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抗p21ras蛋白抗体研发及在肿瘤病理和肿瘤治疗中的研究进展

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临床与实验病理学杂志 2022年第6期38卷 713-715页

作者：石英贤潘鑫艳冯强郑慧元杨举伦昆明理工大学医学院昆明650000 联勤保障部队第九二〇医院病理科昆明650032

ras基因突变或过表达可导致多种肿瘤的发生,约30%的肿瘤中存在ras基因突变。p21ras蛋白是ras基因表达的产物。抗p21ras蛋白抗体的研发,为ras驱动肿瘤的病理诊断和治疗提供了新的研究方向。该文对抗p21ras蛋白单克隆抗体、单链抗体、细... 详细信息

ras基因突变或过表达可导致多种肿瘤的发生,约30%的肿瘤中存在ras基因突变。p21ras蛋白是ras基因表达的产物。抗p21ras蛋白抗体的研发,为ras驱动肿瘤的病理诊断和治疗提供了新的研究方向。该文对抗p21ras蛋白单克隆抗体、单链抗体、细胞内抗体、重组抗体的研发和应用情况进行简要综述。

关键词：基因治疗肿瘤病理诊断 p21ras蛋白单克隆抗体单链抗体

重组p21ras蛋白的表达、鉴定与纯化及其多克隆抗体的制备

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重组p21ras蛋白的表达、鉴定与纯化及其多克隆抗体的制备

作者：周云刚昆明医学院

学位级别：硕士

ras基因是一种重要的癌基因,其命名来自大鼠肉瘤的英文ratsarcoma。ras基因家族包括三个成员,即K-ras、H-ras和N-ras,分别定位于第12、11和1号染色体,编码由188-189个氨基酸组成的分子量约为21KD的蛋白质,即p21ras蛋白,三种p21ras蛋白... 详细信息

ras基因是一种重要的癌基因,其命名来自大鼠肉瘤的英文ratsarcoma。ras基因家族包括三个成员,即K-ras、H-ras和N-ras,分别定位于第12、11和1号染色体,编码由188-189个氨基酸组成的分子量约为21KD的蛋白质,即p21ras蛋白,三种p21ras蛋白的氨基酸序列约有85%的同源性。p21ras蛋白作为信号传递蛋白,调节细胞的分化增殖,在正常情况下只有短暂的信号传递作用,但是当ras基因发生突变或过度表达时,细胞增殖不受控制,导致细胞恶性转化。人们在多种肿瘤中检测到p21ras蛋白的高表达,提示p21ras蛋白的高表达确与肿瘤的形成以及发生和发展存在密切关系,因此,我们提出了假设,利用细胞内抗体技术研制细胞内抗体,通过抗原抗体的结合,使p21ras蛋白失去与GTp结合的能力,从而达到治疗肿瘤的目的。本研究通过p21ras原核表达质粒的构建和蛋白诱导表达,为细胞内抗体的制备提供抗原,并通过多克隆抗体的制备证实其免疫活性。本研究通过逆转录的方法和全基因合成技术获得K-ras、H-ras和N-ras基因,并在其两端设计限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ的酶切位点,双酶切ras基因和pET-28a(+)空质粒,利用T4连接酶连接后,克隆到表达质粒pET-28a(+)中,经酶切和测序表明构建的重组质粒与理论设计一致。将三个重组质粒转化到细菌BL21后,卡那霉素筛选,IpTG诱导,分泌表达p21ras蛋白,SDS-pAGE检测结果表明,三个p21ras蛋白在BL21中均获得了高效表达,表观分子量为23KD,Westernblot分析表明表达产物能够与抗p21ras蛋白抗体特异结合。蛋白以包涵体形式存在,包涵体经镍离子亲和纯化柱纯化得到纯度95%以上的p21ras蛋白。将纯化的p21ras蛋白免疫新西兰大白兔,每个p21ras蛋白各免疫2只,免疫前采取2ml空白血清作为阴性对照,0、2、4、6周各免疫一次,第一次免疫后每隔两周,耳缘静脉采血收集血清,Western blot分析证实免疫血清中p21ras多克隆抗体抗体的产生和p21ras蛋白的免疫活性,ELISA检测抗体水平。结果发现,第一次免疫后2周出现抗p21ras蛋白抗体,6周时抗体水平达到最高。本实验成功完成了K-ras、H-ras和N-ras三个基因的原核表达质粒的构建、表达和纯化以及其免疫原性,并通过免疫兔制备出p21ras蛋白的多克隆抗体,为研究p21ras蛋白的性质和功能以及下一阶段的实验研究提供了科学基础。

