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一种简便的热启动PCR方法扩增金葡菌nuc基因

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畜牧兽医科技信息 2012年第8期28卷 43-44页

作者：李向勇鲁清桃刘娟胡志刚湖南长沙生态动物园长沙410119

本文采用低熔点琼脂糖包被Taq酶热启动聚合酶链式反应(PCR)扩增出金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因,该法与普通PCR扩增效果无异且具有避免非特应性扩增等特点。同时研究了不同退火温度对扩增反应结果的影响,确定了51.7℃为最佳退火温... 详细信息

本文采用低熔点琼脂糖包被Taq酶热启动聚合酶链式反应(PCR)扩增出金黄色葡萄球菌耐热核酸酶(nuc)基因,该法与普通PCR扩增效果无异且具有避免非特应性扩增等特点。同时研究了不同退火温度对扩增反应结果的影响,确定了51.7℃为最佳退火温度。为进一步研究热启动PCR方法提供了依据。

关键词：热启动PCR 金黄色葡萄球菌 nuc基因

金黄色葡萄球菌nuc基因特异性核酸探针的制备及应用

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中国比较医学杂志 2004年第5期14卷 301-303页

作者：高正琴李厚达贺争鸣中国药品生物制品检定所北京100050 扬州大学扬州225009

目的　建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法　将重组质粒pGEM nuc中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果　核酸探针与金黄色葡... 详细信息

目的　建立核酸探针检测实验动物金黄色葡萄球菌的方法。方法　将重组质粒pGEM nuc中金黄色葡萄球菌nuc基因特异性片段酶切回收 ,经生物素标记后作为核酸斑点杂交试验探针 ,对细菌菌株及临床样品进行了检测。结果　核酸探针与金黄色葡萄球菌DNA呈杂交阳性 ,而与表皮葡萄球菌、化脓性链球菌、大肠埃希菌等其他细菌DNA呈杂交阴性 ,斑点杂交检测的灵敏度为 1pg基因组DNA。用斑点杂交试验和PCR对 32 2份SPF小鼠的临床样品进行了检测 ,检出率为 3 1% (10 /32 2 ) ,符合率为 10 0 % ,与细菌学检查的结果相一致。结论　建立的DNA探针检测金黄色葡萄球菌方法具有高度的特异性和敏感性 ,且较快速 ,可用于实验动物金黄色葡萄球菌的监测。

关键词：金黄色葡萄球菌 nuc基因特异性核酸探针制备检测

MecA、nuc基因在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌检测中的应用

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转化医学杂志 2017年第3期6卷 157-159页

作者：郭建巍齐文峰郝秀红李文军陈昌国张云马志家陈秋圆赵强元海军总医院检验科北京100048

目的通过对180株金黄色葡萄球菌临床分离株MecA、nuc基因的检测,以期选择出一种适合临床的并能简便、快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的方法。方法细菌鉴定及药敏采用全自... 详细信息

目的通过对180株金黄色葡萄球菌临床分离株MecA、nuc基因的检测,以期选择出一种适合临床的并能简便、快速、准确检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的方法。方法细菌鉴定及药敏采用全自动细菌鉴定和药敏分析仪。MecA、nuc基因检测采用荧光定量聚合酶链反应(fluorescence quantitative polymerase chain reaction,FQ-PCR)法。结果 FQ-PCR对180株金黄色葡萄球菌MecA、nuc基因检出率为75.0%,全自动细菌鉴定和药敏分析仪对180株金黄色葡萄球菌的MRSA检出率为72.8%,2种检测方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。全自动细菌鉴定和药敏分析仪对MRSA的检测正确率为94.8%。结论 FQ-PCR检测MRSA正确率高,只需要1~2 h即可完成。该方法快速、简便、准确,值得推广应用。

关键词：耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 MecA基因 nuc基因荧光定量聚合酶链反应全自动细菌鉴定和药敏分析仪

PCR扩增nuc基因快速检测金黄色葡萄球菌

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解放军医学高等专科学校学报 1997年第4期25卷 36-37页

作者：李晓娣袁忻叶明亮黄萍公衍文济南市济南军区总医院

为快速检测标本中金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增金葡菌ｎｕｃ基因，并与培养法进行比较分析。结果只有金葡菌扩增出一条特异的ＤＮＡ条带，平行对照的其它菌株均为阴性。说明用ＰＣＲ检测金葡菌... 详细信息

为快速检测标本中金黄色葡萄球菌（以下简称金葡菌）。应用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增金葡菌ｎｕｃ基因，并与培养法进行比较分析。结果只有金葡菌扩增出一条特异的ＤＮＡ条带，平行对照的其它菌株均为阴性。说明用ＰＣＲ检测金葡菌的方法简便、快速、特异、敏感。

关键词：聚合酶链反应金黄色葡萄球菌 nuc基因

基于nuc基因的环介导等温核酸扩增可视化技术检测食源性金黄色葡萄球菌

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中国动物传染病学报 2023年第5期31卷 108-113页

