检索结果-南通市图书馆

作者：周君大连医科大学

学位级别：硕士

目的：探讨下丘脑有丝分裂原激活蛋白激酶(MApK)信号转导通路在人参皂甙抗急性肾衰和肾保护作用中的介导效应及在此过程中下丘脑胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达及肾小管上皮细胞中胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫反应活性的变化。方法：本工作选用... 详细信息

目的：探讨下丘脑有丝分裂原激活蛋白激酶(MApK)信号转导通路在人参皂甙抗急性肾衰和肾保护作用中的介导效应及在此过程中下丘脑胆碱乙酰转移酶(ChAT)表达及肾小管上皮细胞中胆碱乙酰转移酶(ChAT)免疫反应活性的变化。方法：本工作选用健康雄性SD大鼠,随机分为4组,即ARF+NS组、ARF+GS组、NS+NS组和NS+GS组。采用甘油致急性肾衰的动物模型,通过整体实验观察急性肾衰大鼠口服人参皂甙(12.5mg/ml) 48h后血清尿素氮、肌酐水平和肾皮质匀浆丙二醛、还原型谷胱甘肽的变化及肾组织病理学的改变,同时还通过Western Blot和免疫组化的方法观察下丘脑ChAT免疫反应活性的变化和细胞外信号调节激酶(erk1/2)表达的变化,肾小管上皮细胞中ChAT免疫反应活性的变化。结果：1.急性肾衰大鼠口服生理盐水(2m1)处置48h后,血清尿素氮和肌酐水平显著升高(ppp>0.05)。2.急性肾衰大鼠口服生理盐水处置48h后,肾小管坏死程度严重;经人参皂甙处置48h后,肾小管坏死程度明显减轻。3.急性肾衰大鼠口服生理盐水处置48h后,肾皮质匀浆MDA水平显著升高,GSH水平显著降低(ppppCT)内ChAT免疫反应活性明显增强(ppCT内ChAT免疫反应活性进一步增强,明显高于实验对照组(pppppp-erk1/2的表达明显增加(pp-erk1/2的表达进一步增强,并且会明显高于实验对照组(ppK信号转导通路被激活,下丘脑胆碱能神经元活性增强;同时肾小管上皮细胞中胆碱能系统活动明显增强。肾衰大鼠口服人参皂甙后,可进一步增强上述效应。据此,我们推测下丘脑胆碱能神经元活性的进一步增强及下丘脑MApK信号转导通路进一步激活可能是人参皂甙的肾保护作用的中枢机制之一;而肾小管上皮细胞内胆碱能系统活性的进一步上调可能是人参皂甙肾保护作用的外周机制之一。

关键词：急性肾功能衰竭人参皂甙胆碱乙酰转移酶 p-erk1/2

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莲心碱调控胃癌细胞上皮间质转化的实验研究

莲心碱调控胃癌细胞上皮间质转化的实验研究

作者：蒋寒冰哈尔滨医科大学

学位级别：硕士

背景及目的:胃癌仍然是世界范围内一种重要的癌症。在我国其发生率和死亡率在所有癌症中均居于第三位。虽然目前有包括放化疗、免疫治疗、内镜和手术切除等多种治疗模式,但胃癌患者的五年生存率依旧不能让人满意。探究肿瘤侵袭转移的分... 详细信息

背景及目的:胃癌仍然是世界范围内一种重要的癌症。在我国其发生率和死亡率在所有癌症中均居于第三位。虽然目前有包括放化疗、免疫治疗、内镜和手术切除等多种治疗模式,但胃癌患者的五年生存率依旧不能让人满意。探究肿瘤侵袭转移的分子机制,对于确定进展期胃癌患者临床有效的化疗药物非常关键。因抗癌效果显著、毒副作用小和靶点众多的独特优势,中药单体已成为海内外研究者关注的重点。莲心碱作为传统中药莲子心的有效组分之一,大量研究数据提示其在肿瘤治疗方面拥有着极为巨大的药用潜力。本研究旨在评估莲心碱对胃癌细胞(HGC-27和MGC-803)上皮间质转化的影响、探究其潜在的分子机制,促进天然化合物的临床转化。方法:胃癌细胞(HGC-27和MGC-803)被指定浓度(由实验目的决定)的莲心碱干预;莲心碱治疗后,不同时间点和浓度下的胃癌细胞的存活率和增殖能力被MTT和集落形成实验测定;采用伤口愈合和Transwell实验评估莲心碱干预后胃癌细胞迁移侵袭能力的变化;Western blot法检测不同浓度莲心碱治疗后胃癌细胞中E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、MMp-2/-9、Snail、Slug、AKT、p-AKT、erk1/2和p-erk1/2蛋白的表达水平;免疫荧光对不同浓度莲心碱干预后胃癌细胞中E-cadherin和Vimentin的表达水平进行定性评估。结果:MTT结果显示胃癌细胞(HGC-27和MGC-803)的活力随着莲心碱浓度增加而逐渐降低;集落形成实验提示莲心碱使得胃癌细胞长期增殖的能力显著降低;伤口愈合和Transwell实验显示胃癌细胞的运动能力被莲心碱减弱;Western blot结果发现随着莲心碱浓度增加E-cadherin的表达逐渐上调,而Vimentin、N-cadherin、Snail、Slug、MMp-9、MMp-2的表达下调;随着莲心碱浓度的升高,胃癌细胞中AKT和erk1/2的表达水平几乎没有改变,而p-AKT和p-erk1/2的表达显著减少;免疫荧光染色观察到莲心碱干预后胃癌细胞中的E-cadherin荧光强度增强,而Vimentin荧光强度减弱。结论:本研究表明莲心碱通过调节上皮间质转化而抑制胃癌细胞的侵袭和转移。此外,莲心碱可能通过阻断pI3K/AKT和erk/MApK信号转导途径,使得Vimentin和N-cadherin表达降低,E-cadherin表达升高。这一机制提示,莲心碱可作为一种天然的小分子化疗药物为治疗进展期胃癌提供一个新颖有价值的策略,并有望成为一种优良的AKT和erk1/2抑制剂。

