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5-Aza-CdR干扰人子宫内膜样癌JEC细胞后ER拮抗剂对细胞增殖、形态及p57^(kip2)蛋白表达的影响

遵义医科大学学报 2021年第1期44卷 1-8页

作者：钟栎周俊张春英周正平遵义医科大学附属医院病理科贵州遵义563099 遵义医科大学电镜室贵州遵义563099 遵义医科大学病理学教研室贵州遵义563099

目的探讨5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)预处理人子宫内膜样癌(Endometrioid carcinoma,EC)JEC细胞后,雌激素受体(Estrogen receptor,ER)拮抗剂他莫昔芬(Tamoxifen,TAM)、氟维司群(ICI-182780,ICI)对JEC细胞生长、形态改变及p57^(kip2)蛋白表达的影响。方法将JEC细胞用5-Aza-CdR处理后,用亚硫酸氢盐测序(Bisulfite sequencing pCR,BSp)法检测细胞中p57^(kip2)启动子区的甲基化率。将JEC细胞分为6组:对照组、雌二醇(β-estradiol,E_(2))组、TAM组、ICI组、E_(2)+TAM组、E_(2)+ICI组,待5-Aza-CdR处理后,用甲基偶氮唑盐比色(MTT)法检测各组细胞培养24、48、72 h的增殖活性;用光镜和电镜观察培养72 h时细胞的形态改变,用蛋白印迹(Western blot)法检测培养72 h时细胞中p57^(kip2)蛋白的表达情况。结果用5-Aza-CdR处理后,JEC细胞中p57^(kip2)启动子区甲基化率从81.1%降为76.2%。与对照组比较,细胞增殖活性在E_(2)组均升高,在ICI组、E_(2)+TAM组、E_(2)+ICI组则均降低,且均在24 h改变最明显(pp57^(kip2)蛋白表达减少(pp57^(kip2)蛋白表达均增高(pp57^(kip2)基因启动子区的高甲基化水平,从而恢复抑癌因子p57^(kip2)的生物活性,逆转TAM对JEC细胞的弱雌激素样作用,增强ICI对JEC细胞增殖的抑制作用;还可能协同TAM、ICI上调p57^(kip2)蛋白的表达水平,拮抗E_(2)对p57^(kip2)蛋白水平的下调作用,达到削弱CDK的激酶活性,从而发挥负向调控细胞周期、抑制JEC细胞进一步生长的作用。

关键词：子宫内膜癌雌激素受体拮抗剂 5-氮杂-2′-脱氧胞苷 p57 kip2

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5-氮杂-2'-脱氧胞苷对人子宫内膜样癌JEC细胞中p57 kip2蛋白表达及细胞形态影响的研究

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遵义医科大学学报 2020年第5期43卷 557-564页

作者：周俊王凤月李三华钟栎赵朔刘俊江张春英周正平遵义医科大学病理学教研室贵州遵义563099 遵义医科大学电镜室贵州遵义563099 遵义医科大学医学与生物学研究中心贵州遵义563099

目的通过5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干扰人子宫内膜样癌(Endometrial carcinoma,EC)JEC细胞(中分化)前后,检测p57 kip2基因启动子区甲基化状态及其蛋白表达情况、细胞生长和形态改变,探讨p57 kip2对子宫内... 详细信息

