呈正相关。结论 (1)pCa组织中ROs表达水平明显高于癌旁组织。(2)pCa组织中pI3k/AkT通路相关基因蛋白p70s6k1、VEGF蛋白表达高于癌旁组织,pCa中MVD值高于癌旁组织,提示pI3k/AkT信号通路在肿瘤血管生成中起一定作用。(3)pCa组织中ROs表达水平和pI3k/AkT通路相关基因蛋白p70s6k1、VEGF表达及MVD值均呈正相关,提示ROs可能通过pI3k/AkT信号通路,对pCa发生、发展起正调控作用。

关键词：前列腺肿瘤活性氧 p70s6k1 肿瘤新生血管生成

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MiR-128对胶质瘤生长的影响及其分子机制

MiR-128对胶质瘤生长的影响及其分子机制

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作者：王静南京医科大学

学位级别：硕士

胶质瘤是人类最常见的、最具侵袭性的原发性脑肿瘤，约占中枢神经系统肿瘤的40%，可发生于中枢神经系统的任何部位和任何年龄阶段。目前临床上最主要的治疗手段是手术切除。尽管近年来外科的诊断、手术方法和术后辅助性治疗方法发展迅... 详细信息

胶质瘤是人类最常见的、最具侵袭性的原发性脑肿瘤，约占中枢神经系统肿瘤的40%，可发生于中枢神经系统的任何部位和任何年龄阶段。目前临床上最主要的治疗手段是手术切除。尽管近年来外科的诊断、手术方法和术后辅助性治疗方法发展迅速，但是由于胶质瘤呈浸润性生长，具有高度侵袭性和富血管性，手术难以彻底切除，术后复发率较高，五年生存率依旧不理想。进一步研究胶质瘤的发病机制，寻找新的诊断和治疗胶质瘤的方法具有重要的意义。微小RNA（microRNA，miRNA）是近年来发现的一类内源性的、保守的、短序列、非编码的RNA，可在转录后水平调控基因的表达，调节细胞的生长、周期、凋亡等生理病理过程。在不同肿瘤中，多种miRNA的表达水平会发生改变，这些miRNA可能具有癌基因或抑癌基因的功能，并与肿瘤的生长密切相关。们收集了8例正常脑组织和2/3/4级胶质瘤组织各13例，检测发现胶质瘤组织中miR-128的表达低于正常脑组织，与其他报道结果一致，提示miR-128在胶质瘤发生发展中起着重要作用。通过生物信息学软件预测和报告基因检测发现miR-128可直接靶向p70s6k1。p70s6k1是mTOR的一个重要的下游蛋白，在细胞生长、增殖、周期和凋亡过程中发挥极其重要的作用。p70s6k1的激活可影响下游HIF-1α、VEGF的表达水平，而HIF-1α、VEGF的表达则是调控肿瘤新的血管生成的重要因素。我们构建了过表达miR-128的胶质瘤稳定细胞株，分别在分子水平和动物水平上研究miR-128对胶质瘤的影响，发现过表达miR-128可以抑制胶质瘤细胞在体内外的增殖。通过Western-blot、RT-pCR以及免疫组织化学方法的检测，我们发现miR-128能够降低p70s6k1的蛋白水平和磷酸化水平，并下调HIF-1α和VEGF的表达。同时，我们利用裸鼠的肿瘤新的血管生成模型研究miR-128对新的血管生成的影响，并检测了其中血红蛋白水平，发现过表达miR-128明显抑制脑胶质瘤的新的血管生成。总之，miR-128可通过直接靶向调节p70s6k1，影响其下游信号的表达，从而抑制胶质瘤的生长和新的血管生成。本研究发现了miR-128的一个新的作用靶点，并阐明了miR-128通过该靶点抑制胶质瘤生长的作用及分子机制，为胶质瘤的诊断、治疗和预后的miRNA应用提供了理论依据。

关键词：胶质瘤肿瘤生长新的血管生成 miR-128 p70s6k1

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中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）TOR基因的分子克隆及相关信号通路的初步研究

中国明对虾（Fenneropenaeus chinensis）TOR基因的分子克隆及相...

