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丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及gsk3β、p-gsk3β蛋白表达的影响

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丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及GSK3β、p-GSK3β蛋白表达的影...

作者：韩露黑龙江中医药大学

学位级别：硕士

目的:探讨丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及gsk3β、p-gsk3β蛋白表达的影响,为丰富环境在临床康复中应用提供理论指导。方法:选用随机数字表法将7日龄SD仔鼠分为假手术组、模型组以及丰富环境组,每组24只。参照最新改良的Rice-Vannucc... 详细信息

目的:探讨丰富环境对HIBD大鼠海马区神经元及gsk3β、p-gsk3β蛋白表达的影响,为丰富环境在临床康复中应用提供理论指导。方法:选用随机数字表法将7日龄SD仔鼠分为假手术组、模型组以及丰富环境组,每组24只。参照最新改良的Rice-Vannucci法制备HIBD幼鼠模型。丰富环境组给予7 日的早期抚触按摩疗法后给予丰富环境笼干预治疗,假手术组与模型组进行标准笼环境饲养,只给予同等条件抓取。建模14d和28d后,选用Morris水迷宫评估各组大鼠学习记忆能力;尼氏染色检测各组大鼠海马神经元存活情况;Western blot法检测各组大鼠海马gsk3β、p-gsk3β蛋白表达的影响。结果:学习记忆能力:脑缺氧缺血14d、28d之后,与假手术组比较,模型组逃避潜伏期明显增长,平台穿越的次数变少,差异具有统计学意义(ppppgsk3β、p-gsk3β蛋白表达:脑缺氧缺血14d、28d之后,与假手术组大鼠比较,模型组大鼠海马区gsk3β蛋白表达减少,p-gsk3β蛋白表达显著增加,差异具有统计学意义(pgsk3β蛋内表达有所增加,大鼠海马区p-gsk3β蛋白表达较少,差异具有统计学意义(pgsk3β,上调p-gsk3β蛋白的表达。

关键词：缺氧缺血性脑损伤丰富环境 gsk3β p-gsk3β 神经元存活

gsk3β和p38MApK在乳腺癌组织中的表达及意义

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GSK3β和p38MAPK在乳腺癌组织中的表达及意义

作者：安淑香中国医科大学

学位级别：硕士

前言糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3,gsk3β)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,调节细胞增殖与凋亡,微管动力学及细胞运动和血管生成。致瘤转录因子和癌蛋白作为gsk3p底物,由gsk3β磷酸化失活,抑制gsk3β的活性及表达诱导EMT,表... 详细信息

