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orexina对大鼠内侧内嗅皮层和前额叶皮层深层神经元的作用及其机制研究

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OrexinA对大鼠内侧内嗅皮层和前额叶皮层深层神经元的作用及其机...

作者：张丹重庆医科大学

学位级别：硕士

目的内嗅皮层深层神经元在学习记忆的巩固以及空间认知功能中发挥重要作用。本文主要观察促觉醒肽OrexmA对大鼠内嗅皮层深层神经元的调节作用，并探讨其生理功能和离子机制。方法釆用全细胞膜片钳记录技术，选择内侧内嗅皮层（MEC，... 详细信息

目的内嗅皮层深层神经元在学习记忆的巩固以及空间认知功能中发挥重要作用。本文主要观察促觉醒肽OrexmA对大鼠内嗅皮层深层神经元的调节作用，并探讨其生理功能和离子机制。方法釆用全细胞膜片钳记录技术，选择内侧内嗅皮层（MEC，medial entorhinal cotrex）深层神经元为研究对象，通过加入TTX（ljxM）,CNQX （IO^IM）和AP-V （50^iM）阻断突触前作用，重点研究神经元突触后的离子机制。观察1)加入促觉醒肽orexina （100nM）后神经元的兴奋性变化及全细胞钾电流的变化;2)加入瞬时钾抑制剂4-AP（5mM）分离出持续钾电流，再加入orexina后持续钾电流的变化;3)将细胞外液替换为无钙人工脑脊液，并加入OrexmA后神经元电位的变化;4)灌流Orexin受体1阻断剂SB334867（5^iM）后，orexina是否还能引发神经元兴奋。结果本实验结果如下： 1. orexina对MEC深层神经元兴奋比例为38.7%,不兴奋比例为54.8%,抑制比例为6.5% 在被测的93个内嗅皮层深层神经元中，36个神经元对orexina有明显的兴奋性反应，主要表现为膜电位的去极化伴随动作电位的大量发放,其兴奋细胞所占比例为38.7%;对orexina无反应的神经元51个，所占比例为54.8%;6个神经元加入orexina后出现抑制效应，所占比例为6.5%。 2. orexina通过作用于MEC深层神经元突触后Orexin受体1发挥兴奋神经元作用选取对orexina有兴奋性反应的细胞，灌流Orexin受体1阻断剂SB33486730min后，再次加入同剂量orexina，膜电位的去极化水平（4.066士1.08mV,n=5）显著低于对照组（20.1士8.4mV=，n15,/?＜0.01）。 3. orexina对神经元的兴奋性作用是通过抑制全细胞钾电流中的持续钾电流实现的在TTX,AP-V,CNQX阻断突触前作用和电压钳模式下，给予细胞-60mV?+40mV的步阶电压刺激，步阶幅值为20mV,持续时间500ms。然后加入OrexmA，观察到全细胞钾电流明显减小，差异具有显著性（^＜0.05,n=6）o使用瞬时钾电流阻断剂TEA将持续钾电流分离出来，再加入orexina后，持续钾电流明显减小，说明orexina对神经元的兴奋性作用是通过抑制全细胞钾电流中的持续钾电流来实现的（/?＜0.05,n=6）。 4. orexina对神经元的兴奋性作用需要细胞外钙离子内流将细胞外的正常人工脑脊液（ACSF）替换为无钙的人工脑脊液（C2+a-free ACSF）,加入orexina后，神经元膜电位依然能产生去极目的观察促醒肽orexina是否通过p38-MAPK途径抑制HCN通道，从而兴奋前额叶皮层PL区第V层锥体神经元。方法釆用全细胞膜片钳技术，以前额叶皮层PL区第V层锥体神经元为研究对象，记录对orexina起兴奋反应神经元的Ih电流，并观察orexina对兴奋神经元的HCN通道的影响，然后分别加入p38-MAPK阻断剂SB203580（IO^iM）和激活剂Anisomycin （20^iM）,观察orexina对HCN通道的影响。结果实验结果如下： 1. orexina可以通过抑制HCN通道，兴奋前额叶皮层PL区第V化反应（13.18±1.52mV,n=7）,但较之正常情况下（20.11±8.38mV,n=15）膜电位去极化幅度明显减小、p〈0.05)。说明钙离子可能部分参与了orexina对神经元的兴奋性效应。结论内侧内嗅皮层深层神经元对促觉醒肽OrexmA的反应具有多样性，其中主要以对orexina不敏感神经元为主,其次是对orexina起兴奋反应的神经元，起抑制反应神经元极少。orexina兴奋该区域神经元主要是通过激活Orexin受体1，然后经抑制全细胞钾电流中的持续钾电流和诱发钙离子内流共同实现的。层锥体神经元在加入orexina （400nM）的10个神经元中，其中6个神经元有明显兴奋性效应。在有兴奋性反应的神经元中，均能检测到orexina作用后HCN通道开放所诱发的Ih电流（67.45±10.16pA），与对照组（153.2士25.26pA）相比明显减小（^＜0.01,n=6）o 2.抑制p38-MAPK可以使HCN通道开放所诱发的Ih电流减小，并增强神经元兴奋性在灌流p38-MAPK阻断剂SB203580（IO^iM）的10个神经元中，有7个神经元均能观察到动作电位发放明显增加，且记录到的Ih电流幅度（82.6士9.34pA）和“”sag值（23士.311.32mV）与加阻断剂SB203580前（Ih幅度：162.34士7.25pA;sag值:27.24