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作者：孙姝娟中国科学院研究生院（海洋研究所）

学位级别：硕士

本文以我国重要养殖经济动物中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为研究对象,对其细胞生长和营养调控相关的TOR(Target of Rapamycin)信号转导通路进行了初步的研究。利用同源克隆和RACE技术首次从中国明对虾中克隆得到完整的TOR基因,... 详细信息

本文以我国重要养殖经济动物中国明对虾(Fenneropenaeus chinensis)为研究对象,对其细胞生长和营养调控相关的TOR(Target of Rapamycin)信号转导通路进行了初步的研究。利用同源克隆和RACE技术首次从中国明对虾中克隆得到完整的TOR基因,cDNA全长7638bp,开放阅读框7389bp,编码2462个氨基酸。氨基酸序列比对和结构域分析均证实其为目前已知的TOR激酶的同源蛋白。应用real-time pCR分析TOR在中国明对虾中的组织分布特异性,结果显示TOR在肌肉组织中表达量最高,在血细胞中表达量最低。通过分析注射亮氨酸、精氨酸和TOR特异性抑制剂雷帕霉素后TOR基因表达水平的变化和TOR信号通路中蛋白因子磷酸化水平的变化,研究了TOR信号通路的生长调控功能。利用Real-time pCR分析注射亮氨酸和精氨酸后肌肉组织TOR mRNA含量的变化,结果显示TOR基因的表达在注射亮氨酸和精氨酸后24h内出现显著升高。利用Western blot检测肌肉组织TOR信号通路相关蛋白质磷酸化水平的变化,结果显示注射亮氨酸和精氨酸后30min,TOR和p70s6k1蛋白磷酸化水平会明显增高,1h后逐渐恢复正常水平。这些结果表明亮氨酸和精氨酸能够上调TOR基因的表达并激活TOR信号转导通路,并且TOR基因转录的变化滞后于蛋白磷酸化水平的变化。Western blot的结果还显示,注射雷帕霉素后,TOR和p70s6k1蛋白的磷酸化水平在30min后明显降低,2h后可以恢复到正常水平,表明雷帕霉素能够抑制中国明对虾TOR激酶的活性,阻断依赖TOR信号通路的磷酸化反应的发生。

关键词：中国明对虾 TOR p70s6k1 基因克隆表达分析

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MiR-137在铬诱导肿瘤形成和新的血管生成中的作用机制研究

MiR-137在铬诱导肿瘤形成和新的血管生成中的作用机制研究

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作者：刘雪南京医科大学

学位级别：硕士

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,也是当今世界范围内肿瘤致死的第一病因。随着人类生存环境污染的加剧,人口结构老年化趋势,肺癌的发病率也逐年呈上升的趋势。铬是被广泛确认的环境污染物和职业性呼吸道肿瘤致癌物。职业性暴露是人类接触... 详细信息

