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暨南大学学报（自然科学与医学版） 2010年第2期31卷 136-139页

作者：王笑迎查庆兵何贤辉欧阳东云徐丽慧郭贺高琦暨南大学生命科学技术学院组织移植与免疫实验中心广东广州510632 暨南大学附属第一医院产前诊断中心广东广州510632 暨南大学生命科学技术学院生物工程研究所广东广州510632

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSpALNKMF,TYS)的可溶性单体,... 详细信息

目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSpALNKMF,TYS)的可溶性单体,经生物素酰化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成HLA-A*2402/TYS四聚体,以流式细胞仪检测特异性CTL的频率。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌患者外周血中可检测减低频率的p53125-134TYS抗原肽特异性CTL。结论:成功制备HLA-A*2402/TYS四聚体。

关键词： HLA-A*2402 四聚体 p53抗原细胞毒T淋巴细胞

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旋毛虫p53抗原基因的克隆、表达及鉴定

旋毛虫p53抗原基因的克隆、表达及鉴定

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作者：王鸿盛甘肃农业大学

学位级别：硕士

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种呈全球性分布的人兽共患寄生虫病,严重危害人类健康和畜牧业发展。旋毛虫病早期免疫诊断主要用肌幼虫ES抗原,其具有较好的敏感性和特异性,但ES抗原大量生产困难而且难以标准化。因此,应用基因工程技术获得T... 详细信息

旋毛虫病是由旋毛虫引起的一种呈全球性分布的人兽共患寄生虫病,严重危害人类健康和畜牧业发展。旋毛虫病早期免疫诊断主要用肌幼虫ES抗原,其具有较好的敏感性和特异性,但ES抗原大量生产困难而且难以标准化。因此,应用基因工程技术获得Tsp53重组蛋白作为抗原有望解决此难题。旋毛虫p53基因编码的分泌性糖蛋白Tsp53是肌幼虫ES抗原的主要成分之一,并具有良好的抗原性。本研究根据GenBank数据库中的旋毛虫p53基因序列设计引物,应用RT-pCR方法从肌幼虫总RNA中获得p53基因片段,限制性酶切后连接到表达质粒pET30a中,转化大肠杆菌DH5α。筛选阳性克隆,经限制性酶切、pCR及测序鉴定后,将重组表达质粒pET30a-Tsp53转化大肠杆菌BL21（DE3）。以IpTG诱导表达, SDS-pAGE分析表达产物,纯化表达产物,通过间接ELISA鉴定重组蛋白的反应原性。将纯化的Tsp53重组蛋白以20μg/只的剂量分3次免疫小鼠后,攻击感染旋毛虫肌幼虫200条/只,检查旋毛虫7日龄成虫数、雌虫体外产生新生幼虫数和感染35d后的肌幼虫数并计算减虫率,同时用ELISA检测血清中抗Tsp53抗原的抗体IgG滴度。成功构建了重组表达质粒pET30a-Tsp53,测序结果表明插入片段为1 176 bp,编码391个氨基酸残基,与旋毛虫p53抗原基因序列（U25127）有99%的同源性,开放阅读框正确。含有pET30a-Tsp53重组表达质粒的大肠杆菌BL21（DE3）诱导后得到了高效表达,SDS-pAGE显示表达产物分子量约为50 ku,主要以包涵体形式存在。间接ELISA结果表明,重组抗原可以被旋毛虫感染不同时期的猪血清特异性识别,表达产物具有良好的反应原性。Tsp53重组蛋白免疫小鼠旋毛虫7日龄成虫、雌虫产新生幼虫的减虫率分别为14.34%和16.93%,均与感染对照组和佐剂对照组差异不显著（ p ＞ 0. 05）;肌幼虫的减虫率为38.68 %,与感染对照组和佐剂对照组差异显著（ p ＜ 0. 05）;Tsp53重组蛋白免疫组小鼠在第3次免疫后1周可检测到高滴度的抗Tsp53重组蛋白的抗体IgG,在攻击感染旋毛虫后仍维持在较高水平,Tsp53重组蛋白可诱导小鼠产生一定的抗旋毛虫保护性免疫。本研究为进一步研究旋毛虫病的免疫诊断和疫苗研制等奠定了基础。