前言糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3,gsk3β)是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,调节细胞增殖与凋亡,微管动力学及细胞运动和血管生成。致瘤转录因子和癌蛋白作为gsk3p底物,由gsk3β磷酸化失活,抑制gsk3β的活性及表达诱导EMT,表明gsk3p在肿瘤发生和侵袭转移中发挥作用。p38MApK是Mitogen Activated protein Kinase(MApK)家族的重要成员在细胞运动、肿瘤侵袭转移方面具有重要的调控功能。gsk3p位点的磷酸化状态调节gsk3β的活性,在N端丝氨酸9(Ser9)处磷酸化可降低gsk3p活性。gsk3β与p38MApK存在一定关系,新近研究发现在鼠F9畸胎癌细胞,p38MApK可以通过使gsk3β的N端丝氨酸9(Ser9)处磷酸化失活调节经典的Wnt信号通路。在胸腺和脑组织中p38MApK可以通过直接磷酸化gsk3p的C端使其灭活,而且这一行为能导致p.catenin的聚集,这些表明gsk3β可能受p38MApK的调控。有关gsk3β在乳腺癌体外的研究较多,抑制gsk3p的活性抑制乳腺癌细胞凋亡,促进Wnt信号通路的活化,提示gsk3β的失活促进细胞的恶性转化和肿瘤发展,但关于它在乳腺癌组织中的表达研究鲜见报道,p38MApK可能磷酸化gsk3β促进其失活。本文研究p-gsk3β,p-p38和总的gsk3β在乳腺癌组织中的表达及和临床病理因素的关系,明确gsk3β在乳腺癌组织中表达的意义。材料和方法1、材料(1)临床资料80例乳腺癌组织蜡块取自中国医科大学第一临床学院病理科,为2005年-2008年手术切除标本。依据WH02003年所推荐的乳腺癌组织学分类标准进行分类,80例均为浸润性导管癌。收集50例外科手术切除新鲜乳腺组织标本,标本取出后立即置-70℃冰冻保存。其中30例为乳腺浸润性导管癌,20例为乳腺纤维腺瘤。(2)主要试剂兔抗人p-gsk3β-ser9多克隆抗体(sc-11757-R)购自Santa Cruz公司,鼠抗人p-p38单克隆抗体(#9216)购自Cell Signaling公司,兔抗人gsk3β(BS1402)多克隆抗体购自Bioworld Technology公司。S-p超敏免疫组化试剂盒、DAB酶底物显色试剂盒购自福州迈新生物技术有限公司。2、方法(1)免疫组织化学(S-p)法采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶法(S-p法)。pBS代替一抗作为阴性对照,用已知阳性片作阳性对照。(2) Western Blot取新鲜样品(约3mm3)加裂解液,剪碎,匀浆超声处理,高速低温离心提取上清蛋白,电泳,转印,经封闭后加相应的一抗、二抗及显色试剂检测。图像扫描,测定p-gsk3β、p-p38蛋白的灰度值。3、统计学分析采用SpSS for windows11.5统计学软件,进行χ2检验、t检验和pearson相关分析。pp-gsk3β、p-p38和gsk3β蛋白在乳腺癌组织中的表达及其同临床病理因素的关系(1)免疫组织化学结果显示,p-gsk3β蛋白主要位于乳腺癌细胞浆,呈棕黄色颗粒,阳性率为67.5%(54/80)。p-p38蛋白主要位于乳腺癌细胞核内,呈棕黄色颗粒,阳性率为60.0%(48/80)。p-gsk3β和p-p38蛋白表达与乳腺癌临床分期和淋巴结转移有关,与患者年龄和肿瘤大小没有关系,p-gsk3β蛋白与组织学分级有关(0.019)。56%的乳腺癌组织中gsk3β蛋白胞质表达消失,32.5%乳腺癌组织发现gsk3β蛋白核表达,胞核表达的gsk3β蛋白和乳腺癌的临床分期及ER表达有关。(2)Western Blot结果表明p-gsk3β和p-p38两种蛋白含量在乳腺癌组织与纤维腺瘤中的差异具有明显的统计学意义。2、乳腺癌组织中p-p38和p-gsk3β蛋白表达相关性分析p-p38表达阳性的48例乳腺癌组织中p-gsk3β表达阳性者36例;p-p38表达阴性的32例乳腺癌组织中p-gsk3β表达阴性者14例。统计学分析显示p-p38和p-gsk3β两者之间表达存在正相关(r=0.316,pgsk3β抑制Wnt通路,调节细胞增殖和凋亡,在肿瘤的发生中发挥重要作用,体外研究表明在乳腺癌细胞系激活gsk3β促进细胞凋亡。Marganit Farago等通过基因修饰的方式抑制乳腺癌细胞系中gsk3β的活性,发现Wnt通路异常激活,促进乳腺肿瘤的发生。抑制gsk3β的活性诱导EMT,因此gsk3β失活可能促进肿瘤的发展。gsk3β在乳腺癌中的研究大多集中在体外

关键词： p-p38 p-gsk3β gsk3β 乳腺癌

p-gsk3β、p-Akt在卵巢癌中的表达及与卵巢癌耐药关系的研究

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现代肿瘤医学 2012年第3期20卷 584-589页

作者：魏欣吕庆杰孙寒雪齐亚飞王劲欧曹程程中国医科大学附属盛京医院病理科辽宁沈阳110004

目的:研究磷酸化糖原合酶激酶-3β(p-gsk3β)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白在卵巢上皮癌中的表达情况及其与卵巢癌化疗原发耐药的关系。方法:应用MTT比色分析法检测卵巢癌细胞对紫杉醇(pTX)、表阿霉素(EADM)、顺铂(CDDp)和卡铂(CBp)4种临床常... 详细信息