关键词： p21ras蛋白表达质粒表达纯化多克隆抗体

氧自由基对人胃癌细胞系MGC-803的p53、p21ras蛋白表达的影响

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氧自由基对人胃癌细胞系MGC-803的P53、P21ras蛋白表达的影响

作者：孙曼怡天津医科大学

学位级别：硕士

背景:胃癌是威胁人类健康的常见的恶性肿瘤之一,在我国胃癌发病率居于恶性肿瘤中的第三位,其发病机制尚未完全清楚。氧自由基(OFR)、抑癌基因p53突变、原癌基因ras激活及三者之间的相互关系是学者专家们的研究热点。目的:观察氧自... 详细信息

背景:胃癌是威胁人类健康的常见的恶性肿瘤之一,在我国胃癌发病率居于恶性肿瘤中的第三位,其发病机制尚未完全清楚。氧自由基(OFR)、抑癌基因p53突变、原癌基因ras激活及三者之间的相互关系是学者专家们的研究热点。目的:观察氧自由基对人胃癌细胞系MGC-803的p53、p21ras蛋白表达的影响,探讨其在胃癌的病因、发病机理中的作用。方法:通过对人胃癌细胞系MGC-803培养,并给予不同浓度的HO、SOD和Mucosta以调节MGC-803细胞内的氧自由基水平,采用硫代巴比妥酸反应物质法检测细胞内氧自由基中间产物丙二醛(MDA)的含量,应用MTT法观察HO、SOD和Mucosta对细胞生长状态的影响,应用免疫组织化学方法(IHC)检测MGC-803细胞p53、p21ras蛋白表达的情况。统计学方法采用方差分析、q检验及x检验等。结果:MGC-803细胞内p53、p21ras蛋白表达呈阳性,其中p53蛋白表达阳性率为46.44%,p21ras蛋白表达阳性率为37.85%。给予HO和SOD使细胞内氧自由基水平升高或降低时(pp53、p21ras蛋白表达则相应地增强或减弱(p<0.05),一定浓度的Mucosta可使MGC-803细胞

关键词：胃癌细胞系氧自由基 p53蛋白 p21ras蛋白

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宫颈鳞癌中p21ras蛋白表达及临床意义

重庆医科大学学报 2000年第4期25卷 385-386页

作者：周勤重庆医科大学临床学院妇产科重庆400016

目的　研究p21ras 蛋白表达与宫颈鳞癌发生发展的关系。方法　应用Sp（Streptavidin--peroxidase）免疫组化染色方法对10例正常宫颈组织、47例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）和56例宫颈鳞癌组织的p21ras蛋白进行检测。结果　正常宫颈组织无p... 详细信息

目的　研究p21ras 蛋白表达与宫颈鳞癌发生发展的关系。方法　应用Sp（Streptavidin--peroxidase）免疫组化染色方法对10例正常宫颈组织、47例宫颈上皮内瘤样病变（CIN）和56例宫颈鳞癌组织的p21ras蛋白进行检测。结果　正常宫颈组织无p21ras 蛋白表达，CIN及宫颈鳞癌阳性表达率分别为36.17%、73.21%，三者间差异极为显著（Ｐ＜0.01）。CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ表达率分别为16.67%、33.33%和55.56%，三者间差异显著（Ｐ＜0.05）。p21ras蛋白表达与宫颈鳞癌临床分期、组织学分级及淋巴结转移无关。结论　p21ras蛋白表达与宫颈鳞癌发生发展密切相关，并发生于癌变的早期阶段。