关键词：莲心碱胃癌上皮间质转化 p-erk1/2 p-AKT

农药六氯苯、代森锰锌对pC-12细胞凋亡的影响

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农药六氯苯、代森锰锌对PC-12细胞凋亡的影响

作者：栾春业南京医科大学

学位级别：硕士

目的:探讨环境内分泌干扰物六氯苯对pC-12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用体外细胞培养方法,5 % CO 37℃恒温条件下,将pC-12细胞培养于含10%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养基中。取对数生长期pC-12细胞分别经不同浓度组（0.1、1、10... 详细信息

目的:探讨环境内分泌干扰物六氯苯对pC-12细胞凋亡的影响及其可能机制。方法:采用体外细胞培养方法,5 % CO 37℃恒温条件下,将pC-12细胞培养于含10%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养基中。取对数生长期pC-12细胞分别经不同浓度组（0.1、1、10、20、100、200μmol/L）六氯苯,并设立对照组（DMSO）和只含培养基的空白组,继续培养24小时后,按照CCK-8试剂盒说明书的步骤加入试剂,37度孵育1小时,多功能酶标仪（TECON）检测吸光度值。计算各浓度组细胞增殖凋亡率,数据录入Sigmaplot软件,经Hill方程曲线拟合IC50,为进一步研究建立细胞模型。对数生长期pC-12细胞,72μmol/L六氯苯锌染毒24 h后,应用Hoechst33258核染色结合荧光照相技术检测细胞核形态改变,正常细胞核表现为弥漫均匀的低强度荧光,凋亡细胞核呈浓染致密固缩状态或颗粒状荧光。培养pC-12细胞经不同浓度组（0、1、50、100μmol/L）六氯苯染毒24 h,流式细胞术检测细胞凋亡率,六氯苯浓度依赖性的提高pC-12细胞凋亡率。后收集细胞沉淀提取总蛋白,Western blot检测p-erk1/2、p-pLCγ蛋白表达变化。结果:随着六氯苯浓度增加,凋亡率升高,呈剂量依赖关系;数据录入Sigmaplot软件,经Hill方程曲线拟合,IC为72μmol/L,h系数为1.37。为进一步研究提供细胞凋亡模型;Hoechst33258染色可见细胞核膨大、染色质边集浓染等凋亡特征;Western blot检测结果发现,与对照组相比p-erk1/2及p-pLCγ表达均降低,呈剂量依赖效用。结论:六氯苯能够诱导pC-12细胞凋亡, p-pLCγ及p-erk1/2信号通路可能在此过程中发挥作用。第二部分、代森锰锌对pC-12细胞凋亡的影响目的:探讨环境内分泌干扰物代森锰锌对pC-12细胞凋亡的影响及其机制。方法:采用体外细胞培养方法,5 % CO 37℃恒温条件下,将pC-12细胞培养于含10%灭活胎牛血清的高糖DMEM培养基中。0、1、10、30、60、120μmol/L代森锰锌处理组[1],每组设3组复孔,培养24 h后应用Cell Counting Kit-8 （CCK-8）试剂盒进行代森锰锌对pC-12细胞增殖和毒性分析,实验重复3次;流式细胞术FITC-AnnexinV/pI双染检测细胞凋亡率;Hoechst33258染色及倒置荧光显微镜拍摄细胞平片,观察细胞形态学改变;免疫印记法（Western blot）检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达以及erk蛋白磷酸化水平变化,结果进行积分灰度值分析。结果:随着代森锰锌浓度增加,与对照组相比较,各浓度组晚期凋亡率升高,呈剂量依赖关系,IC为49.95μmol/L,120μmol/L组细胞晚期凋亡率为90.46±3.94%,与对照组相比有统计学差异（p p-erk1/2表达增高, 120μmol/L组相对灰度值分别为128.04±2.51和178.40±4.04。结论:代森锰锌能够诱导pC-12细胞凋亡,erk信号通路可能在此过程中发挥作用。

关键词：环境内分泌干扰物六氯苯 pC-12细胞凋亡 p-erk1/2 p-pLCγ

erk及其磷酸化在晚期前列腺癌组织中的表达及意义

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ERK及其磷酸化在晚期前列腺癌组织中的表达及意义

作者：韩健大连医科大学

学位级别：硕士

目的:前列腺癌在55岁以上的男性人群中的发病率较高,且随着年龄的增长而升高。近年来,前列腺癌的发病率已跃居男性恶性肿瘤第二位,在我国,其发病率也逐年增高,占男性恶性肿瘤第三位,病死率仅次于肺癌。丝裂原活化蛋白激酶(MApK)是细胞... 详细信息