目的:研究磷酸化糖原合酶激酶-3β(p-gsk3β)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白在卵巢上皮癌中的表达情况及其与卵巢癌化疗原发耐药的关系。方法:应用MTT比色分析法检测卵巢癌细胞对紫杉醇(pTX)、表阿霉素(EADM)、顺铂(CDDp)和卡铂(CBp)4种临床常用化疗药物的敏感性。采用免疫组织化学二步法检测10例卵巢上皮良性肿瘤、10例卵巢上皮交界性肿瘤及70例卵巢癌的石蜡包埋组织中p-gsk3β和p-Akt的表达,并分析它们与临床病理因素的关系。结果:65例卵巢癌标本进行体外药敏试验,25例失败,可评价标本为40例。卵巢癌组织中p-gsk3β蛋白的阳性率为57.50%(23/40),p-Akt蛋白的阳性率为65%(26/40),二者呈正相关(r=0.535,pp-gsk3β蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均显著下降,其中CDDp、pTX两种药物的平均抑制率差异均显著(t=2.573和t=2.174;p=0.014和p=0.036)。p-Akt蛋白表达阳性组和阴性组相比,化疗药物的平均抑制率均显著下降,其中CDDp、CBp两种药物的平均抑制率差异均显著(z=-2.201和z=-2.298;ppp-gsk3β、p-Akt的阳性表达率分别为60%(42/70)、67.14%(47/70),二者呈正相关(r=0.546,pp-gsk3β和p-Akt蛋白在卵巢癌组织组中的表达水平均显著高于卵巢上皮交界性、良性肿瘤,差异有统计学意义,pp-gsk3β蛋白的表达与卵巢癌的分化程度及临床分期密切相关,pp-Akt与卵巢癌的分化程度密切相关,pp-gsk3β和p-Akt的过表达在卵巢癌的发展中具有重要的作用,卵巢癌耐药的产生可能与p-Akt结合gsk-3β使其失活有关。

关键词： p-gsk3β p-Akt 卵巢癌化疗耐药免疫组织化学 MTT比色分析法

p-gsk3β和β-catenin蛋白在子宫内膜癌中的表达及临床意义

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河北医药 2012年第14期34卷 2091-2093页

作者：张智慧河北省遵化市人民医院妇科 064200

目的检测子宫内膜癌组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白表达并探讨其意义。方法采用微波EliVisionTM免疫组织化学法检测60例子宫内膜癌,32例正常子宫内膜组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白的表达。结果正常子宫内膜组织中β-catenin... 详细信息

目的检测子宫内膜癌组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白表达并探讨其意义。方法采用微波EliVisionTM免疫组织化学法检测60例子宫内膜癌,32例正常子宫内膜组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白的表达。结果正常子宫内膜组织中β-catenin蛋白表达正常,子宫内膜癌组织中β-catenin发生异位表达。子宫内膜癌组织中p-gsk3β和异位表达的β-catenin分别定位于细胞浆和细胞核,两者表达明显高于癌旁正常组织(pppp-gsk3β表达和β-catenin异位表达在子宫内膜癌呈高表达,且与子宫内膜癌的发生、发展和转移密切相关。

关键词：子宫内膜肿瘤 p-gsk3β β-catenin 免疫组化

p-gsk3β和β-catenin蛋白在乳腺癌中的表达及临床意义

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实用心脑肺血管病杂志 2012年第12期20卷 1957-1959页

作者：王如美刘秀艳赵亚男张艳霞孙冬霞李燕辉商小涓河北工程大学医学院河北省邯郸市056001 邯郸市妇幼保健院

目的检测乳腺癌组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白表达情况并探讨其意义。方法采用微波EliVisionTM免疫组织化学法检测56例乳腺癌组织、30例癌旁正常乳腺组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白的阳性表达率。结果 (1)56例乳腺癌组织中p-... 详细信息

