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甲型流感病毒核蛋白基因的克隆表达及纯化

中华实验和临床病毒学杂志 2005年第2期19卷 165-168页

作者：房师松程小雯刘涛刘建军赵树进周丽华南理工大学食品与生物工程学院广州现在510642 深圳市疾病预防控制中心微生物检验科广州军区广州总医院药学部

目的　将甲型流感病毒核蛋白(Np)基因克隆到原核表达载体进行可溶性融合表达,制备纯化的病毒核蛋白,为制备甲型流感病毒单克隆抗体提供材料。方法　提取甲型流感病毒RNA ,设计引物,RT pCR扩增Np基因,利用基因工程的手段,将甲型流感病毒... 详细信息

目的　将甲型流感病毒核蛋白(Np)基因克隆到原核表达载体进行可溶性融合表达,制备纯化的病毒核蛋白,为制备甲型流感病毒单克隆抗体提供材料。方法　提取甲型流感病毒RNA ,设计引物,RT pCR扩增Np基因,利用基因工程的手段,将甲型流感病毒的Np基因在大肠埃希菌中进行融合表达,并将表达产物进行亲和层析。结果　成功构建了甲型流感病毒Np基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。结论　通过合理控制发酵时间、生长温度和诱导物浓度,制备了较为理想的可溶性甲型流感病毒核蛋白。

关键词：甲型流感病毒核蛋白基因纯化表达及 RT-pCR扩增基因原核表达载体融合表达亲和层析表达产物单克隆抗体病毒RNA 大肠埃希菌基因克隆设计引物基因工程发酵时间合理控制可溶性 p基因制备高纯度诱导物

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眼皮肤白化病Ⅱ型产前基因诊断二例

中华医学遗传学杂志 2014年第4期31卷 424-427页

作者：胡浩王华贾政军谢琼湖南省妇幼保健院遗传优生科长沙410008

目的对生育过眼皮肤白化病（oculocutaneous albinism，OCA）息儿的2个家系进行基因诊断分型，并在此基础上提供产前基因诊断。方法采用pCR扩增先证者OCAl型疾病相关TYR基因的所有5个编码外显子和OCA2型疾病相关p基因的所有23个编码外... 详细信息

目的对生育过眼皮肤白化病（oculocutaneous albinism，OCA）息儿的2个家系进行基因诊断分型，并在此基础上提供产前基因诊断。方法采用pCR扩增先证者OCAl型疾病相关TYR基因的所有5个编码外显子和OCA2型疾病相关p基因的所有23个编码外显子，pCR产物直接测序，在确定致病突变的基础上对家系成员进行综合分析。结果两例OCA先证者均未检测到TYR基因的致病突变，但均携带p基因的复合杂合突变，因此确定2例均为OCA2型患者。p基因共检测到4种突变：C．406C〉T、c．535A〉G、c．808-2A〉G和c．2180T〉C，其中c．535A〉G和c．808-2A〉G为新突变。2个家系的第1次产前诊断均提示胎儿基因型与先证者一致，家属选择终止妊娠。第2次产前基因诊断，2个家系中1例胎儿为p基因c．808-2A〉G携带者，另1例为p基因野生型携带者。两名孕妇均继续妊娠至足月分娩，新生儿随访均正常。结论应用基因检测可为眼皮肤白化病患者提供确切的临床分型，并在此基础上提供有效的产前基因诊断。

关键词：白化病2型 p基因测序突变产前基因诊断

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河南省8株狂犬病毒磷蛋白基质蛋白基因分析

中国人兽共患病学报 2008年第9期24卷 859-863,867页

作者：熊成龙邵中军魏纪东居丽雯周联娣姜庆五复旦大学公共卫生学院流行病学教研室公共卫生安全教育部重点实验室上海200032 第四军医大学预防医学系流行病学教研室新乡医学院微生物学教研室

目的分析河南省8株狂犬病毒磷蛋白p及基质蛋白M的基因序列,探讨狂犬病毒流行株毒力与致病性变异的可能原因。方法以免疫荧光法检测2006年采自河南省的121份犬脑,取阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒,以RT-nest-edpCR法扩增病毒p与M基因... 详细信息