目的:前列腺癌在55岁以上的男性人群中的发病率较高,且随着年龄的增长而升高。近年来,前列腺癌的发病率已跃居男性恶性肿瘤第二位,在我国,其发病率也逐年增高,占男性恶性肿瘤第三位,病死率仅次于肺癌。丝裂原活化蛋白激酶(MApK)是细胞内信号传递途径的共同通道及汇聚点,细胞外信号调节激酶(erk)是其家族成员之一。大量研究表明在恶性肿瘤中均存在erk信号转导通路,该通路在恶性肿瘤中有至关重要的作用,在前列腺癌中也存在着该通路,但目前,国内外对erk信号转导通路在前列腺癌中的研究倾向于肿瘤的分期、分级,对前列腺癌患者的生存预后研究较为缺乏,本次研究不仅对前列腺癌的侵袭力、pSA水平做了研究,而且对前列腺癌患者的生存预后做了相关性分析,为erk信号转导通路影响前列腺癌患者的预后提供了相关的临床数据。本次研究主要探讨细胞外信号调节激酶(erk)及其磷酸化状态(p-erk)在前列腺增生组织和晚期前列腺癌组织中的表达,以及能否作为判断晚期前列腺癌预后的标志物。方法:选取大连医科大学附属第一医院2008年10月到2011年2月具有完整病例资料的晚期前列腺癌组织40例及前列腺增生组织20例,其中晚期前列腺癌组织40例,均为T3/T4/Nx-1Mx期,因尿路梗阻均行经尿道前列腺电切术+双侧睾丸切除术,所有患者术后均行规律内分泌治疗,且排除其他肿瘤病史;前列腺增生组织20例,均因尿路梗阻行经尿道前列腺电切术。患者年龄在58-86岁之间,平均年龄73岁,手术切除组织标本均经10%甲醛固定24小时后,做常规石蜡包埋处理。应用免疫组织化学(Envision)法检测前列腺增生组织(benign prostatic hyperplasia,BpH)及晚期前列腺癌(pCa)组织中erk1/2及其磷酸化状态(p-erk1/2)的表达,并分析其与晚期前列腺癌转移(侵袭力)、Gleason评分、pSA水平以及生存时间的关系。结果:(1)erk1/2的表达:在前列腺增生组织中阳性表达率为55.0%,在晚期前列腺癌组织中阳性表达率为82.5%,具有显著性差异(p2%、80.9%,无显著性差异(p>0.05);在Gleason评分>7分与Gleason评分≤7分中的阳性表达率分别为91.3%、70.6%,无显著性差异(p>0.05);在pSA>20ng/ml与pSA≤20ng/ml中的阳性表达率分别为87.5%、62.5%,无显著性差异(p>0.05);在生存时间>5年与生存时间≤ 5年中的阳性表达率分别为84.2%、80.9%,无显著性差异(p>0.05);(2)p-erk1/2的表达:前列腺增生组织中阳性表达率为35.0%,晚期前列腺癌组织中阳性表达率为75.0%,有显著性差异(p7分与Gleason评分≤7分中的阳性表达率分别为73.9%、76.5%,无显著性差异(p>0.05);在pSA>20ng/ml与pSA≤20ng/ml中的阳性表达率分别为78.1%、62.5%,无显著性差异(p>0.05);在晚期前列腺癌转移组和未转移组中阳性表达率分别为:61.9%、89.5%,有显著性差异(p5年与生存时间≤5年组中阳性表达率分别为:57.9%、90.5%,有显著性差异(perk1/2、p-erk1/2在晚期前列腺癌组织中高表达,erk1/2磷酸化与晚期前列腺癌侵袭力(转移)及预后有关。

关键词：晚期前列腺癌 erk1/2 p-erk1/2 磷酸化预后

IGF-1对全脑缺血大鼠认知障碍及MEK/erk信号通路作用机制的研究

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IGF-1对全脑缺血大鼠认知障碍及MEK/ERK信号通路作用机制的研究

作者：张蓉川北医学院

学位级别：硕士

目的:观察全脑缺血大鼠认知功能、海马CA1区组织形态学和p-MEK1、p-erk1/2蛋白表达的变化,探讨IGF-1能否通过调控MEK/erk信号通路的表达来影响全脑缺血大鼠的空间学习记忆能力,为临床改善认知功能障碍提供依据。方法:(1)采用完全随机方... 详细信息

