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腹腔注射脂多糖对幼鼠癫痫发作及海马TLR4/HMGb1/p-iκb-α表达的影响

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中国实用神经疾病杂志 2018年第2期21卷 117-123页

作者：禚志红张静李国栋王怀立郑州大学第一附属医院儿科河南郑州450052 郑州大学生命科学学院河南郑州450052

目的探讨脂多糖(LpS)预处理对幼鼠癫痫发作及海马炎症介质Toll样受体4/高迁移率族蛋白1/磷酸化核因子抑制蛋白α(TLR4/HMGb1/p-iκb-α)表达的影响。方法出生21d的SD鼠随机分为生理盐水组(对照组),模型Ⅰ组和模型Ⅱ组,模型Ⅰ组采用海人... 详细信息

目的探讨脂多糖(LpS)预处理对幼鼠癫痫发作及海马炎症介质Toll样受体4/高迁移率族蛋白1/磷酸化核因子抑制蛋白α(TLR4/HMGb1/p-iκb-α)表达的影响。方法出生21d的SD鼠随机分为生理盐水组(对照组),模型Ⅰ组和模型Ⅱ组,模型Ⅰ组采用海人酸(KA)诱导癫痫发作,模型Ⅱ组在应用KA前2h腹腔注射LpS,观察幼鼠癫痫发作的行为学表现,荧光定量pCR检测癫痫持续状态(SE)后3h和24h各组海马TLR4和HMGb1基因的表达,Westernblot法检测SE后3h、24h各组海马TLR4、HMGb1、p-iκb-α蛋白的表达。结果与对照组相比:模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马TLR4基因在SE后3h表达均显著增加(t=4.806,ppppppppb1基因在SE后3h表达均显著增加(t=3.626,ppppb1蛋白在SE后3h均无显著性增加(t=0.389,p>0.05;t=0.213,p>0.05),SE后24h也无显著性增加(t=0.106,p>0.05;t=0.279,p>0.05)。模型Ⅰ组、模型Ⅱ组海马p-iκb-α蛋白表达在SE后3h均显著增加(t=4.383,pppppS预处理可显著增加海马TLR4基因在SE后3h的水平(t=2.362,pppiκb-α蛋白表达(t=4.249,ppb1基因水平无显著性影响(t=0.569,p>0.05;t=0.691,p>0.05),对SE后3h、24hHMGb1蛋白表达也无显著性影响(t=0.168,p>0.05;t=0.385,p>0.05)。结论LpS预处理加重幼鼠癫痫发作,使TLR4/p-iκb-α表达升高,对HMGb1表达无显著改变。

关键词：脂多糖海人酸癫痫高迁移率族蛋白1 Toll样受体4 p-iκb-α 大鼠

三叶香茶菜介导iκb-α磷酸化对CCl_(4)致大鼠肝纤维化的影响

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中国比较医学杂志 2022年第2期32卷 10-15页

作者：周至品农汝楠覃乐刘代华王竟静陈勇王晓源广西医科大学附属柳州市人民医院广西柳州545006 右江民族医学院广西百色533000 广西中医药大学南宁530001

目的探讨三叶香茶菜通过影响iκb-α及其磷酸化下调核转录因子(nuclear transcription factor-κb,NF-κb)信号通路减轻四氯化碳诱导大鼠肝纤维化。方法采用CCl_(4)肝纤维化大鼠模型,生化检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、羟脯氨酸(HYp),ELiS... 详细信息

目的探讨三叶香茶菜通过影响iκb-α及其磷酸化下调核转录因子(nuclear transcription factor-κb,NF-κb)信号通路减轻四氯化碳诱导大鼠肝纤维化。方法采用CCl_(4)肝纤维化大鼠模型,生化检测血清中谷丙转氨酶(ALT)、羟脯氨酸(HYp),ELiSA检测转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)水平、白介素-6(iL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α),荧光定量pCR法检测大鼠肝组织Toll样受体4(TLR_(4))mRNA、NF-κb p65 mRNA、NF-κb抑制蛋白-α(iκb-α)mRNA的表达,Western blot法检测大鼠肝组织中TLR_(4)、NF-κb p65、p-iκb-α蛋白表达,HE染色评价肝组织病理损害。结果与模型组相比较,三叶香茶菜能够显著抑制肝纤维化大鼠中ALT、HYp、TGF-β1、α-SMA、iL-6、TNF-α水平,改善大鼠肝组织病理损害,显著抑制肝纤维化大鼠TLR_(4)mRNA、NF-κb p65 mRNA的表达,上调iκb-αmRNA的表达,下调TLR_(4)、NF-κb p65蛋白表达,下调p-iκb-α蛋白的表达。结论三叶香茶菜下调iκb-α磷酸化,抑制NF-κb信号通路的活化,达到抗肝慢性炎症损伤作用。