关键词：宫颈鳞癌免疫组化 Sp p21ras蛋白

p53、p21^(ras)蛋白和p-糖蛋白在胃癌中过表达的意义

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广西医学 2003年第7期25卷 1107-1109页

作者：廖海涛刘立义广西医科大学护理学院 530021 广西医科大学肿瘤医院物理检查科

目的 :研究胃癌组织p5 3、p2 1 ras蛋白和p 耐药糖蛋白 (p gp)在胃癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化SABC法检测 7例正常胃粘膜、1 2例慢性萎缩性胃炎、8例粘膜慢性胃炎伴肠型不典型增生和 93例胃腺癌组织中p5 3、p2 1 ras蛋白... 详细信息

目的 :研究胃癌组织p5 3、p2 1 ras蛋白和p 耐药糖蛋白 (p gp)在胃癌中的表达及临床意义。方法 :采用免疫组化SABC法检测 7例正常胃粘膜、1 2例慢性萎缩性胃炎、8例粘膜慢性胃炎伴肠型不典型增生和 93例胃腺癌组织中p5 3、p2 1 ras蛋白和p gp的表达。结果 :p5 3、p2 1 ras蛋白和p gp在正常胃粘膜组、癌前病变组和胃腺癌组中的阳性率分别为 0 ,1 4 3% ,0 ;2 0 0 % ,2 5 0 % ,5 0 % ;5 5 9% ,5 1 6 % ,4 4 1 %。p5 3蛋白、p gp表达均与淋巴结转移有关 (p p2 1 ras蛋白表达与肿瘤的浸润程度有关 (p p gp表达与p5 3和p2 1 ras表达有显著的协同性 (p p5 3和p2 1 ras蛋白常并存于胃癌组织中。p5 3突变蛋白和p gp过表达在胃癌淋巴结转移中起重要作用 ,因此早期进行p5 3蛋白和p

关键词：胃癌 p53基因 p21ras蛋白 p-耐药糖蛋白免疫组织化学

表皮生长因子对卵圆细胞p21 ras蛋白表达的影响

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中华实验外科杂志 2004年第10期21卷 1267-1267页

作者：张伟方驰华马俊勋涂玉亮第一军医大学珠江医院肝胆外科广州510282

卵圆细胞(OVC)为肝脏的干细胞,与肝癌发生关系密切[1,2].我们应用Western blot法通过对大鼠肝脏卵圆细胞在表皮生长因子(EGF)干预下p21ras表达的影响进行比较分析,同时运用四唑盐比色法(MTT)法观察细胞活力,以揭示EGF对卵圆细胞活性及p2... 详细信息

卵圆细胞(OVC)为肝脏的干细胞,与肝癌发生关系密切[1,2].我们应用Western blot法通过对大鼠肝脏卵圆细胞在表皮生长因子(EGF)干预下p21ras表达的影响进行比较分析,同时运用四唑盐比色法(MTT)法观察细胞活力,以揭示EGF对卵圆细胞活性及p21ras蛋白表达变化的影响。

关键词：表皮生长因子卵圆细胞 p21ras蛋白表达肝癌

p21ras、pIK3CA、p-AKT在肝癌、肝硬化中的表达及意义

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P21ras、PIK3CA、P-AKT在肝癌、肝硬化中的表达及意义

作者：郑鹏飞兰州大学

学位级别：硕士

目的：研究p21ras、pIK3CA和p-AKT蛋白在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的表达差异、相关性及意义。旨在通过检测p21ras、pIK3CA和磷酸化蛋白激酶B在乙型病毒性肝炎后肝硬化和乙肝病毒相关性肝细... 详细信息