目的:观察全脑缺血大鼠认知功能、海马CA1区组织形态学和p-MEK1、p-erk1/2蛋白表达的变化,探讨IGF-1能否通过调控MEK/erk信号通路的表达来影响全脑缺血大鼠的空间学习记忆能力,为临床改善认知功能障碍提供依据。方法:(1)采用完全随机方法将Wistar大鼠分为正常组(NC组)、假手术组(SO组)、模型对照组(MC组)、模型+IGF-1组(MC+IGF-1组)、模型+IGF-1+ppp组(MC+IGF-1+ppp组)。(2)除NC组外均给予侧脑室置管,置管6天后,采用改良pulsinelli四血管阻断法(4-VO)建立全脑缺血大鼠模型。(3)4-VO术后根据分组给予不同的药物干预。NC组不予干预,SO组、MC组、MC+IGF-1组腹腔注射1ml DMSO(ppp溶媒),MC+IGF-1+ppp组腹腔注射ppp1ml(2mg/kg)。30min后,SO组、MC组侧脑室注射生理盐水(NS)10μl,MC+IGF-1组、MC+IGF-1+ppp组侧脑室注射IGF-1 10μl(0.2μg/μl)。每天1次,连续注射7天。(4)侧脑室置管术前及药物干预7天后行Morris水迷宫检测大鼠的空间学习记忆能力。(5)HE染色观察海马CA1区组织形态学改变,免疫组化和Western blot检测海马p-MEK1、p-erk1/2蛋白表达水平。结果:1)侧脑室置管大鼠100只,置管后大鼠总存活率:87.00%(87/100);四血管阻断法手术大鼠78只,模型成功并存活率为41.03%(32/78)。2)morris水迷宫结果:术前各组大鼠基础游泳速度差别无统计学意义(p>0.05)。药物干预后,mc组、mc+igf-1组、mc+igf-1+ppp组平均逃避潜伏期较nc组延长,差别有统计学意义(ppppp组与mc组平均逃避潜伏期差别无统计学意义(p>0.05),mc+igf-1组平均逃避潜伏期较mc+igf-1+ppp组短,差别有统计学意义(pppp组跨越平台次数较nc组减少,原平台象限游泳时间缩短,差别有统计学意义(ppppp组与mc组原平台象限游泳时间和跨越平台次数差别无统计学意义(p>0.05),mc+igf-1+ppp组较mc+igf-1组跨越平台次数减少,原平台象限游泳时间缩短,差别有统计学意义(pppp组海马ca1区细胞变性坏死程度与mc组相当。4)免疫组化结果:药物干预后,mc组、mc+igf-1组、mc+igf-1+ppp组大鼠海马ca1区p-mek1、p-erk1/2阳性细胞表达较nc组减少,差异有统计学意义(pp-mek1、p-erk1/2阳性细胞较mc组表达增多,差异有统计学意义(pp-mek1、p-erk1/2阳性细胞较MC+IGF-1+ppp组表达增多,差异有统计学意义(pppp组与MC组大鼠海马CA1区p-MEK1、p-erk1/2阳性细胞表达差异无统计学意义(p>0.05)。5)Western blot结果:药物干预后,MC组、MC+IGF-1组、MC+IGF-1+ppp组大鼠海马p-MEK1、p-erk1/2与GApDH蛋白灰度比值均小于NC组,差异有统计学意义(pp-MEK1、p-erk1/2与GApDH蛋白灰度比值大于MC组,差异有统计学意义(pp-MEK1、p-erk1/2与GApDH蛋白灰度比值大于MC+IGF-1+ppp组,差异有统计学意义(pppp组海马p-MEK1、p-erk1/2与GADpH蛋白灰度比值与MC组相比差异无统计学意义(p>0.05)。结论:大鼠海马p-MEK1、p-erk1/2蛋白表达减少可能是全脑缺血大鼠认知障碍发生的机制之一;IGF-1能够改善全脑缺血大鼠的空间学习记忆能力;IGF-1改善全脑缺血大鼠空间学习记忆能力可能与激活MEK/erk信号通路,提高海马p-MEK1、p-erk1/2

关键词：全脑缺血认知障碍 p-MEK1 p-erk1/2 IGF-1

索拉菲尼诱导的肝癌细胞耐药和上皮间质转化与pI3k/Akt信号通路激活有关

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索拉菲尼诱导的肝癌细胞耐药和上皮间质转化与PI3k/Akt信号通路激...

作者：王清清泰山医学院

学位级别：硕士

研究背景肝细胞癌是全球范围内常见的癌症,死亡率高。在北美几乎每100000个人中有10个肝癌患者,在西欧、亚洲和非洲地区,甚至达到了每100000个人中有50到150个肝癌患者。肝脏是是富血管的肿瘤,易发生耐药。多药耐药的产生是阻碍化疗药... 详细信息