关键词：三叶香茶菜肝纤维化 iκb-α p-iκb-α NF-κb

因宁片含药血清对T3诱导大鼠肝巨噬细胞NF-κb、iκb-α磷酸化的影响

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中药材 2019年第8期42卷 1911-1914页

作者：杨琴龙丽马利赖月花文牡侯连兵南方医科大学南方医院广东广州510515

目的:研究因宁片对体外T3诱导大鼠肝巨噬细胞(RHMa)NF-κb、iκb-α磷酸化水平的影响。方法:通过不同浓度的T3作用于RHMa 24、48 h,MTT法检测其增殖率,Western blot检测p-NF-κb、p-iκb-α蛋白表达,确定最佳干预浓度和干预时间,选用T35... 详细信息

目的:研究因宁片对体外T3诱导大鼠肝巨噬细胞(RHMa)NF-κb、iκb-α磷酸化水平的影响。方法:通过不同浓度的T3作用于RHMa 24、48 h,MTT法检测其增殖率,Western blot检测p-NF-κb、p-iκb-α蛋白表达,确定最佳干预浓度和干预时间,选用T3500 nmol/L刺激RHMa细胞24 h后,给予10%因宁片含药血清治疗24 h,检测RHMa细胞中p-NF-κb、p-iκb-α蛋白表达的变化。结果:RHMa的增殖率与T3的浓度呈负相关,p-NF-κb、p-iκb-α蛋白表达量随T3浓度的升高而升高。因宁片含药血清对p-NF-κb和p-iκb-α蛋白表达量的抑制作用呈剂量依赖性。结论:高浓度T3(≥300 nmol/L)对肝巨噬细胞均有直接的毒性作用,低浓度T3(≥50 nmol/L)即能诱导肝巨噬细胞中NF-κb、iκb-α的激活;而因宁片含药血清则能有效抑制肝巨噬细胞中NF-κb、iκb-α的磷酸化,这可能是因宁片治疗甲亢性肝损害的作用机制之一。

关键词： T3 肝巨噬细胞因宁片 p-NF-κb p-iκb-α

基于NF-κb信号通路探讨艾灸对类风湿性关节炎大鼠抗炎效应的iKKβ/iκb-α机制研究

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基于NF-κB信号通路探讨艾灸对类风湿性关节炎大鼠抗炎效应的IKK...

作者：尚娅男成都中医药大学

学位级别：硕士

目的:类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种慢性炎症性自身免疫疾病,全球患病率较高,大量研究证明艾灸对RA有抗炎效果,在RA病理过程中核因子κb（Nuclear factor kappa b,NF-κb）信号通路对其滑膜炎症以及骨破坏有比较明... 详细信息