关键词： orexina 内嗅皮层兴奋性神经元持续钾电流钙内流前额叶皮层 V层锥体神经元 HCN通道 p38-MAPK

侧脑室注射orexina对大鼠麻醉苏醒的影响

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中国现代医学杂志 2009年第8期19卷 1168-1171页

作者：张旭王东叶建宁贾小兵杨天德第三军医大学附属新桥医院麻醉科重庆400037 第三军医大学附属新桥医院神经内科重庆400037

目的研究侧脑室注射orexina对大鼠麻醉苏醒的影响。方法腹腔注射氯胺酮(75mg/kg)和咪达唑仑(5mg/kg)麻醉大鼠后,侧脑室注射不同剂量orexina,以大鼠翻正反射消失(LRR)持续时间评价麻醉苏醒时间,以共济失调期评价运动功能恢复,4h后进行mor... 详细信息

目的研究侧脑室注射orexina对大鼠麻醉苏醒的影响。方法腹腔注射氯胺酮(75mg/kg)和咪达唑仑(5mg/kg)麻醉大鼠后,侧脑室注射不同剂量orexina,以大鼠翻正反射消失(LRR)持续时间评价麻醉苏醒时间,以共济失调期评价运动功能恢复,4h后进行morris水迷宫实验检测学习记忆功能。结果同对照组相比,高剂量orexina治疗组(4nmol)麻醉大鼠LRR持续时间和共济失调期明显缩短(Porexina治疗组逃逸潜伏期明显缩短(Porexina治疗组(1nmol)差异无显著性。结论侧脑室注射orexina可缩短麻醉苏醒时间,并促进麻醉后运动功能和学习记忆功能恢复。

关键词： orexina 麻醉苏醒学习记忆

癫痫模型大鼠认知功能与海马齿状回神经细胞增殖的变化及orexina的影响机制

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中国老年学杂志 2019年第7期39卷 1714-1717页

作者：王军刘增良刘洋伊超秦向英于海明才艳雪齐齐哈尔医学院附属第二医院神经外科黑龙江齐齐哈尔161000

目的探讨癫痫模型大鼠认知功能与海马齿状回神经细胞增殖的变化及orexina(OXA)的影响机制。方法以癫痫模型大鼠为研究对象,分为对照组及实验组,其中实验组又分为戊四唑(PTZ)组+生理盐水组(1组)、PTZ+OXA组(2组)、细胞外信号调节激酶(ERK... 详细信息

