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辛伐他汀经ERK1/2、p38mapk信号通路影响MC3T3-E1细胞增殖的研究

辛伐他汀经ERK1/2、p38MAPK信号通路影响MC3T3-E1细胞增殖的研究

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作者：韩晓梅甘肃农业大学

学位级别：硕士

骨质疏松症是以骨骼密度发生改变、骨量流失加快及骨小梁数量变少且变狭窄为特性的全身性骨骼疾病。辛伐他汀是一种除了具有降脂作用外,还可显著增强骨形成作用的天然药物,其副作用较其他治疗药物低。为了探究辛伐他汀对MC3T3-E1细胞增... 详细信息

骨质疏松症是以骨骼密度发生改变、骨量流失加快及骨小梁数量变少且变狭窄为特性的全身性骨骼疾病。辛伐他汀是一种除了具有降脂作用外,还可显著增强骨形成作用的天然药物,其副作用较其他治疗药物低。为了探究辛伐他汀对MC3T3-E1细胞增殖的影响,并了解其与辛伐他汀浓度与作用时间的关系;通过抑制mapk的信号通路中ERK1/2和p38的活性,探究辛伐他汀是否经过ERK1/2、p38mapk信号通路对MC3T3-E1细胞增殖的标志物及蛋白的表达产生影响。通过将浓度为0mol/、10mol/L、10mol/L、10mol/L、10mol/L、10mol/L的辛伐他汀加入96孔细胞培养板中,培养24h后,运用CCK-8、p Npp试剂盒检测MC3T3-E1细胞的增殖活力及碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALp)的活性,挑选出辛伐他汀的最适作用浓度;在铺满MC3T3-E1细胞的96孔板中加入最适浓度的辛伐他汀的,设置四个药物作用时间(24h、36h、48h和60h),在不同时间段,选用CCK-8试剂盒测定MC3T3-E1细胞增殖的活力,挑选出辛伐他汀的最适作用时间;结果显示,浓度为10mol/L的辛伐他汀增强MC3T3-E1细胞增殖与ALp活性的作用较为显著;辛伐他汀的作用时间为36h时,MC3T3-E1细胞增殖作用较为显著。将实验分为4个实验组,选择浓度为10mol/L的辛伐他汀,作用时间为36h,采用CCK8法、p Npp法、酶联免疫吸附技术(ELISA)、Western blotting(蛋白质免疫印迹)法检测各组细胞增殖的能力、ALp活性、分泌I型胶原(COL-I)的能力以及p-ERK1/2、p-p38的表达水平。结果显示,空白组与辛伐他汀组相比,辛伐他汀组细胞增殖作用、ALp的活性及p-ERK1/2、p-p38蛋白表达水平明显增高,COL-I分泌增多,即辛伐他汀组可提高MC3T3-E1细胞增殖作用、ALp的活性、COL-I分泌作用及p-ERK1/2、p-p38蛋白表达水平;辛伐他汀+p38抑制剂组(SIM+SB203580)和辛伐他汀+ERK1/2抑制剂组(SIM+SCH772984)与辛伐他汀组相比,ERK1/2、p38mapk信号通路的抑制剂作用于MC3T3-E1细胞后,该细胞增殖作用明显减弱、ALp的活性和COL-I分泌作用以及p-ERK1/2、p-p38蛋白表达能力明显降低。以上结果表明,10-10mol/L的辛伐他汀均有促进MC3T3-E1细胞增殖的作用,促进MC3T3-E1细胞增殖的最适辛伐他汀浓度为10mol/L,最佳作用时间为36h;辛伐他汀可经过ERK1/2、p38mapk信号转导途径增强MC3T3-E1细胞增殖作用、提高ALp活性及I型胶原分泌的能力,从而在MC3T3-E1细胞增殖过程中起正向调节作用。为临床中骨质疏松症治疗药物的研究提供可靠的理论依据。

关键词：辛伐他汀骨质疏松 p38mapk信号转导途径 ERK1/2mapk信号转导途径

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