目的通过5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)干扰人子宫内膜样癌(Endometrial carcinoma,EC)JEC细胞(中分化)前后,检测p57 kip2基因启动子区甲基化状态及其蛋白表达情况、细胞生长和形态改变,探讨p57 kip2对子宫内膜癌增殖、分化的影响。方法Ⅰ.Sanger测序方法检测JEC细胞中p57 kip2基因变异情况。Ⅱ.含不同浓度5-Aza-CdR(对照组、5、7.5、10、12.5、15μmol/L)的培养基干扰JEC细胞24 h,亚硫酸氢盐测序(Bisulfite sequencing pCR,BSp)法检测各组p57 kip2基因启动子区甲基化率分别为88.8%、88.1%、83.8%、85.8%、76.2%、83.1%,选择甲基化率下降明显的12.5μmol/L和15μmol/L两个浓度体外培养JEC细胞作为实验组。(1)培养24、48、72 h,四甲基亚唑蓝(MTT)法检测细胞生长情况;(2)培养24、72 h,Western blot法检测p57 kip2蛋白表达情况;(3)培养72 h,光镜、电镜观察细胞形态结构变化。结果Ⅰ.Sanger测序结果:JEC细胞中未检测出p57 kip2基因外显子突变。Ⅱ.p57 kip2基因启动子区甲基化水平:JEC细胞中p57 kip2基因启动子区呈高甲基化状态,经5-Aza-CdR干扰24 h后,12.5μmol/L组(76.2%)、15μmol/L组(83.1%)的总体甲基化率较对照组(88.8%)下降明显。(1)MTT结果:和对照组比较,12.5μmol/L组在24、48 h细胞生长被明显抑制(pp2.5μmol/L组在24、48 h细胞生长均明显低于15μmol/L组(p2 h变化明显(p2)Western blot结果:和对照组比较,12.5μmol/L组中p57 kip2蛋白的表达在各时间段均上调,以24 h上调明显(pp>0.05);随着作用时间的延长,p57 kip2蛋白在两实验组中表达的上调趋势被削弱,以12.5μmol/L组更明显(pp57 kip2基因外显子无突变,5-Aza-CdR能下调p57 kip2基因启动子区的总体甲基化率,从而上调p57 kip2蛋白表达,使细胞生长受抑制,其中12.5μmol/L组的生长抑制作用比15μmol/L组更明显,可能还促进JEC细胞往更好的分化方向转变;随着时间的延长,没有持续追加5-Aza-CdR,p57 kip2启动子区逐渐恢复甲基化,导致p57 kip2蛋白表达上调的趋势再次被减弱。

关键词：子宫内膜样癌 5-氮杂-2'-脱氧胞苷 JEC细胞甲基化 p57 kip2

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雌激素对人子宫内膜样癌细胞中p57kip2表达及形态变化影响的研究

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遵义医科大学学报 2020年第2期43卷 188-194页

作者：周俊袁丹刘蒙蒙钟栎刘俊江孙小杰周正平遵义医科大学病理学教研室贵州遵义563099 遵义医科大学电镜室贵州遵义563099

目的研究雌激素(Estrogen,E)对人子宫内膜样癌(Endometrioid carcinoma,EC)Ishikawa细胞(高分化)和JEC细胞(中分化)中p57kip2蛋白表达及细胞形态变化的影响。方法用等量含低、中、高浓度雌二醇(β-Estradiol,E2)(10-6、10-8、10-10mol/L)的培养基干预Ishikawa和JEC细胞作为实验组,等量不含E2的完全培养基培养作为对照组。细胞培养24、48、72 h后,MTT法检测细胞增殖情况;培养24、72 h后,Western blot法检测p57kip2蛋白表达情况,光镜、电镜观察细胞形态变化。结果①MTT结果:与对照组比较,在Ishikawa细胞中,E2低、中浓度组增殖明显(p2组细胞增殖不明显(p>0.05);在JEC细胞中,E2各浓度组均随药物浓度增高,促细胞生长的作用更明显(p2作用时间延长、作用浓度增加,p57kip2蛋白在Ishikawa细胞中表达逐渐增加,在JEC细胞中表达逐渐降低(pp57kip2蛋白在Ishikawa细胞中表达呈递增趋势,发挥其抑制细胞生长的作用;p57kip2蛋白在JEC细胞中表达呈递减趋势,使其负向调控细胞周期的能力减弱,致细胞增殖明显;较高浓度则使EC细胞水肿明显、结构破坏,甚至造成不可逆性损伤,还可能诱导EC细胞往分化更差的方向发展。

关键词：子宫内膜癌 Ishikawa细胞 JEC细胞雌激素 p57 kip2

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