目的探讨癫痫模型大鼠认知功能与海马齿状回神经细胞增殖的变化及orexina(OXA)的影响机制。方法以癫痫模型大鼠为研究对象,分为对照组及实验组,其中实验组又分为戊四唑(PTZ)组+生理盐水组(1组)、PTZ+OXA组(2组)、细胞外信号调节激酶(ERK)1/2抑制剂组,即:PTZ+U0126(3组)及PTZ+U0126+OXA组(4组),采用Morris水迷宫对各组大鼠的认知功能进行检测及采用免疫荧光染色法对海马齿状回BrdU和DCX表达进行观察。结果随着时间的延长,对照组与其余4组的逃避潜伏期均显著缩短(P<0.05)。与对照组比较,1～4组的逃避潜伏期均明显延长,穿越平台次数、平台象限游泳时间均明显减少(P<0.01);与1组比较,2、4组的穿越平台次数、平台象限游泳时间均明显增加(P<0.01),3组的相关指标则明显减少(P<0.01),与1、3、4组比较,2组逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),与2组比较,4组穿越平台次数、平台象限游泳时间明显缩短(P<0.01)。结论癫痫患者存在认知功能降低及海马齿状回神经细胞再生功能异常,OXA可逆转此现象,其机制可能与激活ERK1/2有关。

关键词：癫痫 orexina 认知功能海马齿状回细胞增殖

基于食欲肽orexina/OxR1探讨肝郁脾虚证大鼠食欲—情绪异常机制

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基于食欲肽OrexinA/OxR1探讨肝郁脾虚证大鼠食欲—情绪异常机制

作者：侯雅静北京中医药大学

学位级别：硕士

一、研究目的Orexin中文称为食欲素,是1998年在大鼠下丘脑外侧区(Lateral hypothalamic area,LHA)发现的具有促进动物摄食作用的神经肽类物质,又被命名为Hypocretin[1]。Orexin在脑区具有两个亚型分别是 orexin A(Hypocretin-1)和 orexi... 详细信息

一、研究目的Orexin中文称为食欲素,是1998年在大鼠下丘脑外侧区(Lateral hypothalamic area,LHA)发现的具有促进动物摄食作用的神经肽类物质,又被命名为Hypocretin[1]。Orexin在脑区具有两个亚型分别是 orexin A(Hypocretin-1)和 orexin B(hypocretin-2),orexina含33个氨基酸残基,OrexinB含28个氨基酸残基,两者都是前orexin原(含130个氨基酸残基)酶解后的生物活性产物[3]。与Orexin相匹配的受体有两个亚型分别为OxR1,OxR2。Orexin通过激活两种G蛋白偶联受体进行工作,Orexin A对两种受体的亲和力相同但对OxR1的亲和力是orexin B的2～3倍,OrexinB则主要作用于OxR2。食欲肽神经元除了参与调节睡眠/觉醒状态,同时也参与喂养行为,情绪和奖励过程。食欲素缺乏会导致能量稳态的异常,应激相关行为学变化和奖励系统反馈失调。Orexin神经元与下丘脑细胞核团和外周相互联系,提示我们Orexin系统在能量代谢及情绪、应激相关行为学表现中起着重要作用。本课题旨在观察orexina及其受体OxR1在肝郁脾虚证抑郁模型大鼠下丘脑的表达情况及逍遥散的调节作用。对orexina及其受体在下丘脑调控食欲及情绪的系统作用机理进行研究,探索orexina及其受体与肝郁脾虚证候的关系,为肝郁脾虚证候生物学基础的研究提供新的思路。本课题通过慢性束缚应激复制SD大鼠肝郁脾虚模型,从动物行为、宏观表征、客观指标等方面对动物模型进行评价,并观察肝郁脾虚模型大鼠下丘脑内orexina及其受体OxR1的改变及逍遥散的调节作用。以orexina/OxR1的表达为切入点,通过细胞分子生物学技术从下丘脑蛋白和基因表达水平来检测肝郁脾虚证大鼠下丘脑orexina及其受体OxR1的表达情况及逍遥散的干预对其表达的影响,从食欲-情绪中枢调节网络角度出发,研究肝郁脾虚证与下丘脑orexina及受体OxR1表达的关系。二、研究方法在课题组前期实验基础上,实验共用60只SPF级雄性健康SD大鼠,体重范围200～240g,随机分为正常组、模型组、氟西汀组、逍遥散组。将所有动物放于清洁级动物房适应性饲养7天,然后进行后续相关实验。饲养环境及条件:将5只大鼠放入一笼共同饲养,给予大鼠常规饲料及去离子水,室温控制在22±2℃,湿度保持在30%～40%,光照保持正常昼夜节律同时保证饲养环境安静。采用21天慢性束缚应激方法制作肝郁脾虚证大鼠模型。通过大鼠宏观表征、摄食量、体重、糖水偏好实验、旷场实验等对动物模型进行评价。麻醉后,腹主动脉采血,离心后血清用于外周血清orexina浓度Elisa检测。冰上取下丘脑,western blot检测orexina及其受体OxR1的蛋白表达,实时荧光定量PCR检测orexina及其受体OxR1基因的表达。三、研究结果成功复制了肝郁脾证大鼠模型,采用实时荧光定量PCR检测大鼠下丘脑orexina及其受体OxR1的mRNA水平的变化结果,orexina基因各组表达量在肝郁脾虚证候模型大鼠下丘脑整体匀浆中的差异无统计学意义,但模型组orexina基因表达量均值低于其他三组。OxR1基因表达量在四组大鼠中差异明显。同正常组相比,模型组大鼠下丘脑OxR1基因表达量明显低于正常组,差异有统计学意义(Porexina蛋白浓度提示,与正常组大鼠相比,模型组,氟西汀组,逍遥散组大鼠下丘脑orexina浓度均低于正常组大鼠,差异具有统计学意义(Porexina含量无明显差异。WesternBlot法检测下丘脑OxR1蛋白相对含量提示,与模型组大鼠相比,氟西汀组大鼠下丘脑OxR1蛋白相对含量无统计学意义,逍遥散组大鼠下丘脑OxR1蛋白相对含量高于模型组大鼠,差异具有统计学意义(Porexina浓度提示,与正常组相比,模型组血清中orexina的浓度明显低于正常组,差异具有统计学意义(Porexina浓度高于模型组差异具有统计学意义(P<0.05)。四、结论:(1)21天慢性束缚应激方法可以成功、有效制备大鼠肝郁脾虚证候模型。(2)肝郁脾虚证候模型大鼠下丘脑整体