研究背景肝细胞癌是全球范围内常见的癌症,死亡率高。在北美几乎每100000个人中有10个肝癌患者,在西欧、亚洲和非洲地区,甚至达到了每100000个人中有50到150个肝癌患者。肝脏是是富血管的肿瘤,易发生耐药。多药耐药的产生是阻碍化疗药物疗效的绊脚石。只有深入了解肝癌耐药的分子生物机制,找出耐药靶点,才能有效逆转耐药,从根本上改善肝癌的疗效。实验目的1.建立人肝癌索拉菲尼耐药细胞株模型,鉴定其耐药性,并研究耐药细胞的分子生物学特点。2.联合应用索拉菲尼和pI3k抑制剂LY294002后,检测耐药细胞的耐药性改变,探索耐药细胞耐药性和pI3k/Akt信号通路的关系。3.应用索拉菲尼pI3k抑制剂LY294002后,探索耐药细胞的转移和迁移能力的改变与pI3k/Akt信号通路的关系。实验方法1.索拉菲尼对HepG2、Huh7和MHCH97H等三株人肝癌细胞进行长期持续诱导;显微镜观察诱导过程细胞的形态学改变;CCK-8毒性实验进行药敏实验。基因芯片检测肝癌耐药细胞和亲本细胞的LncRNA和mRNA的表达差异。2.荧光定量pCR检测耐药相关基因ABCB1、ABCB1和ABCG2,间质标记基因Snail和Slug在耐药组和亲本组的表达差异;3.蛋白免疫印迹法检测上皮标记蛋白(E-cadherin),间质标记蛋白(Snail、Slug、N-cadherin、Vimenti)在耐药组和亲本组的表达差异,pI3k/Akt信号通路中的pI3k、p-Akt、Akt和pTEN,MApK信号通路中的erk信号通路中的p-erk1/2和erk1/2在耐药细胞和亲本细胞的差异;***侵袭实验检测人肝癌耐药细胞的迁移、侵袭能力改变;5.蛋白免疫印迹法和Transwell侵袭实验检测肝癌耐药细胞加入LY294002后信号通路、耐药蛋白、EMT标记蛋白、迁移能力和侵袭能力的变化。6.建立裸鼠尾静脉转移模型,观察其肺和肝脏成瘤情况,研究亲本细胞和耐药细胞的转移能力的差别。实验结果1.索拉菲尼长期诱导人产生人肝癌细胞耐药性,诱导耐药相关基因和蛋白的产生,细胞毒性实验显示肝癌耐药细胞的药物敏感性低于亲本细胞。2.人肝癌细胞在长期索拉菲尼诱导下形态学发生上皮间质转化,同时人肝癌耐药细胞的上皮标记蛋白表达量降低,间质标记蛋白表达增加;体内外实验说明人肝癌耐药细胞比亲本细胞具有更强的迁移和侵袭能力。3.人肝癌索拉菲尼耐药细胞pI3k/Akt信号通路和erk信号通路中的不同基因和蛋白表达量有不同比例增加,其中pI3k、p-Akt和p-erk1/2明显增强,pTEN表达明显下降。4.用pI3k抑制剂LY294002后,肝癌索拉菲尼耐药细胞的药物敏感性明显增加。同时,肝癌耐药细胞的转移和侵袭能力明显下降。实验结论1.体外成功诱导人肝癌索拉菲尼耐药细胞株(HepG2R、Huh7R、MHCC-97H-R),肝癌细胞耐药性的产生可能与pI3k/Akt信号通路激活有关。2.人肝癌索拉菲尼耐药细胞发生上皮间质转化,增强了细胞的迁移和侵袭能力可能与pI3k/Akt信号通路的激活有关。3.长期索拉菲尼诱导后人肝癌细胞的LncRNA和mRNA表达差异明显。

关键词：肝癌索拉菲尼耐药 p-Akt p-erk1/2 上皮间质转化基因芯片

慢性间歇性缺氧对孕鼠子代鼠动脉粥样硬化病变及Caveolin-1的影响

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慢性间歇性缺氧对孕鼠子代鼠动脉粥样硬化病变及Caveolin-1的影响

作者：林辉煌福建医科大学

学位级别：硕士

目的通过建立孕鼠及子代鼠的慢性间歇性缺氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）模型，探讨CIH对子代鼠动脉粥样硬化病变所造成的影响及其中所涉及的可能的机制。方法SD孕鼠16只，于孕第7天随机分为常氧组和CIH两大组。待分娩后，每... 详细信息

目的通过建立孕鼠及子代鼠的慢性间歇性缺氧（chronic intermittent hypoxia,CIH）模型，探讨CIH对子代鼠动脉粥样硬化病变所造成的影响及其中所涉及的可能的机制。方法SD孕鼠16只，于孕第7天随机分为常氧组和CIH两大组。待分娩后，每只孕鼠的子代中随机抽取2只雄性仔鼠喂养至4周龄，根据母代是否经历CIH,这些子代同样被分为常氧组和CIH两大组，每大组子代鼠再进一步随机分为常氧组和CIH组，最终得到以下4个组别，每组8只：(1)宫内常氧+子代常氧组（即对照组）;（2）宫内常氧+子代CIH组;（3）宫内CIH+子代常氧;（4）宫内CIH+子代CIH组。子代CIH组再次进行间歇性缺氧，持续12周。CIH结束后取子代鼠胸腹主动脉标本，制做病理切片, HE染色光学显微镜下观察血管标本病理形态，对比各组动脉内膜、中膜厚度。然后用western-blot法测定子代鼠动脉核转录因子（nuclear factor-κBp65， NF-κBp65）、小窝蛋白-1（Caveolin-1）、细胞外信号调节激酶1/2（extracellular signal-regulated kinase1/2，erk1/2）磷酸化细胞外信号调节激酶1/2（phosphorylated extracellularsignal-regulated kinase1/2,p-erk1/2）蛋白表达水平。结果（1）CIH可引起子代大鼠动脉内膜增厚：宫内CIH+子代常氧组（3.800±0.543μm）、宫内CIH+子代CIH组（6.440±0.977μm）、宫内常氧+子代CIH组（5.692±0.708μm）与对照组（1.555±0.259μm）相比，差异有统计学意义（p＜0.001）。而CIH对中膜的改变无统计学意义（p=0.974）。（2）CIH可以促进子代大鼠NF-κBp65蛋白表达增加：宫内CIH+子代常氧组（0.020±0.002）、宫内CIH+子代CIH组（0.024±0.002）、宫内常氧+子代CIH组（0.022±0.001）与对照组（0.013±0.001）相比，差异有统计学意义（p＜0.001）。（3）CIH可以促进子代大鼠Caveolin-1蛋白表达增加：宫内CIH+子代常氧组（0.348±0.027）、宫内CIH+子代CIH组（0.380±0.027）、宫内常氧+子代CIH组（0.361±0.037）与对照组（0.230±0.014）相比，差异有统计学意义（p＜0.01）。（4）CIH对子代大鼠erk1/2蛋白的表达改变无统计学差异（p=0.998），而使得p-erk1/2蛋白表达减少：宫内CIH+子代常氧组（1.530±0.272）、宫内CIH+子代CIH组（0.802±0.135）、宫内常氧+子代CIH组（1.260±0.208）与对照组（2.303±0.176）相比，差异有统计学意义（p＜0.01）。(5)宫内CIH与子代CIH能协同加重上述各观察指标变化(p＜0.001或p＜0.05)。（6）各组NF-κBp65与Caveolin-1蛋白相对表达量存在正相关关系（r=0.848，p＜0.001）。各组Caveolin-1与p-erk1/2蛋白相对表达量存在负相关关系（r=0.-810，p＜0.001）。各组NF-κBp65蛋白相对表达量与动脉内膜厚度存在正相关关系（r=0.880，p＜0.001）。各组Caveolin-1蛋白相对表达量与动脉内膜厚度存在正相关关系（r=0.811，p＜0.001）。各组p-erk1/2蛋白相对表达量与动脉内膜厚度存在负相关关系（r=-0.877，p＜0.001）。结论1、宫内CIH可以诱发子代鼠出现动脉粥样硬化早期病变;2、子代CIH可加重经历宫内CIH所诱导的动脉硬化的严重程度，两者具有协同作用。3、NF-κBp65/Caveolin-1/p-erk1/2信号通路可能是CIH所诱导的动脉粥样硬化中的重要机制之一。