目的检测乳腺癌组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白表达情况并探讨其意义。方法采用微波EliVisionTM免疫组织化学法检测56例乳腺癌组织、30例癌旁正常乳腺组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白的阳性表达率。结果 (1)56例乳腺癌组织中p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白的阳性表达率分别为57.14%(32/56)、64.29%(36/56),在癌旁正常乳腺组织中无表达,二者比较差异均有统计学意义(pp-gsk3β的表达与乳腺癌的组织学分级、临床TNM分期和淋巴结转移有关(pp>0.05)。β-catenin表达与乳腺癌的淋巴结转移、组织学分级有关(pp>0.05)。(3)p-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白的表达呈正相关(pp-gsk3β蛋白和β-catenin蛋白在乳腺癌呈高表达,且与乳腺癌的发生、发展和转移密切相关。

关键词：乳腺肿瘤 p-gsk3β β-catenin 免疫组化

全氟辛酸（pFOA）抑制内皮细胞血管生成功能的机制研究

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全氟辛酸（PFOA）抑制内皮细胞血管生成功能的机制研究

作者：肖荷中国医科大学

学位级别：硕士

目的:全氟辛酸(pFOA)是一种广泛应用于人类生产生活的合成氟表面活性剂,也是一种强环境污染物,具有在环境中不易分解的特点。pFOA可通过消化道、呼吸道和皮肤途径进入人体,导致正常细胞功能受损,并诱发多种疾病产生。pFOA对人体健康的... 详细信息

目的:全氟辛酸(pFOA)是一种广泛应用于人类生产生活的合成氟表面活性剂,也是一种强环境污染物,具有在环境中不易分解的特点。pFOA可通过消化道、呼吸道和皮肤途径进入人体,导致正常细胞功能受损,并诱发多种疾病产生。pFOA对人体健康的严重危害性以及对地球环境污染的日益严重性,已经引起了世界众多环境学家和科研者的注意,成为了环境科研领域的研究热点。流行病学资料显示,pFOA血清水平的增加与心血管疾病存在显著的独立关联。然而,pFOA是否影响内皮细胞血管生成尚无报道。内皮细胞是心血管系统的重要组成部分,排列在从心脏到毛细血管的整个循环系统中。它作为组织与血液之间的重要屏障,对维持循环系统的稳态起着关键性作用。内皮细胞是心血管疾病多种危险因素的直接目标,内皮细胞功能障碍是导致多种心血管疾病发病的使动或促进因素,研究其损伤机制对于疾病预防、治疗和愈后都至关重要。血管生成是衡量内皮细胞功能的重要指标。血管生成的良好调节在许多疾病的转归和恢复中起着关键作用;而当血管生成受抑制时,也会促进心血管疾病的进展并延缓其恢复。因此,血管生成的平衡调节对维持机体的正常生理功能具有重要的意义。蛋白激酶A(protein Kinase A,pKA)是细胞信号转导中重要的第二信使环磷酸腺苷(c AMp)的经典靶向分子。当pKA被上游信号激活时,可磷酸化诸如gsk3β、YAp及pDK1等靶蛋白,继而调节细胞增殖、迁移、分化、自噬、衰老等生物学过程。许多化学物质可以调节细胞内pKA的活性,而pFOA是否可以调控pKA活性尚未见报道。Wnt/β-catenin信号被证明对内皮细胞的血管萌芽和新生具有积极的调控作用,β-catenin是gsk3β的主要下游分子之一,gsk3β与axin/ApC组成的复合体可促进β-catenin的磷酸化和泛素化降解。当该复合物被抑制后,细胞质内的β-catenin得以稳定存在,从而入核发挥转录因子的作用。Snail1是β-catenin的下游靶基因,受转录因子β-catenin转录调控,且snail对促进血管内皮细胞中萌芽血管的生成具有重要意义。在本文中,我们研究了pFOA对人脐静脉内皮细胞HUVEC血管生成功能的影响并探索了其中的具体机制。我们发现,pFOA的应用抑制了内皮细胞的血管生成功能。通过转录组文库构建和二代高通量测序,我们分析出pFOA处理组的pKA活性受到了抑制,Western Blot以及后续的回复实验也验证了测序结果的可靠性;pFOA的处理还导致了下游gsk3β/β-catenin信号的抑制,使用gsk3β抑制剂Li Cl以及构建β-catenin核定位慢病毒转染细胞后进行的回复实验说明了gsk3β/β-catenin信号也介导了血管生成的抑制过程;最后我们检测出pFOA导致转录因子snail的表达下调。我们拟通过pFOA处理血管内皮细胞为研究模型,探究pFOA抑制血管生成的具体机制,并希望为心血管疾病的基础研究提供理论依据。研究方法:1、将人脐静脉内皮细胞系HUVEC分为对照组及pFOA处理组,进行CCK8细胞活力检测实验、Matrigel血管形成实验、划痕愈伤实验和三维发芽实验,明确pFOA对血管生成的影响;2、提取对照组及pFOA处理组细胞的m RNA,进行转录组文库构建、二代测序、GSEA富集分析,通过Western Blot检测p-pKA的表达;3、使用pKA激活剂8-Bromo-c AMp刺激pFOA处理组的HUVEC,进行血管形成的回复实验;4、Western Blot检测对照组和pFOA处理组p-pKA下游靶蛋白p-gsk3β(Ser9)的表达,并使用gsk3β抑制剂Li Cl干预后进行血管形成的回复实验;5、通过免疫荧光实验检测gsk3β下游的β-catenin的细胞内定位,以及构建β-catenin核定位慢病毒转染细胞,进行血管形成的回复实验;6、通过Western Blot和q pCR实验检测pFOA处理前后HUVEC内End MT相关指标在蛋白和基因层面的变化,检测到snail在pFOA的作用下表达下调。结果:1、pFOA抑制HUVEC的血管生成;2、pFOA抑制HUVEC中pKA的磷酸化;3、pFOA通过抑制pKA的磷酸化,减少HUVEC的血管生成;4、pFOA通过抑制pKA的磷酸化,影响gsk3β磷酸化;5、gsk3β的磷酸化影响血管生成;6、pFOA通过抑制β-catenin入核影响血管生成;7、pFOA导致HUVEC中snail的表达下调。结论:pFOA可能通过抑制HUVEC内pKA的活性,下调p-gsk3β(Ser9)的表达,使β-catenin入核减少,导致snail的转录和表达下降,抑制了血管生成。