目的：研究p21ras、pIK3CA和p-AKT蛋白在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的表达差异、相关性及意义。旨在通过检测p21ras、pIK3CA和磷酸化蛋白激酶B在乙型病毒性肝炎后肝硬化和乙肝病毒相关性肝细胞肝癌中的表达,探讨p21ras、pIK3CA和p-AKT在肝细胞肝癌及乙肝后肝硬化向肝癌转变中的作用及意义。方法：收集兰州大学第一医院普外二科自2007年8月～2009年11月手术切除的新鲜肝组织标本,经术后病理诊断证实为肝细胞肝癌和肝硬化,术前未接受放化疗的病例。其中34例肝癌组织(原发性肝细胞肝癌,均合并HBV感染);37例乙肝后肝硬化组织及30例正常肝组织(手术切除的肝血管瘤旁肝组织)标本。所有标本取自典型病变部位,标本取出后,立即置于-80℃冷冻备用。用免疫组化Elivison二步法检测肝细胞肝癌、乙肝后肝硬化和正常肝组织里p21ras、pIK3CA和p-AKT的表达。采用SpSS13.0统计软件进行数据分析,pp21ras在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的平均灰度值分别为138.86±2.9、145.34±2.06和152.07±1.17,与肝病的不同进展情况存在显著差异(ppIK3CA表达的平均灰度值明显高于肝硬化(149.49±0.78)和正常组织(154.71±1.29),三组之间有显著差异(pp-AKT在各组织中的表达和pIK3CA一致,分别为HCC (146.83±3.20)、肝硬化(150.97±2.59)、正常肝组织(155.00±4.37),三组间存在显著差异(pp21ras与pIK3CA表达正相关(r=0.64,p=0.020);pIK3CA与p-AKT表达正相关(r=0.594,p=0.001);p21ras与p-AKT表达无相关(r=0.145,p=0.315)：乙肝后肝硬化中p21ras与pIK3CA表达正相关(r=0.547, p=0.001);pIK3CA与p-AKT表达正相关(r=0.378,p=0.001);p21ras与p-AKT表达无相关(r=0.141,p=0.334)。结论：p21ras、pIK3CA和p-AKT在乙型病毒相关性肝细胞肝癌组织中高表达,明显高于乙肝后肝硬化和正常肝组织,三者相互作用共同参与HBV相关性肝癌的发生、发展过程;在乙肝后肝硬化向HBV相关性肝癌发展过程中,p21 ras-pIK3CA-p-AKT信号途径可能发挥重要作用,最终促进肝细胞无限制生长增值、抑制细胞凋亡,导致肝癌的发生。

关键词： p21ras蛋白磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α 蛋白激酶B 乙肝病毒相关性细胞肝癌乙型病毒性肝炎后肝硬化

p21ras、pIK3CA在肝癌与肝硬化中的表达及意义

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国际外科学杂志 2010年第8期37卷 511-514,F0003页

作者：郑鹏飞李玉民李汛刘士源张全保何雯婷刘涛兰州大学第一临床医学院兰州730000 兰州大学第二医院甘肃省消化系统瘤重点实验室兰州730030 兰州大学第一医院普外二科兰州730000

目的研究p21ras和pIK3CA蛋白在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的表达差异、相关性及意义.方法收集乙肝病毒相关性肝细胞肝癌组织标本34例、乙型病毒性肝炎后肝硬化37例、正常肝组织标本30例,用... 详细信息

目的研究p21ras和pIK3CA蛋白在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的表达差异、相关性及意义.方法收集乙肝病毒相关性肝细胞肝癌组织标本34例、乙型病毒性肝炎后肝硬化37例、正常肝组织标本30例,用免疫组化检测p21ras和pIK3CA蛋白表达水平,并进行比较和相关性分析.结果 p21 ras在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的平均灰度值分别为138.86±2.9、145.34±2.06和152.07±1.17,与肝病的不同进展情况存在显著性差异（p＜0.01）.pIK3CA在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化及正常肝组织标本中的平均灰度值分别为138.20±3.14、149.49±0.78和154.71±1.29,与肝病的不同进展情况存在显著性差异（p＜0.01）.在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌组和乙型病毒性肝炎后肝硬化组中,p21ras和pIK3CA蛋白表达均有相关性,在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌组中r=0.64,p＜0.05;乙型病毒性肝炎后肝硬化组中r=0.42,p＜0.05.结论 p21ras和pIK3CA蛋白在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌、乙型病毒性肝炎后肝硬化组织的过表达提示二者参与了肝硬化、肝癌的发病过程.在乙肝病毒相关性肝细胞肝癌和乙型病毒性肝炎后肝硬化中可能存在着p21ras／pI3K的信号转导途径,从而促进肝细胞再生,发生肝硬化及癌变.

关键词： p21ras蛋白磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚单位α 乙肝病毒相关性肝细胞肝癌乙型病毒性肝炎后肝硬化

应用组织芯片检测胃癌患者pTEN、Survivin和p21ras的表达

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应用组织芯片检测胃癌患者PTEN、Survivin和p21ras的表达