关键词：睡眠呼吸暂停综合征慢性间歇性缺氧动脉粥样硬化孕鼠 NF-κBp65 Caveolin-1 erk1/2 p-erk1/2

Intelectin在支气管哮喘气道炎症中作用的研究

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Intelectin在支气管哮喘气道炎症中作用的研究

作者：康冠楠华中科技大学

学位级别：硕士

哮喘是一种以气道慢性非特异性炎症为本质的常见疾病,具有气道黏液过度分泌、气道高反应性(AHR)、血清IgE增高和气道嗜酸性粒细胞浸润等特征。而现在越来越多的研究证实,不同的趋化因子在哮喘发生的不同阶段发挥着特异性的作用。趋化因... 详细信息

哮喘是一种以气道慢性非特异性炎症为本质的常见疾病,具有气道黏液过度分泌、气道高反应性(AHR)、血清IgE增高和气道嗜酸性粒细胞浸润等特征。而现在越来越多的研究证实,不同的趋化因子在哮喘发生的不同阶段发挥着特异性的作用。趋化因子家族控制着白细胞的迁移和激活。根据序列同源性和第一组两个半胱氨酸残基的位置,趋化因子主要分为CC和CXC两大家族[1],哮喘气道中趋化因子主要来源于肺泡巨噬细胞和哮喘气道上皮细胞。哮喘时嗜酸性粒细胞的浸润使得研究主要关注于对其有趋化作用的趋化因子上,例如RANTES/CCL5 ,MCp-4/CCL13, MCp-3/CCL7。而这些趋化因子通过与在嗜酸性粒细胞中高表达的CCR3受体结合而募集嗜酸性粒细胞[2,3]。除了趋化和激活嗜酸性粒细胞外,这些趋化因子还能够影响其他的与哮喘相关的白细胞,例如TH2细胞,嗜碱性粒细胞等。最近研究表明在哮喘持续期的患者的肺泡灌洗液(BALF)中MCp-1,CCL3和CCL5显著升高[4]。我们前期的研究也发现在卵清蛋白(OVA)激发的小鼠哮喘模型的肺组织中MCp-1和MCp-3的转录高峰在第4小时,且在第8和24小时持续升高。 Intelectin属于凝集素家族,分为Intelectin1和Intelectin2,均是在小鼠小肠的paneth细胞中发现,Intelectin1和Intelectin2具有91%的同源性。人类Intelectin (hIntL)是一种分泌型糖蛋白,包含295个氨基酸及N-端连接低聚糖,其基本结构单位是120kDa的三聚体,其中40kDa多肽由二硫键连接,并且也分为Intelectin1和Intelectin2。研究表明重组的hIntL在Ca存在时可以结合D-戊糖和D-呋喃半乳糖残基,并且可以识别诺卡氏细菌表面的呋喃半乳糖,这表明hIntL是一种新型的能识别呋喃半乳糖的凝集素,并在识别宿主的细菌时有一定的作用[5]。最近有研究发现在哮喘患者支气管刷片和肺泡灌洗液中Intelectin表达增加。在以粘液过度分泌和气道高反应性为共同表型的Tg-IL-13、IL-13/Epi和OVA小鼠肺组织中Intelectin表达水平均显著增高,进一步说明Intelectin可能是与哮喘发生相关的基因[13]。我们的前期研究也发现Intelectin1和Intelectin2的表达在小鼠的肺被OVA激发改变后是上调的,且Intelectin基因表达于小鼠过敏性哮喘模型的气道粘液细胞。Th2细胞分泌的细胞因子,IL-13是变应性气道疾病中重要的炎症因子[15,16]。由于Intelectin和其他趋化因子是气道上皮细胞产生的,我们用MLE12细胞,即小鼠的肺上皮细胞去检测Intelectin在IL-13诱导趋化因子表达中发挥的作用。我们发现IL-13增加了MCp-1和MCp-3在MLE12细胞中的表达。IL-13也刺激了Intelectin1和2在MLE12细胞中的表达。此外我们还用了Intelectin shRNA和一种Intelectin的抑制剂-半乳糖,我们发现IL-13诱导MCp-1和MCp-3不论是在mRNA水平还是蛋白水平的表达都需要Intelectin基因。据我们所知,这是第一次研究发现,Intelectin介导IL-13诱导MCp-1和MCp-3上调,但就其具体机制尚不清楚。为此本课题应用RNA干扰技术下调Intelectin1和2在OVA诱发的哮喘小鼠气道中的表达水平,观察哮喘炎症的变化及炎症介质MCp-1和MCp-3的变化,并用IL-13刺激MLE12细胞,进一步研究Intelectin是否介导IL- 13诱导MCp-1和MCp-3上调的信号通路以及是何种信号通路,旨在为治疗哮喘提供新的思路。本试验主要分为两个部分: 第一部分Intelectin在哮喘小鼠气道炎症及炎症介质MCp-1和MCp-3表达中的作用目的:观察Intelectin在哮喘小鼠气道炎症及炎症介质MCp-1和MCp-3表达中的作用方法:实验分为三组(1)正常小鼠+阴性对照质粒组,(2)哮喘小鼠+阴性对照质粒组,(3)哮喘小鼠+Intelectin shRNA组。通过滴鼻的方法法将转染试剂和质粒分别滴入各组小鼠鼻内。Real time pCR检测各组Intelectin1,2及MCp-1和MCp-3 mRNA水平的表达情况。免疫组化法检测Intelectin在肺组织中的表达。对各组小鼠肺组织气道进行炎症分数评分,及对各组小鼠肺泡灌洗液中的细胞进行分类计数以观察小鼠肺组织炎症的变化。结果:Intelectin1,2, OVA + shRNA组较OVA组分别降低72%和59%, p p-1, MCp-3, OVA + shRNA组较OVA组明显降低, p