关键词：旋毛虫 p53抗原原核表达反应原性免疫保护性

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靶向p53抗原的疫苗可延长结肠癌存活

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生物制品快讯 2001年第12期 18-18页

作者：陈锦荣

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p53bcl-2在泪腺上皮性肿瘤中表达及意义

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中国实用眼科杂志 2011年第4期29卷 407-411页

作者：王磊峰肖利华黑砚王毅杨新吉鲁小中武警北京总队第二医院眼科北京100037 武警总医院眼眶病研究所

目的通过观察p53、bcl-2在泪腺良、恶性肿瘤中表达情况,分析其与泪腺良、恶性肿瘤的临床和组织病理的关系.目的在于进一步探明它们在泪腺良、恶性肿瘤发生、发展中的作用,为泪腺良、恶性肿瘤的鉴别诊断、治疗以及预后判断提供依据.方法... 详细信息

目的通过观察p53、bcl-2在泪腺良、恶性肿瘤中表达情况,分析其与泪腺良、恶性肿瘤的临床和组织病理的关系.目的在于进一步探明它们在泪腺良、恶性肿瘤发生、发展中的作用,为泪腺良、恶性肿瘤的鉴别诊断、治疗以及预后判断提供依据.方法收集手术切除35例泪腺多形性腺瘤,28例泪腺腺样囊性癌,并取手术中切除的正常泪腺组织9例作为正常对照.应用免疫组化检测p53和bcl-2的表达,检验其在上述组织中表达的差异.结果 p53抗原、bcl-2抗原在正常泪腺及泪腺良、恶性肿瘤中的表达指数依次增高.p53、bcl-2在复发组中的表达高于初发组.72例标本中,p53和bcl-2两项均为阳性者为26例,均为阴性者22例,与单项阳性者相比具有显著性差异.结论 p53、bcl-2可以作为预测泪腺多形性腺瘤术后复发的有效检测指标.p53、bcl-2可能参与了泪腺肿瘤的发生、发展,将可能作为一种鉴别正常泪腺组织、泪腺良性肿瘤组及恶性肿瘤的有效的生物学指标.p53和bcl-2之间的相关性提示泪腺肿瘤的发生是一个多阶段、多因素、长期的过程.

关键词：泪腺上皮性肿瘤 p53抗原 bcl-2抗原免疫组织化学

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Ki-67蛋白和p53蛋白在肝胆管上皮内瘤变及癌变诊断中的意义

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中国普通外科杂志 2010年第7期19卷 823-825页

作者：李艳春雷亚丽易红梅李灼日湖南省人民医院病理科湖南长沙410002 湖南省人民医院肝胆医院湖南长沙410002

目的研究增殖指标Ki-67蛋白和p53蛋白在人肝胆管上皮内瘤变及癌变中的表达及其诊断意义。方法运用免疫组织化学S-p方法检测70例肝胆管上皮内瘤变及癌变(低级别肝胆管上皮内瘤变42例,高级别上皮内瘤变28例,高级别中癌变16例)组织中Ki-67... 详细信息

目的研究增殖指标Ki-67蛋白和p53蛋白在人肝胆管上皮内瘤变及癌变中的表达及其诊断意义。方法运用免疫组织化学S-p方法检测70例肝胆管上皮内瘤变及癌变(低级别肝胆管上皮内瘤变42例,高级别上皮内瘤变28例,高级别中癌变16例)组织中Ki-67蛋白和p53蛋白的表达情况。结果 (1)肝胆管上皮癌变组织中Ki-67的增殖指数为20.65±7.62,明显高于肝胆管上皮内瘤变(pp53蛋白的增值指数为14.73±5.57,明显高于胆管上皮内瘤变组织的蛋白表达(pp53蛋白增值指数随着细胞增生程度而增高,为临床判断病变程度提供了较具体可靠的参考依据。

关键词：胆管肿瘤/病理学 Ki-67抗原 p53抗原免疫组织化学

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