关键词： pFOA 血管生成 pKA p-gsk3β β-catenin snail

Neu-p11在胰岛素抵抗脂肪细胞模型中对胰岛素受体后信号通路的影响

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第二军医大学学报 2016年第9期37卷 1184-1186页

作者：李秀平蔡世昌尹卫东张素君卢琼李兴 Moshe Laudon 湖南医药学院检验医学院怀化418000 湖南医药学院基础医学院怀化418000 南华大学医学院心血管疾病研究所衡阳412000 南华大学实验动物学部衡阳412000 Neurim pharmaceuticals Ltd. Tel-Aviv 69710Israel

2型糖尿病为影响人类生存质量的主要病因之一,在过去十年里,2型糖尿病在全球范围的发病率显著增加[1]。其主要特征是胰岛素相对不足和存在胰岛素抵抗。2型糖尿病的胰岛素抵抗作用和人体肝脏、骨骼肌及脂肪组织中的胰岛素信号转导通路紊... 详细信息

2型糖尿病为影响人类生存质量的主要病因之一,在过去十年里,2型糖尿病在全球范围的发病率显著增加[1]。其主要特征是胰岛素相对不足和存在胰岛素抵抗。2型糖尿病的胰岛素抵抗作用和人体肝脏、骨骼肌及脂肪组织中的胰岛素信号转导通路紊乱关系密切[2]。经典的胰岛素信号转导有胰岛素受体底物1（insulin receptor substrate 1,IRS-1）/磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidylinositol 3-kinase, pI3K）和丝裂原激活蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase,MApK）两条途径,但主要是通过胰岛素受体后IRS-1/pI3K途径来调节其代谢.