关键词：哮喘 Intelectin1,2 shRNA MCp-1 MCp-3 Intelectin pD98059 MLE12细胞 erk1/2 p-erk1/2

氧化苦参碱对青霉素致痫大鼠海马组织erk信号转导通路的研究

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氧化苦参碱对青霉素致痫大鼠海马组织ERK信号转导通路的研究

作者：赵衍宁夏医科大学

学位级别：硕士

目的研究氧化苦参碱(Oxymatrine,OXY)对青霉素(penicillin,pEN)致痫大鼠海马组织丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MApK)信号转导通路中的主要成员细胞外信号调节蛋白激酶erk1/2(extracellular signal-regulated kinase1/2)通路的活化形式—磷酸化erk1/2(p-erk1/2)和N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚型NR2B表达的变化规律及其意义。分析在此途径中大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)含量变化,旨在探讨OXY抗癫痫作用的可能机制。方法***大鼠随机分为生理盐水对照组(NS)、青霉素致痫组(pEN)、苯巴比妥钠阳性药物对照组(pBS)、氧化苦参碱组(OXY)。2.采用HE染色法观察海马神经元病理学改变;应用免疫组化法检测各组大鼠致痫1h、2h、4h、6h和8h各时间点海马组织内p-erk1/2和NR2B免疫阳性神经元数量的变化;应用Western blot法进一步检测各组大鼠海马各时间点两种蛋白表达;应用放射免疫分析法测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)和白介素-8(IL-8)的含量变化。结果1.海马神经元病理学改变。光镜观察各组大鼠各时间点海马神经元HE染色标本:NS组大鼠海马神经元呈圆形或椭圆形,细胞膜、细胞核结构完整。pEN组大鼠海马神经元损伤最严重,损伤区表现为细胞核固缩,核仁不明显,胞浆浓缩深染,神经元发生不同程度的变性坏死。pBS组大鼠海马可见散在神经元损伤,损伤程度较pEN组轻。OXY组大鼠海马神经元可见少部分变性或坏死的细胞,损伤程度较pEN组轻。2.磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-erk1/2)及NR2B免疫组化染色结果。NS组大鼠海马各区p-erk1/2仅在胞浆内表达弱阳性,有少量的NR2B表达;pEN致痫1h后p-erk1/2表达迅速增强,在神经元的胞核、胞浆内都有表达,NR2B阳性神经元与NS组比较数量明显增多(p﹤0.05)。在pEN致痫2 h p-erk1/2阳性细胞数量达到最高值,4h阳性神经元数量回降,6-8h继续回降,但仍高于NS组;在pEN致痫6h NR2B阳性细胞数量达到最高值,8.0hNR2B阳性神经元数量有所回降,但仍高于NS组;pBS组p-erk1/2和NR2B阳性细胞数量明显低于pEN组相应时间点(p﹤0.05);OXY组p-erk1/2和NR2B阳性细胞数量明显低于pEN组相应时间点(p﹤0.05);OXY组与pBS组比较,差异无统计学意义。3.磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(p-erk1/2)和NR2B Western blot结果。经光密度定量分析显示:NS组大鼠海马表达p-erk1/2蛋白很少,而pEN致痫1h p-erk1/2蛋白含量开始升高,2h蛋白含量达到最高值,4h逐渐回降,p-erk1/2表达趋势与免疫组化结果一致。pEN组与NS组相应时间点比较p-erk1/2蛋白含量显著增高(p﹤0.05);pBS组p-erk1/2蛋白含量明显低于pEN组和OXY组;OXY组p-erk1/2蛋白含量明显低于pEN组。pEN致痫1hNR2B蛋白含量升高,6h蛋白含量达到最高值,8h逐渐回降,NR2B表达趋势与免疫组化染色结果一致。pEN组与NS组相应时间点比较NR2B蛋白含量显著增高(p﹤0.05);pBS组相应时间点NR2B蛋白含量明显低于pEN组;OXY组相应时间点NR2B蛋白含量明显低于pEN组。OXY组与pBS组相应时间点比较,差异无统计学意义。4.各组大鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)、白介素-6(IL-6)、白介素-8(IL-8)含量变化。OXY组与pEN组相应时间点比较,大鼠血清中TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8含量明显降低且有显著性差异(p﹤0.05);与pBS组相比,无显著性差异。结论***可以延长pEN致痫大鼠癫痫发作潜伏期与发作程度,可以改善神经细胞的痫性损害程度。***致痫可激活大鼠海马细胞内erk通路,该通路可能参与了癫痫发作后大鼠海马组织的痫性损害。而OXY可减少erk活化使NR2B表达下降,从而发挥抗癫痫作用。***可降低pEN致痫大鼠血清中细胞因子TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8的含量,说明OXY抗癫痫作用机制可能与某些细胞因子相关。

