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湖北省暨武汉市微生物学会分析微生物专业委员会第十届第五次学术会议

作者：程文娟彭少华武汉大学人民医院检验科

目的探讨多重PCR(multiplex polymerase chain reaction)方法用于同时检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)及其对氨基糖苷类抗生素耐药性的可行性。方法优化多重PCR条件,同时检测金黄色葡... 详细信息

目的探讨多重PCR(multiplex polymerase chain reaction)方法用于同时检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)及其对氨基糖苷类抗生素耐药性的可行性。方法优化多重PCR条件,同时检测金黄色葡萄球菌(SA)的三个基因。应用此方法检测212株临床分离菌株,用盲法试验检测14株未知菌,并进行统计学分析和评价。结果多重PCR受多种因素影响,其产物经电泳、测序、分析为目的片断。以传统方法鉴定结果为金标准,Kappa检验表明多重PCR鉴定结果与金标准无显著性差异,一致性好,阳性似然比和阴性似然比均好。讨论多重PCR可用于检测MSSA、MRSA、对氨基糖苷类抗生素耐药的MRSA,不宜用于检测对氨基糖苷类抗生素耐药的MSSA。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌多重PCR mecA基因 nuc基因 aac(6′)/aph(2″)基因

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交叉引物恒温扩增技术快速检测金黄色葡萄球菌

引用

中国卫生检验杂志 2019年第11期29卷 1303-1305,1308页

作者：陈欢黄世旺徐昌平沈伟伟毛争争台州市椒江区疾病预防控制中心浙江台州318000 杭州市江干区疾病预防控制中心浙江杭州310004 浙江省疾病预防控制中心浙江杭州310051 台州市疾病预防控制中心浙江台州318000

目的建立一种快速、特异、灵敏的交叉引物恒温扩增(crossing priming amplification,CPA)技术检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)耐热核酸酶基因(nuc)。方法从GenBank上下载多条金黄色葡萄球菌nuc基因序列,在其保守区域设计... 详细信息

目的建立一种快速、特异、灵敏的交叉引物恒温扩增(crossing priming amplification,CPA)技术检测金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)耐热核酸酶基因(nuc)。方法从GenBank上下载多条金黄色葡萄球菌nuc基因序列,在其保守区域设计CPA引物及探针,建立CPA恒温扩增快速检测技术,并对反应条件进行优化,同时验证方法的特异性和敏感性。结果本方法对金黄色葡萄球菌检测具有高度特异性,对构建的阳性质粒DNA灵敏度达到1.0×10^1 copy/μl,对12份临床标本的检测阳性率与荧光PCR法相同,同时CPA法实验过程操作简便、反应迅速,且无需使用昂贵仪器,最快可在40 min内出检测结果。结论本研究建立的CPA法快速、简便、灵敏、特异,适用于金黄色葡萄球菌核酸快速检测。

关键词：金黄色葡萄球菌交叉引物恒温扩增 nuc基因

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