关键词： Neu-p11 褪黑素胰岛素抵抗 p-IRS-1 pI3K p-gsk3β luzindole

虾青素对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型的神经保护作用

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中国组织工程研究 2015年第40期19卷 6480-6484页

作者：林良烽福建医科大学附属第二医院儿科福建省泉州市362000

背景:研究发现虾青素有良好的神经保护作用,但是对于其在新生儿缺氧缺血性损伤中的治疗作用,目前尚无相关报道。目的:构建缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型,观察虾青素对其产生的神经保护作用及作用的途径。方法:从98只7 d龄的SD乳鼠中随机... 详细信息

背景:研究发现虾青素有良好的神经保护作用,但是对于其在新生儿缺氧缺血性损伤中的治疗作用,目前尚无相关报道。目的:构建缺氧缺血性脑损伤新生大鼠模型,观察虾青素对其产生的神经保护作用及作用的途径。方法:从98只7 d龄的SD乳鼠中随机取30只作为假手术组,其余大鼠结扎左颈总动脉2 h后,置于体积分数92%的特种标准气体、8%的氧气缺氧舱2 h建立缺血缺氧性脑损伤模型。假手术组仅分离颈总动脉,不予缺血缺氧处理。将造模成功的大鼠随机分为脑缺血缺氧组和虾青素治疗组,各30只。虾青素治疗组大鼠在脑缺血缺氧模型建成后立即通过腹腔注射80 mg/kg虾青素。结果与结论:与假手术组相比,脑缺血缺氧组大鼠缺血损伤区顶叶皮质中p-Akt、p-gsk3β、cleaved-caspase3蛋白的表达水平显著增加,Bcl-2蛋白的表达水平显著减少(ppase3蛋白的表达水平(pppgsk3β信号通路相关。

关键词：实验动物脑及脊髓损伤动物模型虾青素组织工程新生大鼠缺血缺氧性损伤 p-Akt p-gsk3β Bcl-2 cleaved-caspase3 凋亡

丹酚酸B干预肾间质纤维化Wnt/β-catenin信号通路的研究

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中药新药与临床药理 2016年第5期27卷 602-607页

作者：王曼王新宇陈叶香孙帅军蒋宝平许立南京中医药大学药学院江苏南京210023 江苏省中药药效与安全性评价重点实验室江苏南京210023

目的探究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对肾间质纤维化Wnt/β-catenin信号通路关键组分的影响并初步探索其量效关系,为丹酚酸B在临床慢性肾病的治疗提供理论依据。方法将32只C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只:假手术组(Sham),模型... 详细信息

目的探究丹酚酸B(salvianolic acid B,Sal B)对肾间质纤维化Wnt/β-catenin信号通路关键组分的影响并初步探索其量效关系,为丹酚酸B在临床慢性肾病的治疗提供理论依据。方法将32只C57BL/6小鼠随机分为4组,每组8只:假手术组(Sham),模型组即单侧输尿管结扎组(unilateral ureteral obstruction,UUO),丹酚酸B(Sal B)高、低剂量组(25,6.25 mg·kg^(-1)·d^(-1))。术后第21天,采血,取肾。检测各组小鼠血清肌酐(serum creatinine,Scr)和血清尿素氮(blood urea nitrogen,Bun)的含量;HE和Masson染色光镜下观察肾间质的病理改变;Western Blot技术检测肾组织Col.Ⅰ、α-SMA、E-cad、TGF-β1、β-catenin和p-gsk3β蛋白表达水平。结果与Sham组比较,UUO组小鼠的血Scr、BUN均明显升高(ppp>0.05);Sal B高剂量组小鼠的血Scr、BUN有不同程度的降低,差异具有统计学意义(pppppp-gsk-3β蛋白表达水平均显著下降(ppp<0.01)。结论丹酚酸B可能通过介导Wnt/β-catenin通路的关键组分,来调控Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制UUO所致的小鼠肾间质纤维化。

关键词：丹酚酸B 肾间质纤维化 β-catenin p-gsk3β