关键词：肝郁脾虚证下丘脑 orexina OxR1 食欲情绪

血浆orexina水平与术中知晓的相关性分析

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护理学报 2014年第17期21卷 54-56页

作者：李向荣王正英李英姿张维金玉珍刘艳春南方医科大学附属深圳市宝安人民医院手术室广东深圳518101 广东医学院附属深圳市西乡人民医院护理部广东深圳518102 广东医学院附属深圳市西乡人民医院手术室广东深圳518102 南方医科大学附属深圳市宝安人民医院普外科广东深圳518101

目的探讨血浆Orexin A水平与全身麻醉术中知晓发生的相关性。方法采用前瞻性配对病例对照研究,共收集术中知晓病例33例,对照病例33例,分别测定两组患者手术当天清晨7:00(术前)、麻醉开始后30 min(全麻后)2个时点的血浆Orexin A水平。比... 详细信息

目的探讨血浆Orexin A水平与全身麻醉术中知晓发生的相关性。方法采用前瞻性配对病例对照研究,共收集术中知晓病例33例,对照病例33例,分别测定两组患者手术当天清晨7:00(术前)、麻醉开始后30 min(全麻后)2个时点的血浆Orexin A水平。比较血浆Orexin A水平的组间差异,分析病例组中术前血浆Orexin A水平与术中知晓病情分级的相关性。结果与术前血浆Orexin A水平比较,病例组及对照组全麻后的血浆Orexin A水平均有明显下降,差异有统计学意义,病例组Orexin A水平麻醉后的下降程度较对照组小,差异有统计学意义。术前、全麻后病例组与对照组的血浆Orexin A水平差异均有统计学意义。Spearman等级相关分析表明,病例组术前血浆Orexin A水平与术中知晓的病情分度成正相关(r=0.695,P=0.031)。结论血浆Orexin A水平升高与术中知晓的发生以及术中知晓的病情分级有关,Orexin系统可能在术中知晓发生的病理生理中起着重要作用,检测血浆Orexin A水平可对预防术中知晓及其相关创伤性应激后障碍提供积极的指导意义。

关键词： orexina 术中知晓相关性全身麻醉

The effect of orexina on respiratory regulation in adult rat

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The effect of orexinA on respiratory regulation in adult rat

The expression and distribution of orexina and orexin type 1 receptor in medulla of neonatal and adult SD rats

中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议

作者： Sui NING,Na-Na SONG,Zi-Bing LIU,Li LI,Da-Nian ZHU,Lin-Lin SHEN Department.of Physiology and Pathophysiology,Shanghai Medical College,Fudan University,Shanghai,200032