作者：邹作成王西刘雪兰胡仲皓田祥强何晓花杜晓莉王佳玲李柯刘浩洋嵇辛勤胡青海贵州大学动物科学学院贵阳550025 中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 安徽农业大学动物科技学院合肥230036

金黄色葡萄球菌食物中毒主要是由食用被金黄色葡萄球菌及其所产生的肠毒素污染的奶、肉、蛋、糕点、剩饭等蛋白或淀粉含量丰富的食品引起,快速精准的金黄色葡萄球菌检测技术对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究以nuc基因... 详细信息

金黄色葡萄球菌食物中毒主要是由食用被金黄色葡萄球菌及其所产生的肠毒素污染的奶、肉、蛋、糕点、剩饭等蛋白或淀粉含量丰富的食品引起,快速精准的金黄色葡萄球菌检测技术对于保障人们的健康和食品安全具有重要意义。本研究以nuc基因作为检测靶基因,建立了一种检测金黄色葡萄球菌的环介导等温核酸扩增(LAMP)技术。该方法检测金黄色葡萄球菌基因组DNA样品为阳性,而对单细胞增生李斯特菌、鼠伤寒沙门菌、肠出血性大肠杆菌、空肠弯曲菌、小肠结肠炎耶尔森菌和产气荚膜梭菌等食源性致病菌和猪链球菌、胸膜肺炎放线杆菌和多杀性巴氏杆菌等猪源细菌基因组DNA检测结果均为阴性,表明建立的LAMP方15法具有较好的特异性。灵敏度的检测结果表明,LAMP的检测限可达5.6×10^(1) CFU/mL,而常规PCR的检测限为5.6×10^(5) CFU/mL,即LAMP的检测灵敏度比常规PCR高出10000倍。临床样品的检测结果表明,50份猪肉样品中有4份检出金黄色葡萄球菌。本研究为食源性金黄色葡萄球菌提供了一种快速、可视化、特异性好、灵敏度高、成本低的LAMP检测方法。

关键词：金黄色葡萄球菌 nuc基因环介导等温核酸扩增技术可视化

重组酶介导链核酸扩增技术联合双重核酸侧流试纸快速检测金黄色葡萄球菌及mecA耐药基因

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中国热带医学 2024年

作者：郭庆昕朱宗林王佳稳杨会勇饶华春泉州市正骨医院检验科晋江市医院华侨大学生物医学院/医学院

目的为缩短金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）检测时间，本研究建立一种基于重组酶介导链核酸扩增（Recombinase aided amplification，RAA）联合双重核酸侧流试纸条（lateral flow strips，LFS），快速检测SA耐热核酸酶nu... 详细信息

目的为缩短金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，SA）检测时间，本研究建立一种基于重组酶介导链核酸扩增（Recombinase aided amplification，RAA）联合双重核酸侧流试纸条（lateral flow strips，LFS），快速检测SA耐热核酸酶nuc基因和mecA耐药基因。方法首先在SA基因组中耐热核酸酶nuc基因和葡萄球菌SCCmec可移动遗传元件上mecA基因的保守序列上设计并筛选高效的RAA引物和探针，然后验证RAA-LFS同时检测nuc基因和mecA基因的反应温度和时间，并进行灵敏度、特异性以及与荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）比较，最后采用两家三甲医院的52瓶非重复阳性血培养的进行前瞻性评价。结果 RAA-LFS在20-45°C下反应15-30min可同时扩增nuc和mecA基因，检测下限可达102CFU /ml，50株临床分离的非SA菌株验证nuc和mecA基因的特异性为100%；本实验室保存的30株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（Methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）和30株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（Methicillin-sensitive Staphylococcus aureus，MSSA）nuc基因均阳性，mecA基因共有30株阳性，与qPCR的检测阳性符合率和阴性符合率均为100%，一致性检验Kappa值为1 ；在52瓶的阳性血培养前瞻性分析中16株MSSA和6株MRSA与梅里埃VITEK-2 compact微生物检测系统的鉴定和药敏试验检测结果符合率100%。结论本研究将核酸释放剂、RAA、核酸侧流试纸三项技术组合建立了一种可应用于菌落或阳性血培养瓶检测SA及mecA耐药基因，操作简便、快速、敏感性高的检测方法。

关键词：金黄色葡萄球菌重组酶介导链核酸扩增核酸侧流试纸条 nuc基因 mecA基因

nuc和mecA基因在金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性检测中的初步应用

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石河子大学学报（自然科学版） 2018年第3期36卷 287-292页

作者：刘莉李变利路子玉马伟玲纪昌刘国辉张红梅贺亚玲吴万贵曹旭东石河子大学医学院新疆石河子832000 石河子经济技术开发区医院新疆石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院检验科新疆石河子832000