目的:类风湿性关节炎（Rheumatoid Arthritis,RA）是一种慢性炎症性自身免疫疾病,全球患病率较高,大量研究证明艾灸对RA有抗炎效果,在RA病理过程中核因子κb（Nuclear factor kappa b,NF-κb）信号通路对其滑膜炎症以及骨破坏有比较明显的作用,而核因子κb抑制蛋白α（NF-kappa-b inhibitor alpha,iκb-α）的磷酸化是该通路活化的重要因素,核因子κb抑制因子激酶β（iκb kinaseβ,iKKβ）是iκb-α磷酸化的主要上游调控蛋白,故本研究以“iκb-α”为切入点,以“iKKβ-iκb-α-细胞因子”为研究主线,运用蛋白质免疫印迹（Western blot,Wb）、酶联免疫吸附实验（Enzyme-linked immunosoorbent assay,ELiSA）等方法,观察艾灸对实验性RA大鼠的抗炎作用,探讨艾灸对NF-κb通路关键蛋白iKKβ、iκb-α的调节机制,分析艾灸对NF-κb通路产生作用的机制,并进一步阐明艾灸对RA抗炎效应的作用机理,为临床艾灸治疗RA提供一定的实验依据。方法:雄性成年SD大鼠30只,体重180±20g,随机分为空白对照组（简称“空白组”）、RA模型组（简称“模型组”）、艾灸治疗组（简称“艾灸组”）、iκb-α磷酸化抑制剂bay11-7082组（简称“药物组”）,艾灸+抑制剂组（简称“药艾组”）,6只/组。实验第一天于模型组、艾灸组、药物组和药艾组SD大鼠双侧后足垫部按0.5ml/kg剂量注射弗氏完全佐剂。造模一周后进行干预治疗,对艾灸组和药艾组大鼠予麦粒灸“肾俞”、“足三里”,每穴各灸5壮,1次/天,两侧交替进行;对药物组和药艾组大鼠予腹腔注射iκb-α磷酸化抑制剂bay 11-7082（1mg/kg）,1次/天,两种干预均6天为1疗程,总计3疗程,疗程之间休息1天。分别于实验第1、7、28天测量各组大鼠的右侧足垫厚度;于实验第28天采集大鼠血清、左侧踝关节滑膜组织、右侧踝关节样本,观察大鼠滑膜病理形态,运用ELiSA法检测血清iKKβ、iL-4、iL-17的含量,Wb法检测滑膜组织iκb-α、p-iκb-α蛋白的表达。结果:1.艾灸可改善RA大鼠的足垫厚度。大鼠滑膜组织病理形态检测结果显示:与空白组相比,模型组大鼠滑膜组织增生及炎性细胞浸润和巨噬细胞增生明显增加（p＜0.05）。与模型组相比,艾灸组大鼠滑膜组织增生及炎性细胞浸润和巨噬细胞增生均降低（p＜0.05）。2.血清iKKβ蛋白检测结果显示:与空白组相比,模型组大鼠血清iKKβ水平升高（p＜0.05）。与模型组相比,艾灸组和药物组大鼠血清iKKβ水平降低（p＜0.05）,药艾组iKKβ水平降低不明显。艾灸组与药物组间大鼠血清iKKβ水平无明显差异,药艾组大鼠血清iKKβ水平高于药物组（p＜0.05）。3.滑膜组织iκb-α、p-iκb-α蛋白检测结果显示:与空白组相比,模型组大鼠p-iκb-α蛋白水平升高（p＜0.01）,iκb-α水平有升高但无明显差异。与模型组相比,艾灸组大鼠p-iκb-α蛋白水平下降但无明显差异,iκb-α蛋白水平升高（p＜0.05）;药物组大鼠p-iκb-α蛋白水平降低（p＜0.01）,iκb-α蛋白水平上升但无明显差异;药艾组大鼠p-iκb-α蛋白水平降低（p＜0.01）,iκb-α蛋白水平升高（p＜0.05）;艾灸组、药物组、药艾组大鼠p-iκb-α/iκb-α比值均低于模型组（p＜0.01）。与药物组相比,艾灸组、药艾组大鼠滑膜p-iκb-α、iκb-α蛋白水平无明显变化。4.血清细胞因子iL-4、iL-17检测结果显示:与空白组相比,模型组大鼠血清iL-4水平降低但无统计意义,iL-17水平上升（p＜0.05）。与模型组相比,艾灸组大鼠血清iL-4水平有所上升但无统计意义,iL-17水平下降（p＜0.05）;药物组大鼠血清iL-4水平上升（p＜0.01）,iL-17水平上升（p＜0.01）;药艾组大鼠血清iL-4水平上升（p＜0.01）,iL-17水平上升（p＜0.01）。与药物组相比,艾灸组大鼠血清iL-4水平较低（p＜0.01）,iL-17水平下降（p＜0.01）;药艾组大鼠血清iL-4、iL-17水平无明显变化。结论:1.艾灸对RA抗炎效果明显,对实验性RA大鼠关节局部炎症反应有抑制作用。2.艾灸可抑制实验性RA大鼠血清iKKβ的水平并促进滑膜iκb-α的表达,通过调控iKKβ/iκb-α的表达从而作用于NF-κb通路,并可能直接作用于后续炎症因子,实现对RA的抗炎作用。

关键词：类风湿性关节炎艾灸 iKKβ iκb-α p-iκb-α 细胞因子

LY294002抑制TFF3阳性甲状腺乳头状癌TpC-1细胞恶性生物学行为

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中国药理学通报 2020年第12期36卷 1684-1690页

作者：郭梦姚裴达林旭张文静王树吴靖芳薛刚河北北方学院形态学实验室河北张家口075000 河北北方学院附属第一医院头颈外科河北张家口075000

目的探讨pi3K/AKT通路抑制剂LY294002对肠三叶因子3(intestinal trefoil factor,TFF3)阳性甲状腺乳头状癌细胞TpC-1恶性生物学行为的影响及机制。方法不同浓度LY294002培养的TFF3过表达甲状腺乳头状癌细胞TFF3-TpC-1为实验组;TFF3-TpC-... 详细信息

目的探讨pi3K/AKT通路抑制剂LY294002对肠三叶因子3(intestinal trefoil factor,TFF3)阳性甲状腺乳头状癌细胞TpC-1恶性生物学行为的影响及机制。方法不同浓度LY294002培养的TFF3过表达甲状腺乳头状癌细胞TFF3-TpC-1为实验组;TFF3-TpC-1细胞株为过表达组;野生型TpC-1细胞株为Control组。倒置显微镜观察各组细胞形态变化;生长曲线检测各组细胞增殖水平;Transwell和划痕实验检测侵袭和迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡比例;Western blot检测与通路和凋亡相关蛋白的表达。结果形态学显示,实验组细胞间隙随LY294002浓度增加而变大,且圆形透亮细胞增多。LY294002呈浓度依赖性地抑制TFF3-TpC-1细胞的增殖、侵袭和迁移并逐渐诱导细胞凋亡(ppblot显示通路蛋白和抗凋亡蛋白p-Akt、p-iκb-α、NF-κb-p65、bcl-2随LY294002浓度增加而被下调,促凋亡蛋白iκb-α、cleaved-caspase-3、cleaved-caspase-9、bax表达升高(pppC-1细胞恶性生物学行为,其机制可能与LY294002通过抑制Akt磷酸化,下调pi3K/AKT通路及下游NF-κb等转录因子活性有关。

关键词： LY294002 pi3K/AKT/NF-κb 甲状腺乳头状癌凋亡 p-iκb-α iκb-α cleaved-caspase-3 cleaved-caspase-9