＜正＞Purpose Orexins are novel hypothalamic neuropeptides and control multiple physiological functions.The possible participation of orexins in respiratory regulation has not been fully documented.The present study was to investigate the effect of orexina microinjected into pre-B＆ouml;tzinger complex on respiratory regulation in adult Sprague-Dawley （SD） rats.Methods:Experiments were performed on adult（6-8 week） SD rats.Rats were anesthetized with urethane （700 mg/kg） andα-chloralose（35 mg/kg）.The phrenic nerve discharge（PND）,artery blood pressure（BP） and heart rate （HR） were recorded simultaneously.Integral value of PND and Respiratory rate（RR） were calculated from PND recording. orexina or SB408124（OX 1R antagonist） was microinjected into the pre-B＆ouml;tzinger complex（PBC） in medulla.Results （1） Microinjection of OXA（100μg/ml,0.1μl,n = 12） induced a rise in PND integral value（P＜0.01 vs N.S.） without change of respiratory rate（RR）,mean artery blood pressure（BP） and heart rate（HR）.（2） After microinjecting SB408124（10μg/ml, 0.1μl,n = 6）,PND integral value significantly decreased（P＜0.05 vs N.S.） and other parameters did not change.（3） There was not obviously change in all parameters after microinjection of SB408124（10μg/ml,0.1μl） + OXA（100μg/ml,0.1μl） into PBC（n = 5,P＞0.05 vs N.S.）,however,PND integral value decreased significantly compared to OXA（P＜0.05）.OX1R antagonist attenuated the PND response to orexina,almost totally.Conclusion These results suggest that OXA releases tonically and it enhances intensity of respiratory activity in PBC.Respiratory rate and cardiovascular activities are not significant change with OXA.The effect of endogenous or exogenous OXA was mediated via OX1R in PBC.

关键词： orexina orexin type 1 receptor pre-B（o|¨）tzinger complex rats

来源： cnki会议评论

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The expression and distribution of orexinA and orexin type 1...

The change of orexina levels in chronic obstructive pulmonary disease rats

中国神经科学学会第四次会员代表大会暨第七届全国学术会议

作者： Nana SONG,Sui NING,Zibing LIU,Li LI,Danian ZHU,Linlin SHEN Department of Physiology and Pathophysiology,Shanghai Medical College,Fudan University,Shanghai 200032

Objective:Although the localization of orexin-containing cell bodies is restricted to the hypothalamus,orexin- containing fibers and their receptors are widely distributed in the brain.The present study was to examine the expression of orexina(OXA) and orexin type 1 receptor(OX1R) in medulla of neonatal and adult SD rats.The differential expression of both groups was observed with maturation.Methods(1) Tissue preparation:neonatal(1-5d,n=5) and adult(6-8w,n=5) SD rats were perfused transcardially via the left ventricle with 4%paraformaldehyde in PBS(pH 7.4) under deep anesthesia. After postfixation,30μm thick sections were cut serially on a freezing microtome(Leica CM 1900).(2) Immunohistochemistry: free-floating sections were washed(5 min,3 times) before incubated with 0.3%Triton-100(30 min),0.3%HO(10 min), blocking(goat serum,20 min at 37℃),and incubated with anti-OXA or anti-OX1R antibody(rabbit-anti-rat IgG,1:500,1: 100,both Sigma) overnight at 4℃,and were washed(5 min,3 times) before secondary antibody(bio-goat-anti-rabbit IgG, both Huamei,20 min,37℃),ABC complexation(20 min at 37℃).Then the sections were stained in DAB reagent,pigmentation was controlled under microscope and ended in PBS,adhered on glass slices and mounted with neutro-gum.(3) Image measure:expression and distribution of OXA-like-immunoreactivity(OXA-like-ir) and OX1R-like-immunoreactivity (OX1R-like-ir) were observed and calculated the value of relative optical density(MOD) in the medulla by using software of ImageMeasure.4.Data analysis:Average values(means±SD) for the analyzed variables of MOD were calculated. Statistical significance was considered achieved when P<0.05.Result:Expression of OXA-like-ir fibers and OX1R-likeir neurons was found throughout the medulla of neonatal and adult rats.OXA-like-ir fibers were obvious in the nucleus tractus solitarius(NTS),hypoglossal nucleus(Ⅻ) and ventrolateral medulla(VLM).OX1R-like-ir positive cells were heavily stained in the hypoglossal nucleus(Ⅻ) and ventrolateral medulla(VLM).In theⅫand VLM,re

关键词： orexina orexin type 1 receptor immunohistochemistry medulla rat

来源： cnki会议评论

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The change of orexinA levels in chronic obstructive pulmonar...