目的分析河南省8株狂犬病毒磷蛋白p及基质蛋白M的基因序列,探讨狂犬病毒流行株毒力与致病性变异的可能原因。方法以免疫荧光法检测2006年采自河南省的121份犬脑,取阳性犬脑组织悬液接种鼠脑分离病毒,以RT-nest-edpCR法扩增病毒p与M基因,克隆测序后进行生物信息学分析。结果分离到8株狂犬病毒,序列分析表明8株病毒均为基因1型狂犬病毒,8株病毒彼此之间p基因与M基因核苷酸序列同源性均为98.9%～99.8%,推导的氨基酸序列同源性分别为98.0%～99.3%和97.0%～99.5%。8株病毒与我国宁夏分离株CNX8511、CNX8601的同源性最高,p基因与M基因核苷酸同源性分别为89.1%～89.7%和91.1%～92.0%,氨基酸同源性分别为93.3%～94.3%和96.6%～98.0%。在核苷酸及氨基酸水平上,8株病毒与CTN疫苗株的p与M同源性均明显高于与其它疫苗株的相应同源性。系统发育分析表明,8株病毒与我国宁夏街毒株、CTN疫苗株、泰国及菲律宾等东南亚株进化关系最近,而与CTN以外的其它疫苗株、标准攻击毒CVS株,以及我国80年代初分离的DRV、MRV株进化关系较远。氨基酸对位分析表明,较之参比的其它基因1型毒株,河南省8株狂犬病毒的p与M出现多处变异。结论8株狂犬病毒仍属基因1型狂犬病毒,但其p基因及M基因在核苷酸及推导的氨基酸水平上均出现了明显变异。

关键词：狂犬病毒 p基因 M基因遗传特征

白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶基因在急性念珠菌性外阴阴道炎中的表达

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中华皮肤科杂志 2005年第4期38卷 235-237页

作者：冯静涂亚庭林能兴冯爱平华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科

目的了解白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)基因在人类阴道白念珠菌感染时的表达情况。方法收集9例阴道念珠菌检测阴性及20例阴道念珠菌感染者的阴道分泌物,通过用特异引物系列进行RT-pCR反应来评价Sap1￣Sap6在人体阴道环境中的表达... 详细信息

目的了解白念珠菌分泌型天冬氨酸蛋白酶(Sap)基因在人类阴道白念珠菌感染时的表达情况。方法收集9例阴道念珠菌检测阴性及20例阴道念珠菌感染者的阴道分泌物,通过用特异引物系列进行RT-pCR反应来评价Sap1￣Sap6在人体阴道环境中的表达情况。结果Sap2和Sap5在阴道白念珠菌感染者中是最主要的表达基因;Sap3和Sap4在所有检查者中均被检测到;所有6种Sap基因在某些阴道念珠菌病患者中同时被检出。结论Sap基因可能与阴道念珠菌病的发病机制有关。

关键词：念珠菌性外阴阴道炎蛋白酶基因分泌型天冬氨酸蛋白酶阴道念珠菌病急性白念珠菌感染阴道白念珠菌表达情况阴道分泌物 pCR反应表达基因阴道环境特异引物发病机制感染者 p基因 RT- 检查者检测 Sa

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黑素瘤抑制性活性蛋白在恶性黑素瘤中的表达

中华皮肤科杂志 2007年第10期40卷 644-645页

作者：钱悦梁少姗陈思远冯爱平涂亚庭华中科技大学同济医学院附属协和医院皮肤科武汉430022

黑素瘤抑制性活性蛋白（MIA）是近年来在研究黑素瘤细胞株HTZ19时分离的抑制黑素瘤细胞增殖的因子，其基因与在软骨细胞内发现的CD—RAp基因相同。在对转基因小鼠的研究中观察到，MIA主要在胚胎的软骨细胞内表达．在乳腺胚胎发育过程中... 详细信息

黑素瘤抑制性活性蛋白（MIA）是近年来在研究黑素瘤细胞株HTZ19时分离的抑制黑素瘤细胞增殖的因子，其基因与在软骨细胞内发现的CD—RAp基因相同。在对转基因小鼠的研究中观察到，MIA主要在胚胎的软骨细胞内表达．在乳腺胚胎发育过程中也有该基因的短暂表达，乳腺发育成熟后即消失，并且发现MIA在部分乳腺癌及胰腺癌、胃癌中有一定表达。

关键词：恶性黑素瘤活性蛋白抑制性胚胎发育过程细胞内表达乳腺发育转基因小鼠 p基因

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乙型肝炎病毒基因片段体外转录产物的研究

病毒学报 1993年第2期9卷 109-113页

作者：于文琦祖和中国医学科学院基础医学研究所北京100730

自adr亚型乙型肝炎病毒DNA重组质粒中获得两个DNA片段,用体外转录方法研究启动子的位点。其中1.4kb片段有两个转录产物,其转录起始点分别位于乙型肝炎病毒DNA序列的276±5％位和821±5％位,第一个转录起始点与已报道的乙型肝炎病毒核心... 详细信息

自adr亚型乙型肝炎病毒DNA重组质粒中获得两个DNA片段,用体外转录方法研究启动子的位点。其中1.4kb片段有两个转录产物,其转录起始点分别位于乙型肝炎病毒DNA序列的276±5％位和821±5％位,第一个转录起始点与已报道的乙型肝炎病毒核心抗原基因上游启动子位置一致,第二个转录起始点在888位p基因的起始密码子上游。0.8kb片段自校心抗原结构基因起始密码子ATG以下的序列开始,不含有已知的调控序列,其708±5％核苷酸长的RNA产物,根据其长度计算共转录起始点位于乙型肝炎病毒DNA序列588±5％位,与此位置相关的下游ATG密码子位于677位。