关键词：氧化苦参碱癫痫 p-erk1/2 NR2B 细胞因子

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瓜蒌—薤白对慢性心肌缺血保护作用的研究

瓜蒌—薤白对慢性心肌缺血保护作用的研究

作者：严标文湖北中医药大学

学位级别：硕士

目的：通过制造异丙肾上腺素（ISO）慢性心肌缺血（chronic myocardialischemia）大鼠模型，研究瓜蒌、薤白、瓜蒌-薤白单方、复方对慢性心肌缺血的药效学作用，以及其对心肌缺血保护作用的作用机制。为瓜蒌-薤白的临床应用提供理... 详细信息

目的：通过制造异丙肾上腺素（ISO）慢性心肌缺血（chronic myocardialischemia）大鼠模型，研究瓜蒌、薤白、瓜蒌-薤白单方、复方对慢性心肌缺血的药效学作用，以及其对心肌缺血保护作用的作用机制。为瓜蒌-薤白的临床应用提供理论依据。方法：采用连续6天腹腔注射异丙肾上腺素制造大鼠心肌缺血模型，灌胃（瓜蒌：25g/kg;薤白：12.5g/kg;瓜蒌-薤白：37.5g/kg）2周。并设立正常组、模型组、阳性对照组。记录造模前、造模后、给药后的心电图，观察心电图ST段变化。给药两周后，大鼠断头取血，测血清中乳酸脱氢酶（LDH），肌酸激酶（CK），肌酸激酶同工酶（CK-MB）水平。取各组动物的心脏组织，进行HE染色，电镜切片观察组织病理变化。取各组心肌组织，采用western blotting法观测瓜蒌-薤白对有丝分裂原活化蛋白激酶（MApKs）家族3个主要信号分子c-Jun氨基端激酶（JNK）、细胞外信号调节激酶（erk1/2）、p38磷酸化水平的影响。结果：（1）造模后，ST段均有不同程度的抬高，与正常组比较，p＜0.01,有显著性差异。给药后，给药组ST段电压有所降低，与模型组比较，有显著性差异。（2）造模后，模型组的LDH、CK、CK-MB均显著性提高，瓜蒌、薤白、瓜蒌-薤白煎液能降低血清中的CK-MB、LDH、CK含量，瓜蒌-薤白煎液降幅最大（p＜0.01）。瓜蒌煎液能扩张冠状动脉，薤白煎液有效成分有抗氧化作用，能有效降低血清中的CK-MB、LDH、CK含量。（3）光镜和电镜下观察心肌组织的细胞结构，给药组能够有效改善缺血模型造成的心肌纤维紊乱、细胞空泡、炎细胞浸润、灶性坏死、细胞器肿胀、线粒体水肿、闰盘扭曲。（4）缺血心肌组织p-p38、p-JNK,p-erk1/2MApK蛋白水平显著上升，给药组与模型组比较，p-p38、p-JNK、p-erk1/2水平显著降低。结论：瓜蒌-薤白对慢性心肌缺血有保护作用。该药能降低心电图ST段抬高，能明显降低大鼠血清中CK、CK-MB、LDH的含量，有效减轻心肌组织间水肿，改善肌纤维排列紊乱，减轻心肌细胞线粒体肿胀和闰盘扭曲程度。瓜蒌-薤白，各部分指标改善均优于瓜蒌、薤白单用。其作用机制可能是通过清除氧自由基、减轻氧化反应而抑制p38、JNK、erk1/2蛋白磷酸化以减轻缺血损伤，对心肌产生保护作用。

关键词：瓜蒌薤白慢性心肌缺血 ISO造模 p38 p-JNK p-erk1/2