Orexin对呼吸活动调节的中枢机制的探索

2008北京国际生理科学学术大会

作者： LIU Zi-Bing SONG Na-Na GENG Wen-Ye JIN Wei-Zhong LI Li ZHU Da-Nian SHEN Lin-Lin* Department of Physiology and Pathophysiology Shanghai Medical College Fudan University Shanghai 200032 China

＜正＞Purpose:Chronic obstructive pulmonary disease（COPD） is characterized by irreversible airflow limitation in the lungs.Smoking is one of the amongst major risk factors for the development of COPD.Airway obstruction and airway hyperresponsiveness are important features of COPD.The protease-antiprotease imbalance and the oxidant-antioxidant imbalance cause airway inflammation and destruction.The neurotransmitters related to these characteristics may contribute to development of COPD pathology.Recently,a novel group of neuropeptides known as orexin has been implicated in the regulation of breathing.The present study was to investigate the change of orexina levels in chronic obstructive pulmonary disease rats.Methods:Sprague-Dawley rats were exposed in a wood cage with smoking（1 h/twice/day） for 8-l0 weeks.There is a need for pulmonary pathology and function test to verify the COPD model.The orexina in plasma and tissue homogenate（lung,hypothalamus and medulla oblongata） were detected by radioimmunoassay.Results:Plasma orexina levels in COPD group were lower compared with that in control group[（11.06±1.26） pg/mL vs（15.27±1.05） pg/mL,P＜0.05].There was not significant decrease at orexina levels of pulmonary homogenate in COPD group compared with control group（P＞0.05）. However,orexina levels of hypothalamus and medulla oblongata showed significantly higher concentration in COPD group than that in control group[（215.20±21.97） pg/mL vs（78.13±21.81） pg/mL,P＜0.01 and（217.30±8.59） pg/mL vs（70.26±12.27） pg/mL,P＜0.001].Conclusions:There are different changes of orexina levels in central or peripheral in COPD group.These results suggested that the orexina might be involved in breathing control in COPD pathology.Future physiological studies should be designed to further investigate these differences.

关键词： chronic obstructive pulmonary disease orexina radioimmunoassay

来源： cnki会议评论

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Orexin对呼吸活动调节的中枢机制的探索

作者：宁穗复旦大学

学位级别：硕士

目的延髓是基本呼吸中枢的所在部位,在呼吸节律的产生过程中发挥着重要的作用。增食因子(orexins)被认为是下丘脑产生的具有重要作用的神经肽,在机体内对摄食、能量代谢、内分泌、心血管、呼吸、睡眠-觉醒和觉醒维持等多种生理活动发挥... 详细信息