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法... 详细信息

目的为获得金黄色葡萄球菌对甲氧西林的耐药信息,评估通过PCR扩增nuc基因、mecA基因检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。方法收集获得63株临床分离鉴定的金黄色葡萄球菌,采用传统药敏检测方法进行菌株药敏测试;再用PCR方法检测菌株是否携带nuc基因和mecA基因,以传统药敏检测结果为参照,评估用PCR扩增技术检测金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性的可行性。结果 1.样本菌株中有24株为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant Staphyococcus aureus,MRSA),39株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillin-sensitive Staphyococcus aureus,MSSA)。来自重症医学科的分离株中MRSA数量较多。2.样本菌株nuc基因携带率为85.7%,其中nuc基因在MRSA菌株中的携带率为87.50%,在MSSA菌株中携带率为84.62%;3.样本菌株mecA基因的携带率为19.05%,其中MRSA菌株的mecA基因携带率为50.0%,MSSA中均不携带mecA基因。来自重症医学科的MRSA中同时携带mecA基因和nuc基因的比例为77.78%。结论用PCR技术检测nuc基因、mecA基因来快速鉴定金黄色葡萄球菌及其甲氧西林耐药性可能存在一定比例的误诊结果。

关键词：耐甲氧西林葡萄球菌药敏检测 nuc基因 mecA基因

恒温隔绝式聚合酶链式反应检测食品中金黄色葡萄球菌

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食品科学 2022年第2期43卷 339-345页

作者：李传友曾宝锋赵燕英汤承陈娟刘骥朱成林曾英杰于基成唐俊妮西南民族大学食品科学与技术学院四川成都610041 西南民族大学畜牧兽医学院四川成都610041 大连民族大学生物技术与资源利用教育部重点实验室沈阳大连116600

建立一种恒温隔绝式聚合酶链式反应(insulated isothermal polymerase chain reaction,iiPCR)检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。根据nuc基因设计特异性引物、探针,并探索针对食品样品快速提取金黄色葡萄球菌模板DNA的方法;通过优化引物... 详细信息

建立一种恒温隔绝式聚合酶链式反应(insulated isothermal polymerase chain reaction,iiPCR)检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。根据nuc基因设计特异性引物、探针,并探索针对食品样品快速提取金黄色葡萄球菌模板DNA的方法;通过优化引物、探针及模板的用量,对iiPCR的特异性、灵敏度、稳定性进行评价,并利用该方法和传统PCR方法对人工污染样品和实际采集食品样品中的金黄色葡萄球菌进行检测和比较。结果表明:水浴法因操作简便、耗时短、仪器要求不高,适合快速提取模板DNA;建立的iiPCR具有特异性强、灵敏度高、稳定性好的特点,且与其他菌无交叉反应;对人工污染猪肉样品和牛奶样品中的金黄色葡萄球菌,iiPCR方法可在培养至第6小时完成检测,检出限为10^(3) CFU/mL和10^(2) CFU/mL,传统PCR方法8 h后完成检测,检出限为10^(5) CFU/mL;针对实际采集的食物样品,验证实验表明iiPCR方法在培养至第6小时的检出结果与传统PCR在培养至第12小时以及传统培养方法培养至第16小时的检出结果一致。证明建立的iiPCR方法能够更快速准确检测食品中金黄色葡萄球菌。

关键词：恒温隔绝式聚合酶链式反应金黄色葡萄球菌 DNA提取 nuc基因快速检测

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HDA法用于检测肉中金黄色葡萄球菌的研究

现代食品科技 2014年第1期30卷 185-189页

作者：周巍张薇吴涛李永波田浩赵勇张岩张志胜河北农业大学食品科技学院河北保定071000 河北省食品盾号监督检验研究院河北石家庄050091

本文研究了猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌的依赖解旋酶恒温基因扩增检测方法(HDA法),以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因为目的基因,设计一对特异性引物,优化反应条件UvrD helicase、T4 gp32的浓度,通过赖解旋酶恒温基因扩增... 详细信息

本文研究了猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌的依赖解旋酶恒温基因扩增检测方法(HDA法),以金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因为目的基因,设计一对特异性引物,优化反应条件UvrD helicase、T4 gp32的浓度,通过赖解旋酶恒温基因扩增方法直接检测猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌,扩增产物通过电泳进行检测。结果表明,HDA法检测肉中金黄色葡萄球菌的特异性强,试验涉及的其它菌株未发生扩增,只有金黄色葡萄球菌得到与设计序列长度一致的216 bp基因片段,检出限为101CFU/g,优化确定UvrD helicase、T4 gp32的终浓度分别为0.1μg、5.0μg,该方法用于检测猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌的灵敏度高,耗时短,为猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉中金黄色葡萄球菌的快速检测提供了新的方法,也为其它食品中金黄色葡萄球菌的快速检测奠定了基础。

关键词：解旋酶恒温基因扩增检测方法肉金黄色葡萄球菌检测 nuc基因