关键词：乙型肝炎病毒 DNA p基因转录

棉花半胱氨酸蛋白酶基因的克隆和表达特性分析

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科学通报 2004年第22期49卷 2318-2323页

作者：沈法富喻树迅韩秀兰范述丽山东农业大学农学院中国农业科学院棉花研究所安阳455112

根据不同植物编码半胱氨酸蛋白酶基因的保守序列，设计兼并引物，通过pCR和RACE技术，从辽棉9号衰老叶片中克隆了编码半胱氨酸蛋白酶的cDNA，其相应的基因命名为Ghcysp，该基因序列的长度为1368bp，包含一个1034bp的可读框，编码344个... 详细信息

根据不同植物编码半胱氨酸蛋白酶基因的保守序列，设计兼并引物，通过pCR和RACE技术，从辽棉9号衰老叶片中克隆了编码半胱氨酸蛋白酶的cDNA，其相应的基因命名为Ghcysp，该基因序列的长度为1368bp，包含一个1034bp的可读框，编码344个氯基酸，分子量为37．88kD，等电点为4．80，数据分析结果显示，该蛋白质由1个19个氨基酸残基组成的信号肽和3个酶活性催化反应中心组成，是一个跨膜蛋白质，位于液胞摸上，Ghcysp蛋白质与其他植物半胱氨酸蛋白酶的氯基酸同源性为67％～82％，Nonhem杂交结果表明，在棉花衰老的根、脱落的花、下胚轴、胚珠和幼叶中，Ghcysp基因不表达，在棉花的衰老叶片中Ghcysp基因表达量高。

关键词：半胱氨酸蛋白酶衰老 p基因酶基因老叶表达蛋白质棉花叶片幼叶

检测牛副流感病毒3型恒温隔绝式荧光RT-pCR方法的建立及应用

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中国兽医学报 2023年第5期43卷 901-907页

作者：任云鑫汤承岳华西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 青藏高原动物遗传资源保护与利用教育部重点实验室四川成都610041

牛副流感病毒3型(bovine parainfluenza virus type 3,BpIV3)是引起牛呼吸道疾病综合征(bovine respiratory disease syndrome,BRDC)的重要病原,为建立一个基于恒温隔绝式RT-pCR(insulated isothermal RT-pCR,iiRT-pCR)的方法实现现场检测BpIV3,本研究根据BpIV3 p基因的保守区域,设计合成引物和探针、优化检测体系和预混检测试剂,成功建立了能够检测BpIV3 A,B和C 3种基因型的iiRT-pCR方法。该方法只能特异性检出BpIV3,而对牛冠状病毒、牛呼吸道合胞体病毒、牛病毒性腹泻病毒、牛传染性鼻气管炎病毒、牛腺病毒3型、牛鼻病毒、多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌和牛支原体等无关病原不检出。敏感性试验结果显示该方法对构建的重组质粒阳性标准品的检测下限为4.23 copies/μL。重复性结果显示,批内和批间的变异系数分别为1.37%~1.73%和2.16%~2.58%。采用建立的iiRT-pCR方法和报道的2种TaqMan-MGB荧光定量RT-pCR方法对2020-2021年采集自我国内蒙古、河南、宁夏、山西、四川和福建6个省的141份患BRDC肉牛鼻腔棉拭子样本和50份患BRDC牦牛肺脏样本进行检测,iiRT-pCR方法自肉牛样本中检出55份BpIV3阳性(阳性率为39.01%),自牦牛样本中检出22份BpIV3阳性(阳性率为44.00%),而2种TaqMan-MGB荧光定量RT-pCR方法自肉牛样本中分别检出40份和48份BpIV3阳性(阳性率为28.39%和34.04%),自牦牛样本中分别检出15份和19份BpIV3阳性(阳性率为30.00%和38.00%),iiRT-pCR检测结果优于2种TaqMan-MGB荧光定量RT-pCR方法。将优化的各检测试剂预混后配合使用商品化petNAD核酸萃取试剂盒,获得检测结果仅需1 h,可实现BpIV3的现场检测。本研究丰富了国内BpIV3的分子流行病学调查资料,并为BRDC的诊断和防控提供了有力的工具。

关键词：牛副流感病毒3型 p基因恒温隔绝式RT-pCR 现场检测

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人类着色性干皮病G组基因研究进展

广东医学 2012年第24期33卷 3815-3816页

作者：黄均贤冯起校雷朝君李均贤广东医学院附属陈星海医院呼吸内科广东中山528415

随着细胞融合和互补技术的出现,DE WEERD KASTELEIN等[1]发现Xp基因遗传异质性。1979年第1次诊治人类着色性干皮病G组基因（xeroderma pigmentosum group G,XpG）患者,标志着XpG的研究诞生。XpG又叫ERCC5基因（X-ray repair cross-compl... 详细信息

关键词：着色性干皮病 p基因人类遗传异质性细胞融合