肺癌是最常见的恶性肿瘤之一,也是当今世界范围内肿瘤致死的第一病因。随着人类生存环境污染的加剧,人口结构老年化趋势,肺癌的发病率也逐年呈上升的趋势。铬是被广泛确认的环境污染物和职业性呼吸道肿瘤致癌物。职业性暴露是人类接触铬的主要方式。六价铬是铬的主要毒性形式。人体摄入六价铬主要经呼吸道和口腔黏膜,少量六价铬也可经皮肤吸收。由于经呼吸道吸入铬烟、铬尘是职业作业场所的主要接触途径,因此铬引发的肺癌最为常见。国际癌症研究署早于1990年确定铬为“人类致癌物”。微小RNA(microRNAs,miRNAs)是近年来发现的一类长度约18-22个核苷酸分子的小片段非编码RNAs,通过与靶基因mRNA 3’-UTR区域配对,在转录水平调控基因的表达,发挥癌基因或抑癌基因的作用。MiRNA的异常表达与肿瘤的发生发展和转移息息相关。MiR-137在多种肿瘤中呈低表达,在肿瘤中扮演着抑癌基因的角色。MiR-137在肺癌中的表达及其功能已有一些报道,但是它在肺癌肿瘤生长和新的血管形成中的作用还有待深入阐明。我们与常州市疾控中心合作,收集了职业铬暴露人群的血样,基因芯片结果显示多种miRNA在职业铬暴露人群血样中呈现异常表达,而我们发现miR-137在职业铬暴露人群的的血浆中是显著低表达的。因此,我们又通过qRT-pCR的方法对19例铬暴露人群和10例正常人的血液样本进行了进一步的检测,证实了miR-137在铬暴露人群血液中的含量显著低于正常人。MiRNAs实现其发挥功能的主要方式是通过抑制靶基因的表达,从而调控靶基因参与的生物学功能。MiRNAs的靶基因众多,寻找到发挥作用的靶基因对于研究其在肿瘤中的作用至关重要。我们通过生物信息学软件预测发现p70s6k1可能是miR-137的靶基因。p70s6k1在肺癌中过度表达,进而影响下游信号通路HIF-1α和VEGF的表达。我们通过荧光素酶报告基因分析和Western blotting证实了p70s6k1是miR-137直接作用的靶基因,并且它们在血浆中的表达水平与miR-137的水平呈负相关,进一步证实了miR-137及其靶基因p70s6k1在铬诱导的肺癌发生过程中可能发挥的重要作用。为了研究铬诱导肿瘤形成的作用及其机制。我们建立了铬体外转化细胞模型,给予永生化的支气管上皮细胞(BEAs-2B,B2B)低剂量1μM的铬(NaCrO)六个月,将该细胞命名为铬转化肺上皮细胞(CrT),同期培养的代数相同的B2B细胞作为对照细胞。通过细胞增殖实验,细胞迁移实验,微管形成实验以及裸鼠体内血管生成实验,我们发现铬转化细胞CrT的增殖、迁移和血管生成能力显著升高。通过qRT-pCR分析发现CrT细胞中miR-137的表达水平显著低于B2B细胞,提示CrT细胞是具有肿瘤特性的细胞,miR-137在铬诱导的肿瘤发生发展中扮演着重要的角色。为了进一步研究miR-137在铬诱导肿瘤形成中的生物学功能,我们构建了稳定表达miR-137的CrT细胞株,逆转了细胞株中原本低表达的miR-137水平,在体外和体内水平研究miR-137对肿瘤形成和新的血管生成的影响。过表达miR-137后,CrT细胞的生长速度减慢,迁移能力减弱,而且miR-137靶基因p70s6k1的表达水平显著下调,并且其下游HIF-1α和VEGF的表达也明显受到抑制。另外,血管生成实验表明过表达miR-137显著抑制了CrT细胞新的血管生成能力。在这些研究的基础上,我们更深入地探索了miR-137对CrT细胞的抑制作用是否通过它的靶基因发挥作用的。我们在过表达miR-137的细胞中转入无3’UTR的p70s6k1 cDNA过表达质粒后,恢复了被miR-137抑制的p70s6k1水平,结果表明,恢复p70s6k1的表达水平后,HIF-1?和VEGF的表达水平增高,细胞的微管和动物体内血管形成能力也加快,接近对照组肿瘤的生长和新的血管形成能力。综上所述,我们认为miR-137参与了铬诱导的支气管上皮细胞癌变过程,同时miR-137通过靶向调节p70s6k1基因及其下游HIF-1α和VEGF信号通路,促进肿瘤新的血管生成进而促进肿瘤形成。这些结果为我们更好地揭示了miR-137在铬诱导的肺癌发生中的作用机制,为铬诱导的肺癌的诊断和治疗提供了一定的理论依据。

关键词：肺癌铬 miR-137 p70s6k1 新的血管生成

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