目的延髓是基本呼吸中枢的所在部位,在呼吸节律的产生过程中发挥着重要的作用。增食因子(orexins)被认为是下丘脑产生的具有重要作用的神经肽,在机体内对摄食、能量代谢、内分泌、心血管、呼吸、睡眠-觉醒和觉醒维持等多种生理活动发挥调控作用。本研究旨在观察增食因子A(orexina,OXA)和增食因子1型受体(orexin type 1 receptor,OXR)在大鼠延髓的分布,探索OXA对呼吸活动的影响及其中枢作用机制,并初步分析OXA与影响呼吸活动的ATP之间的关系。方法(1)实验用新生(1～5d)和成年(6～8w)SD大鼠,雌雄不计,取延髓部位,用免疫组织化学方法和图像分析技术,观察和比较OXA、OXR在大鼠延髓的分布。(2)取成年SD大鼠(250～350g),乌拉坦(700mg/kg)和α-氯醛糖(35mg/kg)混合腹腔麻醉,行气管插管、颈外静脉插管、股动脉插管,游离一侧膈神经并穿线标记,缝合切口。将动物俯卧位固定在立体定位仪上。暴露侧脑室对应的颅骨表面及延髓背侧表面。将膈神经置于双极铂金电极上记录膈神经放电活动。分别在侧脑室微量注射OXA或ATP,观察膈神经放电活动、血压和心率的变化;在前包钦格复合体分别微量注射OXA、SB408124(OXR阻断剂)、SB408124+OXA,观察膈神经放电活动、血压和心率的变化;在前包钦格复合体分别微量注射ATP、NF279(ATP的受体阻断剂)+ATP、NF279+OXA,观察膈神经放电活动、血压、心率的变化。结果(1) OXA免疫反应阳性纤维和OXR免疫反应阳性细胞在新生和成年SD大鼠延髓有广泛分布。OXA免疫反应阳性纤维在孤束核(nucleus tractussolitarius,NTS)、舌下神经核(hypoglossal nucleus,Ⅻ)和延髓腹外侧区(ventrolateral medulla,VLM)分布比较明显。OXR免疫反应阳性细胞在Ⅻ和VLM两个区域染色更明显。在这两个区域,新生鼠组的OXR免疫反应阳性细胞的相对光密度值均低于成年鼠组(P＜0.001)。(2)大鼠侧脑室微量注射OXA(10μg/ml,5μl),膈神经放电活动增强、动脉血压升高、心率加快。随着OXA浓度的增加,膈神经放电活动逐渐增强。10、100、1000μg/ml三个浓度组的膈神经放电强度分别与生理盐水对照组相比都有统计意义(P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001)。三个浓度组的呼吸频率增加,但与生理盐水对照组相比无统计学意义。三个浓度组的心率都有加快,两个高浓度组的心率与生理盐水对照组相比有统计意义(P＜0.01)。三个浓度组平均动脉压都有增加,两个高浓度组的平均动脉压与生理盐水对照组相比有统计意义(P＜0.05,P＜0.01)。(3)大鼠侧脑室注射ATP(1mM,5μl),膈神经放电活动增强,动脉血压升高、心率加快。随着ATP浓度的加大,膈神经放电活动逐渐增强,1、10、100mM三个浓度组的膈神经放电活动的强度分别与生理盐水对照组相比,100mM浓度组的有统计意义(P＜0.05)。三个浓度组的呼吸频率没有发生明显的变化,平均动脉压虽有增加,但无统计意义。三个浓度组的心率都有增加,两个高浓度组的心率与生理盐水对照组相比有统计意义(P＜0.05)。(4)微量注射OXA(100μg/ml,0.1μl)到前包钦格复合体,膈神经放电活动增强,血压、心率变化不明显。膈神经放电活动的强度与生理盐水对照组相比有统计意义(P＜0.01)。而平均动脉压、心率和呼吸频率与生理盐水对照组相比都无统计意义。微量注射SB408124(10μg/ml,0.1μl)到前包钦格复合体,膈神经放电活动减弱,血压、心率变化不明显。膈神经放电活动的强度与生理盐水对照组相比有统计意义(P＜0.05)。平均动脉压、心率和呼吸频率与生理盐水对照组相比都无统计意义。先后微量注射SB408124(10μg/ml,0.1μl)和OXA(100μg/ml,0.1μl)到前包钦格复合体,膈神经放电活动、动脉血压和心率都没有明显的变化,膈神经放电活动的强度与生理盐水对照组相比无统计差异,与单独注射OXA(100μg/ml,0.1μl)组相比有统计意义(P＜0.001)。平均动脉压、心率和呼吸频率与生理盐水对照组及单独注射OXA(100μg/ml,0.1μl)组相比都无统计意义。先后微量注射NF279(10mM,0.1μl)和OXA(100μg/ml,0.1μl)到前包钦格复合体,膈神经放电活动,动脉血压和心率变化不明显,膈神经放电活动的强度与生理盐水对照组相比无统计差异,与单独注射OXA(100μg/ml,0.1μl)组相比有统计意义(P＜0.01)。平均动脉压、心率和呼吸频率与生理盐水对照组及单独注射OXA(100μg/ml,0.1μl)组相比都无统计意义。前包钦格复合体微量注射ATP(10mM,0.1μl),膈神经放电活动

关键词： orexina OX1R ATP P2X受体免疫组织化学大鼠延髓侧脑室前包钦格复合体